一、新疆出血热媒介宿主调查总结（论文文献综述）
凌珏[1]（2021）在《云南玉溪地区虫媒病毒调查及动物血清流行病学研究》文中认为[目的]1.了解云南省中部玉溪地区虫媒病毒的种类、分布和流行情况,为该地区蚊传虫媒病毒的防治提供依据。2.了解玉溪地区通海县2株乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）全基因组分子特征和遗传进化特征,为该地区乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）的预防及疫苗接种提供资料。3.了解玉溪地区家养动物中虫媒病毒感染情况。[方法]1.2015年在云南省玉溪地区的通海县、华宁县、江川区、澄江县使用诱蚊灯捕捉蚊虫,蚊虫研磨后接种BHK-21和C6/36细胞进行病毒分离,提取阳性分离物中总RNA、反转录合成第一链cDNA,分别使用多对虫媒病毒属通用引物或病毒特异引物进行RT-PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳分析,阳性产物送测序公司进行测序,采用DNAstar、Mega X等生物信息学软件进行序列分析。2.参照基因I型JEV全基因组序列,使用Primer 5.0软件设计一套JEV全基因序列引物,对通海县2株JEV（HL-3、HL-32）进行RT-PCR扩增和测序,使用 DNAstar 中 Seqman、Megalign,GeneDoc,MegaX 等软件进行序列拼接、同源性分析、差异位点和系统进化分析。3.采用微量中和实验方法（TCID-50）对2019和2020年在玉溪通海县、华宁县和易门县等地区采集家养动物血清进行JEV（HL-3株）和盖塔病毒（Getah virus,GETV）（NM20株）中和抗体检测。[结 果]1.在玉溪4个县区共采集蚊子13050只,分261批进行研磨,95批在金黄色地鼠肾细胞（BHK-21细胞）和/或白纹伊蚊细胞（C6/36细胞）上产生不同的细胞病变,采用多种虫媒病毒引物进行病毒鉴定,鉴定结果显示它们为JEV、版纳病毒（Bannavirus,BAV）、GETV、西藏环状病毒（Tibetorbivirus,TIBOV）、南定病毒（Nam Dinh virus,NDiV）、阿卡斑病毒（Akabane virus,AKAV）、Ngewotan 病毒（Negewotan,NWTV）、广平病毒（Quangbinhvirus,QBV）和淡色库蚊浓核病毒（Culexpipienspallensdensovirus,CppDNV）9 种病毒,其中通海县存在6种病毒35株,华宁县存在6种病毒88株、澄江县存在2种病毒5株,江川区未分离获得病毒。TIBOV和NWTV在3个县区均分离到,NDiV在2个县区分离到,JEV、AKAV和QBV仅在通海县分离到,BAV、GETV和CppDNV仅在华宁县分离到。2.对在通海县分离的2株JEV（HL-3、HL-32）采用16对引物进行扩增,测序、拼接后均获得长度为10965个核苷酸（nt）的基因序列,包含有1个10299nt开放读码框,编码3432个氨基酸（aa）。HL-3、HL-32 2株新分离病毒与基因Ⅰ型JEV核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为93.6%～98.9%和98.0%～99.7%,而与其基因型（Ⅱ型～V型）JEV核苷酸同源性均在90%以下,氨基酸同源性在98.0%以下。遗传进化分析结果显示HL-3、HL-32与基因I-b型JEV位于同一进化簇中,提示这两株新分离病毒为基因I-b型JEV;进一步分析发现2株新分离病毒与云南省近年来流行JEV毒株处在同一较小进化分支内,提示它们之间遗传进化关系较为密切。2毒株全基因序列与JE减毒活疫苗株SA14-14-2存在56个氨基酸差异位点,其中E基因上有12个氨基酸差异位点（结构域12个、结构域Ⅱ7个、结构域Ⅲ2个、结构域外1个）,在8个与毒力相关的位点（E107,E138,E176,E177,E264,E279,E315,E439）上,有6个差异位点。3.在华宁县、通海县、易门县共采集275份猪牛羊血清。HL-3株JEV毒价为10-4.5/100 μL,NM20株GETV毒价为10-7.3/100μL,所有孔未出现细胞保护,玉溪地区采集的血清JEV和GETV中和抗体均为阴性。[结论]1.玉溪通海县、华宁县、江川区、澄江县4个县区分离鉴定出9种虫媒病毒共128株,其分布于不同区县,且各区县流行的虫媒病毒种类不同,表明该地虫媒病毒种类繁多,分布广泛。2.云南省通海县分离的2株JEV与基因Ⅰ型JEV核苷酸和氨基酸同源性最高,且与基因Ⅰ型中的基因Ⅰ-b型毒株位于同一进化簇,为基因Ⅰ-b型JEV。2毒株在E基因上与毒力相关的关键位点中有2个位点发生突变,但结构域Ⅲ的关键抗原未发生改变,SA14-14-2减毒疫苗株仍可用于该地区人群的免疫接种,预防JE的发生和流行。3.玉溪地区采集的动物血清进行JEV和GETV血清抗体中和实验未检测到这两种病毒中和抗体,但2种病毒仍对该地区人和动物有潜在的威胁,需要在该地区人或家养动物中加强这些虫媒病毒监测和检测,及早发现疾病,为该地区乃至云南省虫媒病毒病的防控提供科学依据。
于东海[2]（2020）在《辽宁省部分地区蜱种分布及携带主要病原的调查研究》文中进行了进一步梳理蜱是一种能吸血的节肢动物,大部分寄生于哺乳动物、爬行类等脊椎动物体表。蜱是多种自然疫源性疫病病原体的储存宿主兼传播媒介,其身上携带的大量病原体会给宿主带来危害。辽宁省森林、植被资源丰富,动物种类繁多,畜牧业也比较发达。丰富的物种资源和植被资源为蜱虫的生长发育和蜱传疾病的传播提供了条件。然而辽宁省地区蜱种分布和蜱携带主要病原的调查研究还相对匮乏,为了有效预防、控制蜱传疾病,了解辽宁省地区蜱种分布及组成,本试验重点调查研究了辽宁省部分地区的蜱种分布及蜱携带主要病原的情况。本试验在辽宁省四个市区共19个采样点进行了样本的采集。采集回来的样本经过处理后统计入库,挑选各个地区形态完好的蜱在显微镜下进行蜱的形态学鉴定,并结合分子生物学鉴定确定各个地区的蜱种分布,并同时PCR检测各个地区蜱携带的主要病原。本试验中19个采样点共采集到2579只蜱,鉴定出四个蜱种,分别是长角血蜱（H.longicornis）、全沟硬蜱（I.persulcatus）、森林革蜱（D.silvarum）以及嗜群血蜱（H.concinna）。调查结果显示,19个采样点的优势蜱种为长角血蜱。试验所涉及的19个采样点共检测到5种病原:检出大别山病毒296份,平均感染率为11.48%;检出阿龙山病毒240份,平均感染率为9.31%;检出立克次体116份,平均感染率为4.50%;检出无形体410份,平均感染率为15.90%;检出泰勒虫25份,平均感染率为0.97%。其中大别山病毒、阿龙山病毒和无形体的感染率相对较高,并且覆盖范围广。
丁帆,郭宪国[3]（2020）在《亚东璃眼蜱的研究现状》文中研究说明亚东璃眼蜱是我国常见的硬蜱种类,属于体表寄生虫的范畴。与所有硬蜱相同,该蜱的生活史包括卵、幼虫、若虫和成虫四个阶段,温度等环境因素会对其寿命、产卵力和产卵高峰等产生影响。亚东璃眼蜱主要栖息于半荒漠或荒漠地区,是新疆出血热（又名克里米亚-刚果出血热）等人兽共患病的重要传播媒介和贮存宿主。本文检索、归纳和总结了国内外相关文献,对亚东璃眼蜱的鉴别特征、生活史和相关生物学特性、与疾病的关系以及监测防控方面等进行了综述,旨在为亚东璃眼蜱及相关蜱传疾病的监测和防控提供参考资料。
李志锋[4]（2020）在《发热伴血小板减少综合征病毒传播机制及炎症小体和细胞焦亡在其感染过程中的作用研究》文中研究说明发热伴血小板减少综合征病毒（severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV）属于白纤病毒科、白蛉病毒属,是近年发现的新型病毒。人感染SFTSV可引起高热、血小板和白细胞急剧减少等症状,临床称之为发热伴血小板减少综合征（SFTS）,部分重症病例可出现出血和多脏器衰竭,病死率较高。目前,SFTSV的传播媒介和自然宿主的研究尚不充分。本研究分析了江苏和安徽两省SFTS的流行特征,然后在江苏省内SFTS流行区域设置监测点,探索SFTSV在人类、媒介生物和宿主动物间的传播循环模式。结果显示,江苏和安徽两省SFTS主要流行于两省交界区域,该地区流行的SFTSV以基因型A和D为主,其中长江以北为A型,长江以南则为D型,中间区域两者均有,且发生过基因型A/D重组。本研究还发现该地区存在SFTSV基因E,这在中国大陆尚属首次。关于病毒传播媒介的研究,本项目从SFTS流行区域环境中和宿主动物体表采集的长角血蜱成蜱、若蜱和幼蜱中均检测到病毒核酸或分离到病毒,其中环境中的游离蜱尚未吸血,若携带病毒则提示具有传播病毒潜能。本研究进一步通过长角血蜱人工感染模型探明,长角血蜱幼蜱、若蜱和成蜱均能有效感染SFTSV,在叮咬病毒血症期的小鼠后其感染率可达50%。雌性成蜱感染SFTSV后可经卵将病毒传递到下一代幼蜱,其最小感染率（MIR）为7.5%。另外,应用人工感染SFTSV的幼蜱、若蜱和成蜱叮咬小鼠时,可以引起较高的传播效率,其中成蜱可造成75%的小鼠成功感染。上述结果证实SFTSV可以通过长角血蜱传播,且在长角血蜱中可经卵垂直传递;本研究还探索了小型野生动物作为SFTSV自然宿主的可能性,结果显示,SFTS区域多种小型野生动物体内均可检测到SFTSV核酸或抗体,其中刺猬和鼬鼱的感染率和携带的病毒载量最高,并从中分离到病毒。这些结果提示,自然界中的小型野生动物特别是刺猬和鼬鼱可能做为扩增宿主传播SFTSV。值得关注的是,本项目还从颈珠斑鸠和大雁体内检测到SFTSV抗体。同时,我们应用人工感染试验发现,颈珠斑鸠感染SFTSV时可出现明显的病毒血症,其中SFTSV基因型E感染形成的病毒血症滴度明显高于中国型（P<0.01）。鸟类能通过迁徙长距离传播多种病原体,感染时形成的病毒血症越高,传播效率也更高。这一现象可用来解释为何SFTSV基因型E的传播范围更广,甚至发生跨海域传播。综上所述,SFTSV在自然界中以长角血蜱为传播媒介,以小型野生动物为扩增宿主,遵循“长角血蜱-小型野生动物-长角血蜱”式的循环传播模式,以维持其存在,当人类或家畜侵入其传播链时就可能会被感染。鸟类可以加速病毒的扩散,在病毒长距离传播过程中发挥重要作用。本研究加深了我们对SFTSV传播方式的理解,为针对性防控措施的制定提供了理论依据。SFTSV感染人可引起病毒性出血热样症状,目前这一症候群的发病机制相关研究尚不充分。本研究从病毒感染激活炎性小体和细胞焦亡的角度,探索了人感染SFTSV时的发病机制。临床研究发现,人感染SFTSV时血清中促炎因子IL-1β明显升高。本研究通过SFTSV人工感染C57/BL6小鼠,发现其血清中IL-1β的分泌显着上升。另外,本研究进一步用SFTSV感染人外周血单核细胞（PBMC）,发现Caspase-1发生活化,同时IL-1β分泌显着升高。IL-1β的成熟和分泌依赖炎症小体,上述结果提示SFTSV感染宿主时可能激活炎症小体。为探索其激活的分子机制,本项目通过构建的慢病毒分别敲减四种NLR受体NLRP1,NLRP3,NLRC4和AIM2。结果发现NLRP3被敲减以后,Caspase-1活化和IL-1β分泌都明显降低。本项目进一步应用特异性阻断剂glibenclamide阻断PBMC中的NLRP3,发现其感染SFTSV后IL-1β的分泌明显降低,而病毒的增殖明显增高。另外,本项目还应用特异性阻断剂Ac-YVAD-cmk阻断PBMC和C57/BL6小鼠Caspase-1活性,发现二者均出现IL-1β分泌降低和病毒增殖升高的现象。本研究还观察到,SFTSV感染PBMC时出现细胞损伤和死亡增加,同时胞内焦亡蛋白（GSDMD）发生活化,提示细胞焦亡的发生。综上所述,SFTSV感染能够在体内和体外激活NLRP3炎症小体,促进了IL-1β分泌,同时诱导细胞焦亡。炎性因子IL-1β分泌增加导致高热发生,而其诱导的炎症反应和细胞焦亡可能会抑制病毒在感染细胞的增殖。本研究通过临床数据分析也发现,病例血清中IL-1β的分泌水平与病例症状严重程度和血清中病毒载量呈负相关（P<0.01）。因此,炎症小体和细胞焦亡在宿主抗SFTSV感染过程中发挥重要作用。本研究有关SFTSV感染过程炎症小体激活和细胞焦亡发生及其与SFTS发病机制相关性研究,为深入阐明SFTS致病机制提供了新的视角。
郗宇[5]（2020）在《新疆南疆部分地区绵羊蜱种鉴定及蜱带立克次体检测》文中研究说明为掌握新疆南疆部分地区绵羊蜱种分布情况及蜱内立克次体携带情况。2018-2019年从新疆南疆阿瓦提县、乌什县、沙雅县、库车县、新和县、阿图什、莎车县、疏附县、泽普县、叶城县、喀什市、皮山县、阿拉尔市八团、阿拉尔市十团、阿拉尔市十三团、阿拉尔市和阿拉尔市十一团采集绵羊寄生蜱虫。利用形态学及线粒体16S rDNA基因分子生物学方法对采集蜱样进行鉴定,并进行遗传进化分析。采用PCR方法对鉴别获得的所有蜱种进行立克次体外膜蛋白A基因（ompA）、外膜蛋白B基因（ompB）、柠檬酸合成酶基因（gltA）、核糖体基因（16S rRNA）、17kDa蛋白抗原（17kDa）,以及无形体核糖体16S rRNA片段进行PCR扩增,测序结果进行BLAST序列分析,应用DNA star软件和Mega 6.0软件构建遗传进化树,分析遗传进化情况。结果显示:（1）新疆南疆部分地区采集2614只寄生蜱的种类包括4属5种,硬蜱包括图兰扇头蜱、边缘革蜱、银盾革蜱、亚洲璃眼蜱,软蜱包括拉合尔锐缘蜱;（2）新疆南疆17个采样点488份蜱样本DNA中共检测出145份立克次体阳性样本和47份无形体阳性样本,总感染率分别为29.7%和9.6%;（3）新疆南疆部分地区存在康氏立克次体、饶氏立克次体、马赛立克次体和暂定巴布瑞立克次体共4种立克次体感染,各采样点立克次体感染率在0%-90%之间,各蜱种立克次体携带率为17.7%-100%;（4）新疆南疆部分地区存在嗜吞噬细胞无形体和绵羊无形体共2种无形体感染,各采样点无形体感染率在0%-72.2%之间,各蜱种无形体携带率为0%-20.6%。本试验采集的图兰扇头蜱为新疆南疆部分地区优势蜱种,蜱种发育具有遗传进化的相对保守性;病原调查结果显示新疆南疆部分地区存在立克次体高感染率现象;首次在新疆南疆绵羊寄生银盾革蜱中检出饶氏立克次体;首次在新疆南疆绵羊寄生拉合尔锐缘蜱中检出嗜吞噬细胞无形体。本试验对该地区蜱种类分布研究进行了补充,并为新疆南疆蜱传立克次体病研究及防控提供了重要的依据。
戴诗雨[6]（2020）在《病毒样颗粒抗原及克里米亚刚果出血热病毒Gn/Gc宿主相互作用组的研究》文中认为病毒样颗粒（Virus-Like Particle,VLP）是由一个或多个病毒结构蛋白组装形成的颗粒状结构,与天然病毒粒子形态、抗原性相似。VLP缺失病毒的遗传物质,没有复制和感染能力。VLP的免疫原性良好,研制快速,制备成本较低并且安全,在应对新发、突发病毒疾病的疫苗研制中具有独特优势。杆状病毒表达系统是常用的真核表达系统之一,广泛应用于蛋白功能研究,抗原及疫苗制备。我们利用杆状病毒表达系统构建了几种危害人类健康的病毒VLPs,并初步探究了其作为候选疫苗的免疫原性。寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）是蚊传黄病毒,近年发现其感染与新生儿小头畸形有关,且能引起格林-巴利综合征等神经系统疾病。目前,对于ZIKV引起的疾病,尚无有效的疫苗和特异性治疗药物,ZIKV严重危害人类健康。我们利用杆状病毒表达系统,构建了表达ZIKV pr ME蛋白的重组病毒。经蔗糖密度梯度离心,从感染的昆虫细胞中纯化得到由ZIKV pr M蛋白和E蛋白自组装形成的ZIKV VLPs。以ZIKV pr ME VLPs免疫小鼠能够诱导小鼠产生中和抗体,及ZIKV特异的体液和细胞免疫反应,表现出良好的免疫原性,为以VLP为基础的ZIKV疫苗研发奠定了基础。我们也构建了表达ZIKV囊膜蛋白E的重组病毒,结果显示在昆虫细胞中囊膜蛋白E可以不依赖于pr M蛋白共表达组装成与ZIKV病毒粒子形态类似的VLP,并且释放到胞外。E蛋白保留膜融合活性,可以诱导合胞体形成,这一现象同样适用于包括日本脑炎病毒、登革热病毒和蜱传脑炎病毒在内的黄病毒。基于杆状病毒表达黄病毒囊膜蛋白E诱导合胞体形成的现象,我们还建立了靶向黄病毒E蛋白的抗病毒药物筛选平台。脊髓灰质炎病毒（Poliovirus,PV）是脊髓灰质炎（简称脊灰）的病原体。目前脊灰没有特异治疗方法,只能通过接种疫苗来预防。目前世界上普遍使用的脊灰疫苗有两种,即口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（OPV）和灭活脊髓灰质炎疫苗（IPV）。自从1988年世界卫生组织（WHO）发起全球消灭脊灰行动以来,世界各国大力推广OPV的使用,2015年和2019年,WHO先后宣布Ⅱ型和Ⅲ型脊灰野病毒的消灭。在根除脊灰的最后阶段,OPV和IPV都不可避免存在安全性问题,面临着免疫策略调整的挑战,在无PV的环境下生产疫苗更安全可靠。我们利用杆状病毒表达系统共表达PV的P1和3CD蛋白,P1前体可以被3CD蛋白酶成功剪切成衣壳蛋白VP0、VP1和VP3,经过蔗糖密度梯度离心结合氯化铯密度梯度离心可以纯化出PV VLPs,与天然PV病毒颗粒的形态、大小相似。克里米亚刚果出血热病毒（Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus,CCHFV）是一种高致病性病毒,可以导致克里米亚刚果出血热,一种以出血为典型特征的蜱媒自然疫源性疾病。CCHFV感染能引起人发热、出血以及多器官的功能衰竭,进而导致死亡,致死率高达30%-50%,没有有效的抗CCHFV的药物和疫苗,CCHFV是人类健康的潜在威胁。在我国病毒分类目录中,CCHFV属于第一类危害程度的病毒;在国外,CCHFV是生物安全4级的病毒。CCHFV在体外通过细胞培养进行病毒的分离和扩增较困难,极大限制了CCHFV的研究进展。我们构建重组病毒在昆虫细胞中共表达CCHFV的膜蛋白和核衣壳蛋白,或者单独表达膜蛋白。通过蔗糖密度梯度离心,成功从感染的细胞中制备出CCHFV VLPs。CCHFV病毒粒子表面是膜蛋白Gn和Gc,为了形成感染性病毒粒子,膜蛋白前体在细胞内经过复杂的剪切、加工和定位从而形成结构蛋白Gn和Gc,非结构蛋白GP160,GP85,GP38和NSm。在整个生命周期中CCHFV膜蛋白Gn和Gc在病毒入侵、膜融合、致病性、宿主选择和免疫逃逸等方面有重要作用。对CCHFV膜蛋白Gn和Gc宿主互作蛋白的研究,探索CCHFV与宿主的相互作用有利于了解CCHFV的分子生物学,找到病毒感染的关键宿主因子。为了研究CCHFV膜蛋白Gn/Gc与宿主的相互作用,我们首先制备了CCHFV膜蛋白Gn/Gc的单克隆抗体。以原核表达的Gn/Gc胞外区作为免疫原免疫小鼠,通过有限稀释法,以真核表达的Gn/Gc蛋白作为检测抗原,经ELISA方法初筛融合上清,结合蛋白免疫印迹分析和细胞免疫荧光检测。经过综合评定和比较,筛选出8株Gn单克隆化的杂交瘤细胞和10株Gc单克隆化的杂交瘤细胞。分别以不同截短形式的Gn/Gc原核表达蛋白为抗原,对融合上清的识别区段进行鉴定,最终鉴定出2株Gn单克隆抗体和1株Gc单克隆抗体及其识别的抗原表位。为了探索膜蛋白Gn/Gc的宿主互作蛋白,我们以带有Twin-strep标签的Gn或Gc作为诱饵蛋白,对样品进行细胞亲和纯化-质谱（AP-MS）鉴定。共鉴定出45个Gn或Gc相关宿主蛋白,结合生物信息学深入挖掘和分析,并通过免疫荧光等方法对质谱结果有效性进行验证。综上所述,我们利用杆状病毒表达系统成功构建了ZIKV VLPs,PV VLPs和CCHFV VLPs。对ZIKV VLPs免疫原性的初步探索表明其有良好的免疫原性,有希望成为ZIKV候选疫苗。基于杆状病毒表达的黄病毒E蛋白诱导合胞体的现象,建立了针对黄病毒E蛋白的抗病毒药物筛选平台。筛选出2株CCHFV Gn单克隆抗体和1株Gc单克隆抗体。并通过蛋白质组学和生物信息学鉴定分析了CCHFV膜蛋白Gn/Gc的宿主互作蛋白,可以促进全面地了解膜蛋白Gn/Gc与宿主的关系,对认识CCHFV感染相关过程,后续功能分析及药物靶点设计具有重要指导意义。
刘志强[7]（2019）在《新疆北疆地区蜱种分布、分子特征及重要蜱传病原的分子检测》文中研究说明目的:蜱类是专性吸血的外寄生动物,除了直接叮咬侵袭宿主,还是多种自然疫源性病原体的传播媒介。蜱类研究在兽医学、医学、经济学和公共卫生方面都有重要的意义。准噶尔盆地是中国第二大内陆盆地,位于新疆北部,植被覆盖度较好,多为优良牧场,野生动物种群较多,为蜱类生长繁殖提供良好“生境”,相应种类繁多,对畜牧业危害极大。对北疆地区蜱种和蜱传病原开展调查研究,完善该地区蜱种与蜱传病原基础资料,为该地区蜱类种群分布解析和蜱传疾病的防控提供参考依据。方法:（1）2014年2016年连续3年在新疆北疆（环古尔班通古特沙漠）15个县市16个点采集硬蜱,形态学鉴定结合地理分布信息确定蜱种分布特点和优势蜱种种类;（2）扩增不同蜱种的16S rDNA基因,印证形态学鉴定结果;通过16S rDNA基因序列比较和构建系统进化树,确定该地区蜱类的系统进化关系。（3）通过亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum asiaticum）和亚东璃眼蜱（Hyalomma asiaticum kozlovi）线粒体全基因组的测定、注释、比对和分析,探讨亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱亲缘关系和分类地位;（4）应用巢式PCR技术,对采集的蜱虫进行人粒细胞无形体、埃立克次体、莱姆螺旋体核酸检测,了解不同地区和不同蜱种携带病原阳性率,并通过人粒细胞无形体及埃立克体的线粒体16S rDNA基因、莱姆病螺旋体的5S-23S rRNA基因间隔区等标志性基因的扩增和序列分析,确定病原体基因型和系统发生关系。（5）分别从自然发病的骆驼和体表寄生的亚洲璃眼蜱虫体内分离培养伊氏锥虫,并通过PCR方法检测伊氏锥虫的18S rDNA和核糖体内转录间隔区ITS1-5.8S-ITS2基因,对分离的虫株进行鉴定,并探讨亚洲璃眼蜱是否是伊氏锥虫的传播媒介。结果:（1）2014年2016年在新疆北疆环古尔班通古特沙漠地区15个县16个采样点,共采集硬蜱11628枚,形态学鉴定隶属5属10种,即:亚洲璃眼蜱Hyalomma asiaticum asiaticum、亚东璃眼蜱Hyalomma asiaticum kozlovi、残缘璃眼蜱Hyalomma detritum.、草原革蜱Dermacentor nuttalli、森林革蜱Dermacentor silvarum、银盾革蜱Dermacentor niveus、边缘革蜱Dermacentor marginatus、图兰扇头蜱Rhipicephalus turanicus、刻点血蜱Haemaphysalis punctata和全沟硬蜱Ixodex persulcatus。其中检出一定量的亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱中间型。（2）对北疆地区环古尔班通古特沙漠15个县市的16个点采集的部分硬蜱,进行16S rDNA基因的扩增,获得16个蜱序列,分属于璃眼蜱属,扇头蜱属,革蜱属和血蜱属,与形态学鉴定结果相吻合。基于16S rDNA基因构建了系统发育进化树,完善了北疆地区硬蜱的系统发育和分类的基础数据资料。（3）成功扩增了亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱的的线粒体全基因序列,长度分别为14720bp和14724bp,并对线粒体基因全序列进行注释和分析,两个蜱种序列相似率达到99.65%。基因组成和排序一致,亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱适合划分为同一种,应该是同种异名。（4）对新疆北疆15个县市采集的500只硬蜱进行了人粒细胞无形体、埃立克次体、莱姆螺旋体的核酸检测,各调查点都有阳性检出,埃立克次体总阳性率达到25.24%,人粒细胞无形体总阳性率达31.2%。莱姆螺旋体总阳性率为3.2%;（5）成功从克拉玛依白碱滩区骆驼和体表寄生的亚洲璃眼蜱体内分离一株锥虫,经鉴定为伊氏锥虫,结合伊氏锥虫分子生物学分析;证实亚洲璃眼蜱体内携带伊氏锥虫,可能是其传播媒介之一。结论:采集的硬蜱11628枚,形态学鉴定隶属5属10种,亚洲璃眼蜱、亚东璃眼蜱、银盾革蜱和草原革蜱为优势蜱种。基于硬蜱16S rDNA基因的鉴定,与形态学鉴定结果一致;通过线粒体全基因组测序分析,认为亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱为同一物种;在北疆地区硬蜱体内都检测到人粒细胞无形体、埃立克次体和莱姆螺旋体的核酸阳性,提示该地区为此类病原的自然疫源地;分离、培养、鉴定伊氏锥虫克拉玛依株,证实亚洲璃眼蜱可携带伊氏锥虫,可能为伊氏锥虫的传播媒介之一。
王珊珊[8]（2019）在《海南鼠源性细小病毒、多瘤病毒及Gemycycrularvirus的基因组分析》文中指出研究目的:对海南省部分地区野生鼠类样本携带的致病性及潜在致病性病毒进行基因组分析,为防控以鼠源性新发致病性疾病的流行提供数据支撑。研究方法:本课题基于本实验前期对海南省部分地区野生鼠类样本病毒宏基因组高通量测序及生物信息学分析的结果,从中筛选出可能导致人类和动物致病鼠源性细小病毒（parvovirus,ParV）、多瘤病毒（polyomavirus,PyV）及Gemycircularvivus（GemyCV）的reads,分别对三种病毒通过PCR技术进行全基因组扩增、序列拼接、基因组遗传进化分析,初步建立了巢式PCR（Nested PCR）检测鼠源性ParV和PyV方法。研究结果:（1）海南鼠源性ParV的基因组分析基于前期对海南临高地区捕获的野生鼠咽拭子样本病毒宏基因组高通量测序及生物信息学的结果分析,发现了1603条reads与啮齿类动物ParV具有同源性（80%-94%）,疑似ParV（ParV/LG株）。应用PCR技术进行全基因组扩增、基因全长拼接等方法,获得ParV/LG株的全基因组序列。基因组全长为4691 bp,编码非结构蛋白（NS1）和衣壳蛋白1（VP1）,分别编码721 aa及583 aa。在NS1序列（448-GPASTGKS-455）中发现ATP或GTP结合的Walker环基序（GXXXXGK[T/S]）,NS1和VP1的GC含量分别为54.57%和45.43%。基于NS1和VP1氨基酸序列构建的进化树分析显示,Parv/LG株与Kilham rat virus株（KRV）（AF321230.1）亲缘关系最密切,同源性分别为91%和97%,该病毒基因组已上传至GenBank,序列号为MK530648.1,命名为parvovirus Ro/Lingo/China。初步建立了基于该病毒VP1基因的Nested PCR检测方法。（2）海南鼠源性PyV的基因组分析基于前期对海南海口地区捕获的野生褐家鼠咽拭子样本病毒宏基因组高通量测序及生物信息学的结果分析,发现了114条reads与啮齿类动物PyV具有同源性（93%-97%）,疑似PyV（PyV/HK株）。应用PCR技术进行全基因组扩增、基因全长拼接等方法,获得PyV/HK株的全基因组序列。基因组全长为5318 bp,编码早期基因和晚期基因,早期基因编码大T抗原（LTAg）、中间T抗原（MTAg）和小T抗原(（STAg）,晚期基因编码主要衣壳蛋白1（VP1）、衣壳蛋白2（VP2）和衣壳蛋白3（VP3）,LTAg,MTAg,STAg,VP1,VP2和VP3分别编码776 aa,414aa,194 aa,384 aa,347 aa和228 aa。基于LTAg氨基酸序列构建的进化树分析显示,PyV/HK株与Rattus norvegicus polyomavirus 1（RnorPyV1）株（KR075945.1）的亲缘关系最密切,LTAg,MTAg和VP1氨基酸的同源性分别为99%,99%和99%,该病毒基因组已上传至GenBank,序列号为MK372231.1,命名为polyomavirus sp RN/Haikou/China。初步建立了基于该病毒的VP1基因的Nested PCR检测方法。（3）海南鼠源性GemyCV的基因组分析基于前期对海南海口褐家鼠咽拭子样本病毒宏基因组高通量测序及生物信息学分析的结果,发现了298条reads与GemyCV具有同源性（81%-97%）,疑似GemyCV（GemyCV/HK株）。应用PCR技术进行全基因组扩增、基因全长拼接等方法,获得GemyCV/HK株的全基因序列。基因组全长为2199 bp,编码衣壳蛋白（Cap）、主要复制蛋白（Rep 1）和次要复制蛋白（Rep 2）,分别编码322aa、194aa和112aa。GemyCV/HK株基因间区域（Iterons）（127-nt）含有一个具有九聚体[TAAAATTTA]的非典型茎环结构,Rep 1和Rep 2之间具有独特的内含子（Intron）。基于Cap和Rep氨基酸序列构建的进化树分析显示,GemyCV/HK株与gemycircularvirus SL1（GemyCV-SL1）株（KP133075.1）亲缘关系最密切,氨基酸的同源性分别是97%和99%,该病毒基因组已上传至GenBank,序列号为MK293717.1,命名为gemycircularvirus RN/Haikou/China。结论:（1）获得了ParV/LG株的全基因序列,遗传进化分析表明,ParV/LG株与可引起大鼠致病的KRV株亲缘关系最密切,表明海南临高地区鼠类携带ParV。初步建立了基于ParV/LG株VP1基因的Nested PCR检测方法。（2）获得了PyV/HK株的全基因序列,遗传进化分析表明,PyV/HK株与RnorPyV1株的亲缘关系最密切,表明海南海口地区鼠类携带PyV。初步建立了基于PyV/HK株VP1基因的Nested PCR检测方法。（3）获得了GemyCV/HK株的全基因序列,遗传进化分析表明,GemyCV/HK株与GemyCV-SL1株的亲缘关系最密切,表明海南海口地区鼠类携带GemyCV。
方耀辉[9]（2019）在《青海省草原革蜱携带新型的RNA病毒的调查》文中研究说明蜱虫是吸附在动物表面的吸血寄生虫,是多种人畜共患病毒病原的重要载体。2015至2017年,我们在中国青海省青海湖周边的牲畜体表采集了3162只蜱虫。形态学观察和分子鉴定显示采集的蜱虫均为草原革蜱（Dermacentor nuttalli）。利用二代测序技术宏基因组分析,在这些蜱虫样本中发现了4种新的RNA病毒,包括一种属于布尼亚病毒目白纤病毒科白蛉病毒属中一个未分类族群的新病毒（青海蜱病毒QHTPV）和3种未分类的新RNA病毒。此外,还鉴定出了一些来源于6个不同病毒科的短片段核酸序列。随后我们进一步调查了这些病毒在蜱虫中的流行病学情况。此前文献表明,属于白蛉病毒属同一族群且与青海蜱病毒相近的其他白蛉病毒都只检测到基因组中的S和L片段,缺失M片段,因此推断这一族群的布尼亚病毒可能只含有两个基因组片段。根据我们高通量测序以及生物信息学分析的方法,我们在青海蜱虫样本中找到了青海蜱病毒可能的基因组M片段。通过系统发育分析、与相关白蛉病毒的基因组组成和蛋白质翻译后修饰的比较分析,以及青海蜱病毒S、M、L片段在蜱虫分组核酸中检测出现率的相关性分析,进一步证明了该片段的特性以及作为青海蜱病毒M片段的可能性。我们的研究首次调查了青海省草原革蜱的病毒谱,揭示了蜱传病毒的遗传多样性,加深了对蜱传病毒的了解。同时证明了新发现的一株白蛉病毒基因组具有完整的S,M,L三片段,提示白蛉病毒可能由于序列相似度极低,其基因组M片段难以被发现;我们发现的新的白蛉病毒的M片段序列将可能促进未来发现其他新的白蛉病毒的M片段序列。
王茜[10]（2018）在《新疆蜱携病毒谱解析与斑点热感染病例分析》文中指出背景:新疆维吾尔自治区坐落于中国西北部,拥有长达5600多公里的陆地边境线,该陆地边境线长度约占全国的四分之一,与多国接壤。新疆有其独特的地理位置优势,是我国“一带一路”顶层设计中通往中亚及欧洲的重要的贸易纽带,也是古丝绸之路的必经之地。随着国际间家畜交易往来、候鸟及野生动物迁徙,动物的体表寄生蜱虫宿主范围不断扩大,造成不同种族人群和家畜蜱传疾病的感染。本次研究目的是对新疆维吾尔自治区陆地边境线地区蜱虫种类的鉴定以及解析蜱虫中携带的病毒谱和被蜱虫叮咬的重症患者病例分析,为我国以及国际间蜱虫传播病原的监测提供共享信息,同时为蜱传病原提供了强有力的科学依据。方法:（1）2016年4月至2017年5月采集新疆维吾尔自治区不同地域（边境线为主）15个县市家畜体表寄生蜱和游离蜱,蜱样本首先进行形态学鉴定,之后基于线粒体12S rRNA、COI、16S rRNA基因进行分子生物学蜱种鉴定,并构建遗传进化树对蜱种进行系统发育分析;（2）通过高通量测序对新疆边境地区优势蜱种（亚洲璃眼蜱、边缘革蜱和图兰扇头蜱）和蜱叮咬病人（已昏迷,在重症监护室）全血进行宏病毒检测;（3）对于立克次体种类的鉴定运用MLST（Multilocus sequence typing:基因多位点序列分型）方法,针对蜱虫叮咬后重症病人血液及两例相对应蜱虫样本的DNA分别进行6个基因【编码17kDa蛋白抗原（17kDa）,外膜蛋白A（ompA）,外膜蛋白B（ompB）,柠檬酸合成酶基因（glt A）,细胞表面抗原1（sca1）,细胞表面抗原4（sca4）】片段的扩增和测序;（4）对5例阳性病人进行ELISA立克次体含量测定;（5）5例病人按照国标立克次体用药（头孢曲松钠+多西环素）进行抗感染治疗。结果:（1）在新疆15个县市共采集到13794只动物寄生蜱和245只游离蜱,经蜱的形态学和分子生物学鉴定,本研究寄生蜱隶属三属四种,包括革蜱属的边缘革蜱和草原革蜱,璃眼蜱属的亚洲璃眼蜱蜱,扇头蜱属的图兰扇头蜱,游离蜱均为亚洲璃眼蜱蜱;（2）高通量宏病毒测序显示:（1）在蜱和病人中共同检测到10种病毒,分别为:刚果出血热病毒、布若那正内罗毕病毒、塔城蜱病毒2、塔城蜱病毒5、伯乐蜱病毒1、伯乐蜱病毒2、伯乐蜱病毒4、泰顺蜱病毒、蜱白蛉病毒、人阿尔法1型疱疹病毒;（2）仅在蜱样本中检测到的病毒为23种,23种病毒主要隶属于布尼亚病毒科、黄病毒科、弹状病毒科、白蛉病毒科、细小病毒科、疱疹病毒科、内罗毕病毒科;（3）5例病人和收集到的两只相对应的蜱虫的核酸分别检测到康氏立克次体、马赛立克次体、饶氏立克次体3种立克次体;（4）ELISA结果提示不同病程中血液中立克次体含量不同,随治疗时间立克次体浓度降低,蜱咬病人病情好转,说明抗感染治疗方案有一定效果。结论:（1）边缘革蜱和亚洲璃眼蜱是新疆北疆边境地区优势蜱种,图兰扇头蜱是新疆南疆边境地区优势蜱种;（2）蜱携带多种蜱相关及人相关病毒,首次在我国蜱叮咬病人血液中检测到布诺那病毒;（3）5例斑点热感染阳性病人血液及叮咬人的两只蜱虫核酸中均检测到3种立克次体核酸,分别为饶氏立克次体、马赛立克次体、康氏立克次体,说明蜱虫叮咬在饶氏立克次体、马赛立克次体和康氏立克次体传播中起到一定作用;（4）本研究蜱携宏病毒谱的解析为我国内陆地区及国际间蜱传疾病提供了基础信息和科学构架。未来应动态监测新疆边境地区人、动物、优势蜱的蜱传病毒和斑点热群立克次体的流行情况。
二、新疆出血热媒介宿主调查总结（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、新疆出血热媒介宿主调查总结（论文提纲范文）
（1）云南玉溪地区虫媒病毒调查及动物血清流行病学研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 云南省玉溪地区虫媒病毒的分离鉴定 |
| 材料与方法 |
| 1 标本来源 |
| 2 病毒分离 |
| 3 病毒鉴定 |
| 结果 |
| 1 蚊虫采集结果 |
| 2 病毒分离结果 |
| 3 病毒鉴定结果 |
| 4 病毒分布结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 2株JEV全基因组分子特征分析 |
| 材料与方法 |
| 1 标本来源 |
| 2 主要仪器和试剂 |
| 3 全基因组测定 |
| 4 胶回收 |
| 5 载体连接 |
| 6 转化感受态细胞 |
| 7 重组克隆PCR鉴定 |
| 8 序列分析 |
| 结果 |
| 1 JEV全基因组序列扩增及基因组结构 |
| 2 全基因组核苷酸及氨基酸序列同源性分析 |
| 3 氨基酸差异位点分析 |
| 4 系统进化分析 |
| 讨论 |
| 第三部分 玉溪地区虫媒病毒动物血清流行病学分析 |
| 材料与方法 |
| 1 标本来源 |
| 2 主要仪器和试剂 |
| 3 TCID-50 |
| 4 血清中和实验 |
| 结果 |
| 1 动物血清采集结果 |
| 2 TCID-50读数结果 |
| 3 JEV及GETV抗体检测结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 云南省乙型脑炎病毒研究现状及基因型的变迁 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）辽宁省部分地区蜱种分布及携带主要病原的调查研究（论文提纲范文）
| 主要符号 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 蜱分类起源 |
| 1.2 蜱系统分类学 |
| 1.3 蜱简述 |
| 1.3.1 蜱的简介 |
| 1.3.2 蜱的形态特征 |
| 1.3.3 蜱的生活史 |
| 1.3.4 蜱的生殖和繁育 |
| 1.3.5 蜱的吸血习性与宿主关系 |
| 1.3.6 蜱的危害 |
| 1.4 一些主要的蜱传疾病 |
| 1.4.1 病毒类疾病 |
| 1.4.2 细菌类疾病 |
| 1.4.3 原虫类疾病 |
| 1.4.4 其他类疾病 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 第二章 辽宁省部分地区蜱种分布的调查研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 蜱虫样本采集 |
| 2.1.2 样本采集地 |
| 2.1.3 样本处理 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.1.5 主要试剂 |
| 2.1.6 蜱种形态学鉴定 |
| 2.1.7 蜱分子生物学鉴定 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 各个地区采样汇总 |
| 2.2.2 蜱种形态学鉴定 |
| 2.2.3 蜱种构成 |
| 2.2.4 各个地区蜱种分布 |
| 2.2.5 分子生物学鉴定 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 蜱种鉴定的方法 |
| 2.3.2 辽宁省部分地区优势蜱种 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 辽宁省地区蜱携带主要病原的调查研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 样本来源 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 |
| 3.1.3 核酸提取 |
| 3.1.4 PCR检测病原 |
| 3.1.5 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.1.6 测序比对 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 病原PCR检测结果 |
| 3.2.2 各地区病原检出率汇总 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 蜱传疾病的检测 |
| 3.3.2 蜱虫危害的防控 |
| 3.3.3 蜱潜在的恐怖威胁 |
| 3.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）亚东璃眼蜱的研究现状（论文提纲范文）
| 1 璃眼蜱属概况 |
| 2 亚东璃眼蜱的鉴别特征 |
| 2.1 亚东璃眼蜱形态特征 |
| 2.1.1 雌蜱 |
| 2.1.2 雄蜱 |
| 2.1.3 若蜱 |
| 2.1.4 幼蜱 |
| 2.2 与亚洲璃眼蜱指名亚种的区别 |
| 3 亚东璃眼蜱的生活史及相关生物学特性 |
| 3.1 生活史 |
| 3.2 相关生物学特性 |
| 4 亚东璃眼蜱与疾病的关系 |
| 4.1 新疆出血热(XHF) |
| 4.2 Q热 |
| 4.3 土拉菌病 |
| 5 监测与防控 |
（4）发热伴血小板减少综合征病毒传播机制及炎症小体和细胞焦亡在其感染过程中的作用研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 研究综述 发热伴血小板减少综合征研究进展 |
| 参考文献 |
| 第一部分 发热伴血小板减少综合征病毒自然传播机制研究 |
| 绪言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 发热伴血小板减少综合征病毒鸟类感染模型研究 |
| 绪言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 炎症小体及其介导的细胞焦亡在SFTSV感染过程中的作用机制研究 |
| 绪言 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录1:课题所用荧光定量PCR引物和探针 |
| 附录2:课题所用SFTSV基因组序列号 |
| 博士期间完成文章列表 |
| 致谢 |
（5）新疆南疆部分地区绵羊蜱种鉴定及蜱带立克次体检测（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 蜱的分类起源 |
| 1.2 蜱的系统分类学假说 |
| 1.3 蜱概述 |
| 1.3.1 蜱的生活史 |
| 1.3.2 蜱的吸血习性与宿主关系 |
| 1.3.3 蜱的生殖和繁育 |
| 1.3.4 蜱的形态特征 |
| 1.3.5 蜱的危害 |
| 1.4 常见的蜱传疾病 |
| 1.5 我国无形体研究进展 |
| 1.6 我国立克次体研究进展 |
| 第2章 新疆南疆部分地区绵羊蜱种形态学及分子生物学鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 蜱样采集 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 试剂配制 |
| 2.1.5 物种鉴定参考序列 |
| 2.1.6 形态学鉴定 |
| 2.1.7 分子生物学鉴定 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 蜱种形态学鉴定 |
| 2.2.2 蜱种分子生物学鉴定 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 新疆南疆部分地区绵羊寄生蜱携带立克次体检测 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 样品来源 |
| 3.1.2 主要仪器及试剂 |
| 3.1.3 DNA提取 |
| 3.1.4 PCR扩增 |
| 3.1.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 3.1.7 PCR产物阳性样本克隆 |
| 3.1.8 测序及构建遗传进化树 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 PCR产物电泳结果 |
| 3.2.2 感染率统计分析 |
| 3.2.3 序列比对分析 |
| 3.2.4 遗传进化树分析 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）病毒样颗粒抗原及克里米亚刚果出血热病毒Gn/Gc宿主相互作用组的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 病毒样颗粒疫苗的研究进展 |
| 1.1.1 病毒样颗粒疫苗的简介 |
| 1.1.2 病毒样颗粒疫苗的表达系统 |
| 1.1.3 病毒样颗粒疫苗发展面临的挑战和解决方案 |
| 1.2 寨卡病毒及其疫苗的研究进展 |
| 1.2.1 寨卡病毒的流行病学 |
| 1.2.2 寨卡病毒的分类 |
| 1.2.3 寨卡病毒结构和基因组结构 |
| 1.2.4 寨卡病毒的生命周期 |
| 1.2.5 寨卡病毒E蛋白的结构和功能研究 |
| 1.2.6 寨卡病毒疫苗的研究进展 |
| 1.3 脊髓灰质炎病毒及其疫苗的研究进展 |
| 1.3.1 脊髓灰质炎的流行现状 |
| 1.3.2 脊髓灰质炎病毒的生物学 |
| 1.3.3 脊髓灰质炎疫苗的研究进展 |
| 1.4 克里米亚刚果出血热病毒的研究进展 |
| 1.4.1 CCHFV的生物学 |
| 1.4.2 CCHFV的临床流行病学 |
| 1.4.3 CCHF的预防 |
| 1.4.4 CCHFV疫苗的研究进展 |
| 1.4.5 CCHFV单克隆抗体的研究进展 |
| 1.5 本论文的研究内容和意义 |
| 第2章 寨卡病毒样颗粒的构建和免疫原性研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 细胞、病毒与菌株 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 抗体与抗体制备 |
| 2.1.4 重组杆状病毒v Ac-Zpr ME的构建 |
| 2.1.5 ZIKV病毒蛋白的表达和鉴定 |
| 2.1.6 ZIKV病毒样颗粒和病毒粒子的纯化与检测 |
| 2.1.7 ZIKV VLPs的免疫原性评价 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 重组杆状病毒v Ac-Zpr ME的构建 |
| 2.2.2 ZIKV pr M和 E蛋白形成VLPs |
| 2.2.3 ZIKV VLPs的免疫原性研究 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 基于杆状病毒表达的VLP诱导合胞体现象的抗黄病毒药物筛选方法的建立 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 细胞、病毒、菌株与质粒 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 抗体与抗体纯化 |
| 3.1.4 重组杆状病毒的构建 |
| 3.1.5 质粒的构建及转染实验 |
| 3.1.6 序列比对和进化分析 |
| 3.1.7 免疫荧光分析 |
| 3.1.8 ZIKV滴度测定(空斑实验) |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 杆状病毒表达的黄病毒E蛋白诱导Sf9细胞形成合胞体 |
| 3.2.2 黄病毒E蛋白在Sf9细胞中的细胞定位研究 |
| 3.2.3 ZIKV prME和E蛋白形成VLPs |
| 3.2.4 基于杆状病毒表达的黄病毒E蛋白诱导合胞体现象的抗病毒筛选 |
| 3.2.5 AMS通过影响病毒入侵抑制黄病毒感染 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 脊髓灰质炎病毒样颗粒的构建 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 细胞与菌株 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 抗体与抗体制备 |
| 4.1.4 重组杆状病毒的构建 |
| 4.1.5 病毒样颗粒的纯化和鉴定 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 PVⅡP1多克隆抗体的制备和鉴定 |
| 4.2.2 重组杆状病毒的构建 |
| 4.2.3 PVⅡVP0,VP1和VP3 蛋白形成VLPs |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 克里米亚刚果出血热病毒样颗粒的构建 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 细胞、病毒与质粒 |
| 5.1.2 试剂 |
| 5.1.3 抗体 |
| 5.1.4 重组杆状病毒的构建 |
| 5.1.5 病毒样颗粒的纯化和鉴定 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 重组杆状病毒v Ac-Gn Gc NP和 v Ac-Gn Gc的构建 |
| 5.2.2 CCHFV VLPs的纯化和鉴定 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 CCHFV膜蛋白Gn/Gc单克隆抗体的制备及表位鉴定 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 菌株、质粒与细胞系 |
| 6.1.2 试剂 |
| 6.1.3 CCHFV膜蛋白Gn/Gc胞外区的诱导表达 |
| 6.1.4 单克隆抗体制备的流程 |
| 6.1.5 小鼠血清和杂交瘤细胞上清识别能力的检测 |
| 6.1.6 单克隆抗体线性识别位点的鉴定 |
| 6.2 实验结果 |
| 6.2.1 小鼠血清的检测 |
| 6.2.2 CCHFV膜蛋白Gn/Gc单克隆抗体的筛选 |
| 6.2.3 CCHFV膜蛋白Gn/Gc单克隆抗体识别表位的鉴定 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第7章 CCHFV膜蛋白Gn/Gc宿主相互作用组的研究 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 细胞、病毒、菌株与质粒 |
| 7.1.2 试剂 |
| 7.1.3 抗体 |
| 7.1.4 细胞转染 |
| 7.1.5 免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) |
| 7.1.6 非标定量质谱分析 |
| 7.1.7 生物信息学分析 |
| 7.1.8 免疫荧光和共聚焦实验 |
| 7.2 实验结果 |
| 7.2.1 诱饵蛋白Gn/Gc及其宿主互作蛋白的SDS-PAGE和 Western blot分析 |
| 7.2.2 膜蛋白Gn/Gc宿主互作蛋白的非标定量质谱分析 |
| 7.2.3 膜蛋白Gn/Gc宿主互作蛋白的GO和 KEGG通路富集分析 |
| 7.2.4 膜蛋白Gn/Gc宿主互作蛋白的相互作用网络分析 |
| 7.2.5 间接免疫荧光验证质谱结果 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 线粒体 |
| 7.3.2 内质网 |
| 7.3.3 细胞骨架 |
| 7.3.4 外泌体和囊泡 |
| 7.4 小结 |
| 第8章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（7）新疆北疆地区蜱种分布、分子特征及重要蜱传病原的分子检测（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.研究的目的和意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 蜱分类及进化的研究进展 |
| 2.2 蜱传疫病的研究进展 |
| 2.3 蜱虫线粒体基因组的研究进展 |
| 3 研究内容与技术路线 |
| 3.1 研究内容 |
| 3.2 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 北疆地区硬蜱的调查研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 硬蜱的统计结果 |
| 2.2 硬蜱的形态学鉴定 |
| 2.3 优势蜱种的分布 |
| 3 讨论 |
| 3.1 北疆地区蜱种的分布 |
| 3.2 亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱的区分 |
| 4 小结 |
| 试验二 基于16S rDNA基因对北疆地区硬蜱系统进化分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 16S rDNA基因的扩增结果 |
| 2.2 线粒体16S rDNA基因扩增序列分析 |
| 2.3 蜱种系统发育分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 分子生物学技术在蜱分类中的应用 |
| 3.2 新疆蜱种的变化 |
| 4 小结 |
| 试验三 亚洲璃眼蜱和亚东璃眼蜱线粒体基因组的测定分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 形态学鉴定 |
| 2.2 线粒体基因分段扩增 |
| 2.3 两种璃眼蜱的线粒体基因组 |
| 2.4 基于线粒体基因组系统发育分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验四 蜱媒人粒细胞无形体、埃立克次体和莱姆螺旋体的检测 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 PCR扩增结果 |
| 2.2 人粒细胞无形体、埃立克体和莱姆疏螺旋体检测结果 |
| 2.3 3种病原体测序及分型 |
| 3 讨论 |
| 3.1 人粒细胞无形体、埃立克次体病的流行情况 |
| 3.2 莱姆螺旋体病的流行情况 |
| 4 小结 |
| 试验五 亚洲璃眼蜱中锥虫的分离与鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 蜱虫鉴定 |
| 2.2 血液涂片 |
| 2.3 血涂片染色 |
| 2.4 动物接种试验 |
| 2.5 PCR扩增与测序结果 |
| 2.6 序列分析 |
| 2.7 系统发育关系分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 伊氏锥虫病流行情况 |
| 3.2 伊氏锥虫的传播媒介 |
| 3.3 伊氏锥虫系统发生分析 |
| 4 小结 |
| 第三章 全文总结 |
| 第四章 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 石河子大学博士研究生学位论文导师评阅表 |
（8）海南鼠源性细小病毒、多瘤病毒及Gemycycrularvirus的基因组分析（论文提纲范文）
| 缩略语 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 海南鼠源性细小病毒的基因组分析 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 试剂和仪器 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.1.2.1 引物设计与合成 |
| 1.1.2.2 病毒核酸的提取 |
| 1.1.2.3 细小病毒PCR验证 |
| 1.1.2.4 细小病毒全基因组扩增 |
| 1.1.2.5 PCR产物目的条带的胶回收 |
| 1.1.2.6 回收产物的连接 |
| 1.1.2.7 连接产物转化感受态细菌及培养 |
| 1.1.2.8 病毒基因组注释与进化分析 |
| 1.1.2.9 细小病毒NestedPCR检测扩增技术初步建立 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 细小病毒基因组全长扩增 |
| 1.2.2 细小病毒基因组序列比较结果 |
| 1.2.2.1 基因组结构分析 |
| 1.2.2.2 细小病毒同源性分析 |
| 1.2.2.3 细小病毒进化树分析 |
| 1.2.3 细小病毒NestedPCR检测扩增技术初步建立 |
| 1.2.3.1 NestedPCR的扩增 |
| 1.2.3.2 NestedPCR产物序列分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第二章 海南鼠源性多瘤病毒的基因组分析 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 试剂和仪器 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.1.2.1 引物设计与合成 |
| 1.1.2.2 病毒核酸的提取 |
| 1.1.2.3 多瘤病毒PCR验证 |
| 1.1.2.4 多瘤病毒全基因组扩增 |
| 1.1.2.5 PCR产物目的条带的胶回收 |
| 1.1.2.6 回收产物的连接 |
| 1.1.2.7 连接产物转化感受态细菌及培养 |
| 1.1.2.8 病毒基因组注释与进化分析 |
| 1.1.2.9 多瘤病毒Nested PCR检测扩增技术初步建立 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 多瘤病毒基因组全长扩增 |
| 1.2.2 多瘤病毒基因组序列比较结果 |
| 1.2.2.1 基因组结构分析 |
| 1.2.2.2 多瘤病毒同源性分析 |
| 1.2.2.3 多瘤病毒进化树分析 |
| 1.2.3 多瘤病毒NestedPCR检测扩增技术初步建立 |
| 1.2.3.1 NestedPCR的扩增 |
| 1.2.3.2 Nsted PCR产物序列分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第三章 海南鼠源性Gemycirularvirus的基因组分析 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 试剂和仪器 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.1.2.1 引物设计与合成 |
| 1.1.2.2 病毒核酸的提取 |
| 1.1.2.3 Gemycirularvirus PCR验证 |
| 1.1.2.4 Gemycirularvirus全基因组扩增 |
| 1.1.2.5 PCR产物目的条带的胶回收 |
| 1.1.2.6 回收产物的连接 |
| 1.1.2.7 连接产物转化感受态细菌及培养 |
| 1.1.2.8 病毒基因组注释与进化分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 Gemycirularvirus基因组全长扩增 |
| 1.2.2 Gemycycrularvirus基因组序列比较结果 |
| 1.2.2.1 基因组结构分析 |
| 1.2.2.2 Gemycircularvirus同源性分析 |
| 1.2.2.3 Gemycircularvirus进化树分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 鼠类携带主要病毒性病原的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（9）青海省草原革蜱携带新型的RNA病毒的调查（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 蜱虫简介 |
| 1.1.1 蜱虫形态 |
| 1.1.2 蜱虫的生活史 |
| 1.1.3 蜱虫与疾病 |
| 1.2 布尼亚病毒目 |
| 1.2.1 布尼亚病毒目分类进化 |
| 1.2.2 蜱传布尼亚病毒 |
| 1.2.3 布尼亚病毒的基因结构和粒子形态 |
| 1.2.4 新型布尼亚病毒目病毒 |
| 1.3 研究的目的和意义 |
| 第2章 青海地区草原革蜱携带病毒的分析 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 样本采集和分组 |
| 2.1.2 蜱虫分类与鉴定 |
| 2.1.3 高通量测序建库、组装与注释 |
| 2.1.4 病毒序列的检测 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 蜱虫分类与鉴定 |
| 2.2.2 青海地区草原革蜱测序数据 |
| 2.2.3 青海地区草原革蜱携带病毒的分析 |
| 2.2.4 流行病学调查 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 Qinghai tick-associated Phlebovirus的M片段分析 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 M片段的筛选 |
| 3.1.2 序列分析 |
| 3.1.3 系统发育分析 |
| 3.1.4 基于流性病学调查的片段相关性分析 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 基于序列特征的片段相关性分析 |
| 3.2.2 基于系统发育的片段相关性分析 |
| 3.2.3 基于流性病学调查的片段相关性分析 |
| 3.2.4 基于reads丰度的片段相关性分析 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 讨论与展望 |
| 4.1 青海地区草原革蜱携带的RNA病毒以及其流行状况的研究 |
| 4.2 QHTPVM片段的相关分析 |
| 4.3 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）新疆蜱携病毒谱解析与斑点热感染病例分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号表 |
| 引言 |
| 第一章 新疆南北边境地区蜱种分布及蜱种鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 采样汇总 |
| 2.2 蜱种形态学鉴定 |
| 2.3 分子生物学分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 新疆边境地区蜱类研究现状 |
| 3.2 地理生境不同的蜱种差异分析 |
| 参考文献 |
| 第二章 蜱携病毒谱解析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 病毒物种相对丰度 |
| 2.2 病毒物种丰度聚类热图 |
| 2.3 病毒物种Beta多样性PCoA分析 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 立克次体合并蜱传病毒感染病例分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与处理 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 MLST方法PCR扩增结果 |
| 2.2 阳性病人蜱传立克次体检测结果及比对分析 |
| 2.3 血清学ELISA立克次体含量检测 |
| 2.4 高通量测序病毒注释结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中国蜱传立克次体病的检测 |
| 3.2 蜱传病毒性疾病 |
| 3.3 蜱传立克次体与蜱传病毒共感染协同作用致病 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 文献综述 |
| 1.蜱传病毒国内外研究现状 |
| 2.欧亚大陆蜱传立克次体研究现状病 |
| 3.问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附表1 新疆边境15个调查县市地理信息 |
| 附表2 新疆15个采样县市蜱种序列信息 |
| 附表3 5例斑点热感染病例及2只对应蜱种立克次体序列信息 |
| 附表4 蜱传病毒相关序列信息 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附件 |
四、新疆出血热媒介宿主调查总结（论文参考文献）
- [1]云南玉溪地区虫媒病毒调查及动物血清流行病学研究[D]. 凌珏. 昆明医科大学, 2021
- [2]辽宁省部分地区蜱种分布及携带主要病原的调查研究[D]. 于东海. 沈阳农业大学, 2020(04)
- [3]亚东璃眼蜱的研究现状[J]. 丁帆,郭宪国. 中国病原生物学杂志, 2020(10)
- [4]发热伴血小板减少综合征病毒传播机制及炎症小体和细胞焦亡在其感染过程中的作用研究[D]. 李志锋. 南京大学, 2020(10)
- [5]新疆南疆部分地区绵羊蜱种鉴定及蜱带立克次体检测[D]. 郗宇. 塔里木大学, 2020(11)
- [6]病毒样颗粒抗原及克里米亚刚果出血热病毒Gn/Gc宿主相互作用组的研究[D]. 戴诗雨. 中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所), 2020(02)
- [7]新疆北疆地区蜱种分布、分子特征及重要蜱传病原的分子检测[D]. 刘志强. 石河子大学, 2019(05)
- [8]海南鼠源性细小病毒、多瘤病毒及Gemycycrularvirus的基因组分析[D]. 王珊珊. 海南医学院, 2019(02)
- [9]青海省草原革蜱携带新型的RNA病毒的调查[D]. 方耀辉. 中国科学院大学(中国科学院武汉病毒研究所), 2019(08)
- [10]新疆蜱携病毒谱解析与斑点热感染病例分析[D]. 王茜. 石河子大学, 2018(01)