一、男性不育患者精浆超氧化物歧化酶同工酶活力和丙二醛含量的研究（论文文献综述）
乜照燕,吴海峰,李亮,江乾,陈丽君[1]（2022）在《畸形精子症患者中氧化应激与精子DNA损伤的关系探讨》文中研究指明目的探讨畸形精子症患者中氧化应激相关指标与精子DNA损伤变化的相关性, 以期为男性不育诊治提供理论依据。方法选取2019年1月至2019年8月在河北医科大学第四医院生殖医学科诊治的101例男性不育症患者作为研究对象, 按精子形态将患者精液标本分为两组, A组为精子正常形态≥4, B组为精子正常形态<4, 即畸形精子症组, 按世界卫生组织（WHO）精液分析第5版要求进行精液常规分析, 使用伊红-苯胺黑染色方法进行精子膜完整性检测, 吖啶橙荧光染色方法检测精子DNA损伤, 氧化应激试剂盒检测精浆丙二醛（MDA）水平、总抗氧化能力（TAC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果与A组比较, B组的前向运动精子降低, 组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;两组的精液量、精子浓度比较, 差异无统计学意义（P>0.05, 表1）。与A组比较, B组的精子膜完整性降低, 精子DNA损伤增加, 差异均有统计学意义（均P<0.05）。与A组比较, B组的TAC和SOD水平明显降低, MDA水平显着增高, 差异均有统计学意义（均P<0.05）。精子正常形态率与精子DNA损伤（r=-0.492）、活性氧水平（r=-0.645）和MDA（r=-0.439）均呈负相关（均P<0.05）。精子正常形态率与TAC（r=0.623）、SOD（r=0.547）水平均呈正相关（均P<0.05）。结论氧化应激水平的改变可导致精子活力降低、精子膜完整性降低和精子DNA损伤增加。对氧化应激的检测和抗氧化的治疗可能会预防氧化应激引起的精子形态异常以及相关指标的改变, 对于提高男性生育力有积极作用。
张继伟[2]（2021）在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究》文中研究表明背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%～30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症（肾虚肝郁型）具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组（62例）和对照组（62例）。试验组给予金龟毓麟方（制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g）。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液（国药准字:H19990372）,服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子（PR）、精子总活力（PR+NP）;次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集（PPS）数据进行统计分析。1.主要疗效指标:（1）PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异（P>0.05）:治疗8周、12周后可提高PR级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组（P<0.05）。（2）PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组（P<0.05）。2.次要疗效指标:（1）中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异（P>0.05）;与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分（P<0.05）。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组（P<0.05）。（2）精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异（P>0.05）。（3）精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异（P>0.05）。（4）受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异（P>0.05）。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑（Omidazole,ORN）诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/（kg.d）ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/（kg.d）ORN;左卡尼汀组 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/（kg.d）ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素（FSH、LH、T）、肝肾功（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:（1）大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异（P<0.05）。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组（P<0.05）。（2）大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异（P>0.05）。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:（1）大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异（P>0.05）。（2）大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降（P<0.05）。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数（P<0.05）。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）改变均无统计学差异（P>0.05）。结论:1.400 mg/（kg·d）ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）及性激素（FSH、LH、T）无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、高剂量组）,灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高（P<0.01）,SOD与GSH-Px含量降低（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低（P<0.05）,SOD与 GSH-Px 含量均升高（P<0.05,P<0.01）。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:（1）线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）:与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加（P<0.01,P<0.001）;与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率（P<0.05,P<0.01）。（2）线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异（P>0.05）;高剂量组可提高精子线粒体ATP含量（P<0.01）。3.线粒体自噬相关指标变化:（1）与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（3）与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（4）与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。（5）与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加（P<0.05,P<0.01）;低剂量组TOM20蛋白表达增高（P<0.05）。（6）与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加（P<0.05,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。
褚长江[3]（2021）在《辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究》文中认为湖羊是太湖流域着名的绵羊品种,具有四季发情、一年多胎、生长发育快、耐高湿高温、性情温顺、适合舍饲等优良性状,也是我国一级地方保护品种。实现湖羊的规模化养殖需要人工授精技术的支持,精液的保存是人工授精技术的关键步骤,因为精液保存的质量决定着受胎率、母畜产子数。精液保存方式有三种:常温保存、低温保存和冷冻保存。常温保存因操作简单、生产成本低等优点在实际生产中应用居多。常温保存过程中,活性氧（Reactive oxygen species,ROS）对精液质量的影响最大。过量ROS的产生会导致氧化应激、细胞结构损伤、精子的受精能力下降等一系列不良反应。为防止精液体外保存过程中的氧化损伤,需要在精液稀释液添加适量的抗氧化剂抵抗氧化应激,从而提高精液常温保存的质量。本试验在湖羊精液常温保存稀释液中添加抗氧化剂辅酶Q10,对20℃保存的湖羊精子活力、活率、质膜完整率、顶体完整率、活性氧（ROS）含量、丙二醛（MDA）含量、总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性以及ATP含量、线粒体膜电位（MMP）、乳酸脱氢酶活性（LDH）等指标进行检测,探究辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果,以期辅酶Q10作为湖羊精液常温保存抗氧化剂的应用提供理论依据。本试验主要获得以下研究结果:1.湖羊精液常温保存过程中添加辅酶Q10,可以改善湖羊精液的常温保存效果,且辅酶Q10的最适添加浓度为50 μmol/L。保存第5 d,精子活率达81.70%,活力达73.70%,质膜完整率达33.41%,顶体完整率达76.00%,均显着高于其他组（P<0.05）;精子的平均曲线运动速率（VCL）、平均路径速度（VAP）、头部侧摆幅度（ALH）显着高于对照组（P<0.05）。这些结果表明,在常温保存过程中辅酶Q10对湖羊精液品质具有改善作用,最适添加浓度为50μmol/L。2.检测常温保存第1、3和5 d的精子细胞内ROS含量、MDA含量、SOD活性、CAT活性和T-AOC,发现50 μmol/L添加组的ROS和MDA显着低于其他组（P<0.05）,SOD、CAT、T-AOC显着高于其他组（P<0.05）。表明辅酶Q10可以通过清除细胞内多余的ROS,降低脂质氧化程度以及提高抗氧化酶活性来保护精子细胞,以防止精子在常温保存过程发生氧化应激反应。3.检测常温保存第3、5 d的精子细胞内ATP含量、线粒体膜电位以及LDH活性,发现50μmol/L添加组的ATP含量、线粒体膜电位、LDH活性显着高于其他组（P<0.05）。表明辅酶Q10能够增强精子的线粒体功能以及能量代谢。综上所述,本试验结果表明在湖羊精液常温保存过程中,向稀释液加入50 μmol/L的辅酶Q10可以减少精液在保存过程中的氧化损伤,同时可能参与精子细胞的代谢,参与到氧化磷酸化产生ATP,提高精液保存质量,为精液保存稀释液配方改进和人工授精的应用提供参考。
杨梓涵[4]（2021）在《精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6与精子运动能力及体外受精结局的相关性分析》文中认为目的:验证活性氧（ROS）对精子的损伤作用及对精子抗氧化蛋白超氧化物歧化酶2（SOD2）和过氧化物酶6（PRDX6）表达的影响;探究SOD2和PRDX6与弱精症发生和体外受精（in vitro fertilization,IVF）结局的相关性。背景:世界范围内约有六分之一的夫妇受到不孕不育的困扰,且男方因素约占50%。研究表明ROS是男性不育的重要影响因素,过量水平的ROS可损伤精子功能。精子中的抗氧化蛋白SOD2和PRDX6被证明在抵抗ROS的损伤中起到重要作用,但仍然没有足够的临床数据对SOD2和PRDX6与弱精症发生以及IVF的关系进行阐明。我们推测弱精症患者精子运动功能障碍可能与其精子中抗氧化蛋白SOD2和PRDX6的变化有关,且两者在精子中的表达变化可能影响IVF结局。本研究有助于寻找弱精症的发病机制,为临床治疗弱精症,提高体外受精成功率提供实验证据和理论依据。研究方法:1.外源性H2O2处理正常精子,检测精子活力及存活率的变化及对胞内ROS水平和精子细胞凋亡的影响,验证ROS对精子运动能力的损伤作用,以及对精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6表达的影响;2.于重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心收集弱精症患者精液标本（PR<32%,PR+NP<40%,精子密度>15×106/ml）共84例,精子活力正常精液对照标本（PR>32%,PR+NP>40%,精子密度>15×106/ml）共55例。运用计算机辅助分析系统（computer-aided sperm analysis,CASA）检测精液常规参数及精子运动参数;运用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）和Western Blot同时对精子中SOD2和PRDX6进行定量检测,进一步统计分析SOD2和PRDX6的表达与与精液参数的相关性,并探讨其临床意义。在此基础上利用生物信息学工具预测并验证调控PRDX6的mi RNA,探讨精子中PRDX6的下调机制。3.于重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心收集接受IVF治疗患者取卵当天男方精液标本62例。q RT-PCR检测精子SOD2和PRDX6的表达,分析SOD2和PRDX6的表达与IVF结局的相关性并探讨其临床意义。研究结果:1.外源性H2O2处理优选正常精子标本后,精子细胞ROS水平增加,活力和存活率下降,凋亡数量增加,精子各项运动参数呈剂量依赖式下降,表明高浓度的ROS对精子具有毒性损伤作用,可损伤精子运动能力,通过促进精子凋亡使精子存活率下降。精子的抗氧化蛋白SOD2和PRDX6在外源性H2O2刺激后剂量依赖式上调,表明SOD2和PRDX6可被高水平ROS上调而发挥抗氧化作用。2.弱精症患者精子中SOD2和PRDX6m RNA和蛋白水平的表达均低于正常对照,且SOD2和PRDX6m RNA与精子活力有相关性,PRDX6m RNA表达具有预测精子运动能力的潜能。弱精症患者精子mi R-24-3p表达高于正常且与PRDX6蛋白表达及精子活力呈负相关。3.IVF受精率低下患者精子SOD2和PRDX6m RNA表达水平相较正常受精患者降低。结论:本研究验证了ROS对精子的损伤作用,并且证实了ROS可以上调精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6的表达。临床标本数据显示SOD2和PRDX6在弱精症患者精子中表达下调,我们推测正是这两种抗氧蛋白的表达下调导致精子更容易受到ROS的攻击而造成精子运动功能受损,引发弱精症。而mi R-24-3p可能靶向负调控PRDX6的表达而参与弱精症的发生。相关性分析结果提示PRDX6具有预测精子运动能力的潜能。SOD2和PRDX6表达下调影响精子体外受精能力,提示了其抗氧化作用对体外受精过程中的精子仍是不可或缺的。本研究为阐释弱精症的发病机制和IVF失败的原因提供了新的实验数据和理论依据。
卢桂林[5]（2021）在《补肾祛湿法对肾虚湿热型不育患者精子氧化应激水平及DFI影响的临床研究》文中认为目的:从补肾祛湿角度出发治疗男性不育症,观察其临床疗效,对比分析其对精液参数、精子DNA碎片率（DFI）、精子氧化应激水平及中医证候积分的影响。探讨补肾祛湿法对降低精子氧化应激水平、精子DNA碎片率（DFI）的相关作用机制,为中医药临床治疗男性不育症提供新思路。方法:本次研究所有病例选取南京中医药大学常州附院男科门诊2020年2月至2020年11月男性不育症就诊患者,符合诊断标准及纳入标准,且不符合排除标准,共计80例,年龄在22-50岁,选用随机数字表法将80例患者分为2组,治疗过程中治疗组脱落3例患者,对照组脱落5例患者,最终72例（治疗组共计37例,对照组共计35例）数据进入统计与分析。治疗组予内服中药方加减聚精汤,对照组予维生素E软胶囊口服治疗,两组患者遵医嘱治疗1个疗程3个月。治疗前后分别检测精液参数（精液量、液化时间、精子浓度、总活力（PR+NP）、前向运动精子比率（PR）、正常形态精子比率）、精子氧化应激水平、精子DNA碎片率（DFI）,记录与观察治疗后中医证候积分、配偶怀孕例数等相关数据。最后对所得数据采用SPSS进行统计学分析,判断临床疗效,通过比较治疗后组间精子氧化应激水平及精子DNA碎片率,评估中医药对其疗效及探讨相关机制。结果:疗效指标方面:治疗组与对照组通过治疗前后数值的对比发现均可增加精液量,降低液化时间,疗效显着,存在统计学差异（P<0.05）,但治疗后组间疗效对比不存在统计学差异（P>0.05）;治疗组与对照组均可提高精子浓度、向前运动精子比率（PR）、总活力（PR+NP）、正常形态精子比率,降低精子DNA碎片率（DFI）、精子氧化应激水平,改善中医证候积分,存在统计学差异（P<0.05）,且治疗组（中药组）优于对照组,统计学存在显着差异（P<0.05）。西医疗效评价方面:治疗组37例:痊愈3人,显效11人,有效18人,无效5人,总有效率86.49%;对照组35例:痊愈2人,显效9人,有效15人,无效9人,总有效率74.29%。中医疗效评价方面:治疗组37例:痊愈6人,显效12人,有效16人,无效3人,总有效率91.89%;对照组35例:痊愈3人,显效7人,有效19人,无效6人,总有效率82.86%。结论:1.补肾祛湿法治疗男性不育症效果显着,可明显提高患者配偶受孕几率。2.补肾祛湿法可明显增加精子密度,提高精子总活力及精子向前运动速度,降低精子畸形率及精子氧化应激水平,保护与修复精子DNA完整性。3.补肾祛湿法对改善精子氧化应激及DNA受损作用明确,其相关机制可能为通过调节下丘脑-垂体-性腺轴功能,增强男性体内激素水平,使生精细胞功能得以重新调节,改善男性精液质量参数;同时提升机体抗氧化酶活性,抑制活性氧生成,增强抗氧化能力,使精子免遭氧化应激所致损伤,有效保护细胞核及线粒体DNA,避免细胞结构遭到破坏,使精子DNA的完整性得以保障,保障精子DNA免于受损的同时可起到相关修复作用,从而降低氧化应激水平及精子DNA碎片率。
谭鹤[6]（2021）在《锌对少弱精子症大鼠生殖功能影响的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:本研究构建少弱精大鼠动物模型并进行硫酸锌干预,通过分析锌稳态的动态改变以及检测睾丸组织中氧化应激通路相关蛋白（NRF2、KEAP1、HO-1、HDAC2）和睾酮生成相关调节蛋白（LHR、St AR、CYP11A1和HSD3β1）的表达和分布,旨在探讨补锌对少弱精大鼠生殖功能的改善作用及机制。方法:23只SD雄性大鼠（SPF级、6周龄）适应性喂养一周后,随机分为三组:对照组（control,C）7只、模型组（model,M）9只、硫酸锌组（Zn SO4）7只,均使用普通饲料喂养,每周周一上午测量体重。模型组和Zn SO4组同时给予雷公藤多苷40 mg/（kg·d）灌胃造模,对照组给予等量的生理盐水灌胃,每天上午8:00-10:00为灌胃时间。4周末,随机解剖模型组两只大鼠确定少弱精模型是否造模成功,最终成功14只。从第5周开始,Zn SO4组在雷公藤多苷灌胃4 h后,给予Zn SO4（25mg/kg·d）灌胃行保护治疗,连续给药4周,同时对照组和模型组也增加第二次灌胃,给予等量的生理盐水。最终,C组7只,M组7只,Zn SO4组7只。8周后,取大鼠双侧睾丸和附睾分别称重,取新鲜附睾尾部精子检测其浓度和活力;测定血清锌、睾酮和组织锌;ELISA检测睾丸组织中氧化应激相关蛋白及组织含锌酶的含量;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组织化学技术观察睾酮生成相关调节蛋白和氧化应激相关蛋白在睾丸组织中的定位;实时荧光定量PCR和Western Blot检测睾酮生成相关调节蛋白和氧化应激相关蛋白在睾丸组织中mRNA和蛋白表达。结果:1.大鼠一般情况比较各组体重、体长、双侧睾丸和附睾平均重量无统计学差异（P>0.05）。2.大鼠精子参数比较与C组相比,M组和Zn SO4组精子浓度和活力均显着降低（P<0.05）;与M组相比,Zn SO4组精子浓度和活力均显着升高（P<0.05）。3.各组大鼠血清锌、组织锌和睾酮的比较⑵睾酮生成相关调节蛋白在各组大鼠睾丸中的定位IHC结果显示,LHR集中表达于间质细胞,St AR、CYP11A1和HSD3β1主要表达于间质细胞,生精小管基底部的精原细胞和精子中也可见。7.氧化应激相关蛋白和睾酮生成相关调节蛋白在各组大鼠睾丸中的m RNA表达⑴氧化应激相关蛋白在各组大鼠睾丸中的m RNA表达与C组相比,M组睾丸中NRF2、KEAP1和HO-1m RNA表达减少（P<0.05）,HDAC2 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;Zn SO4组睾丸中NRF2、KEAP1、HO-1和HDAC2 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。与M组相比,Zn SO4组睾丸中NRF2、KEAP1和HO-1 m RNA表达增加（P<0.05）,HDAC2 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。⑵睾酮生成相关调节蛋白在各组大鼠睾丸中的m RNA表达与C组相比,M组LHR、St AR、CYP11A1和HSD3β1 m RNA表达降低（P<0.05）;Zn SO4组睾丸中LHR、St AR、CYP11A1和HSD3β1 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。与M组相比,Zn SO4组LHR,St AR、CYP11A1和HSD3β1 m RNA表达升高（P<0.05）。⑶锌转运蛋白Zn T4、Zn T8、ZIP1和ZIP6在各组大鼠睾丸组织中m RNA表达与C组相比,M组睾丸中Zn T4、Zn T8和ZIP6 m RNA表达降低（P<0.05）,ZIP1 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;Zn SO4组睾丸中Zn T4、Zn T8、ZIP1和ZIP6 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。与M组相比,Zn SO4组睾丸中Zn T4、Zn T8和ZIP6 m RNA表达升高（P<0.05）,ZIP1 m RNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。8.氧化应激相关蛋白和睾酮生成相关调节蛋白在各组大鼠睾丸中的蛋白表达⑴氧化应激相关蛋白在各组大鼠睾丸中的蛋白表达与C组相比,M组睾丸中NRF2、HO-1和KEAP1蛋白表达减少（P<0.05）,HDAC2蛋白表达增加（P<0.05）;Zn SO4组睾丸NRF2和HO-1蛋白表达减少（P<0.05）,KEAP1和HDAC2差异无统计学意义（P>0.05）。与M组相比,Zn SO4组睾丸中NRF2、HO-1和KEAP1蛋白表达增加（P<0.05）,HDAC2蛋白表达无统计学意义（P>0.05）。⑵睾酮生成相关调节蛋白在各组大鼠睾丸中的表达与C组相比,M组LHR、St AR、CYP11A1和HSD3β1蛋白表达均显着降低（P<0.05）;Zn SO4组睾丸中LHR、CYP11A1和HSD3β1蛋白表达升高（P<0.05）,St AR蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。与M组相比,Zn SO4组LHR、St AR、CYP11A1和HSD3β1蛋白表达显着升高（P<0.05）。结论:硫酸锌处理后少弱精大鼠精液质量回升,睾丸组织结构恢复,血清锌、睾丸组织锌和含锌酶含量升高,氧化应激通路相关蛋白表达量升高以及睾丸组织抗氧化酶含量升高,睾酮生成相关蛋白表达基本恢复正常。结果提示硫酸锌可能是通过修复被破坏的锌稳态,从而激活KEAP1-NRF2/ARE信号通路并促进下游的抗氧化物质的合成,进一步调节睾酮生成相关酶的功能来改善少弱精大鼠的雄性生殖功能。
晏斌[7]（2020）在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中研究表明背景:2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计全世界大约有4850万对夫妇（8～12%）患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%～70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑（Ornidazole,ORN）制备弱精子症动物模型,观察不同剂量（200,400,800 mg/（kg·d））的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱（L-carnitine,LC）含量、附睾肉碱转运蛋白（Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2）的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/（kg·d）ORN;模型 2 组:400mg/（kg·d）ORN;模型 3组:800mg/（kg·d）ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na（由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃）。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液（0.7ml/100g）进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率（PR+NP级精子百分率）分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义（P>0.05）;模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异（P>0.05）;模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异（P<0.05）。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）,模型3组精子浓度下降（P<0.01）;与对照组比较,模型1组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率无统计学改变（P>0.05）,模型2组、模型3组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率均下降（P<0.01）。结论:1.200 mg/（kg·d）ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/（kg·d）ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/（kg·d）ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/（kg·d）ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/（kg·d）ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在（pH 7.2～7.4）0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法（Western Blotting,WB）检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）;模型组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降（P<0.05）。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,（PR+NP）级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高（P<0.05）;且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组（P<0.05）。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠（PR+NP）级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高（P<0.05）;与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异（P<0.01）;灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异（P>0.05）。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。
刘雅洁[8]（2020）在《艾烟对弱精子症大鼠精子质量的影响和抗氧化机制研究》文中研究表明背景弱精子症是以精子活力下降为主要表现的病症,是引起男性不育症的常见病因之一。氧化应激时产生的过量活性氧是造成男性弱精子症的重要原因。现代医学对于弱精子症的发病机理还没有明确定论,目前主要采用口服抗氧化剂的方法减轻弱精子症的氧化应激损伤,缺乏针对性强的靶向治疗手段。因此,探索安全高效的临床医治方法,对于改善弱精子症患者的精子质量具有重要意义。艾灸的治疗作用是一种综合效应,艾燃烧生成物作为艾灸疗法的起效因素之一,不仅具有独特的芳香气味,还拥有丰富的生物活性,具有杀菌、抗病毒,调节免疫反应,清除自由基、抗氧化,调节脂质代谢,降低炎性反应等多种作用,逐渐成为艾灸防治疾病的关键环节。目的研究不同浓度的艾烟对弱精子症大鼠精子参数的影响和对生殖系统氧化应激损伤产生的作用,探讨艾烟改善弱精子症大鼠生殖机能的作用途径,比较艾烟与香烟对机体产生的不同效应,以期为艾烟的作用和安全性提供实验依据。方法选用72只健康成年雄性Sprague Dawley大鼠作为实验动物,将其随机分为溶剂对照组、模型组、香烟组、低浓度艾烟组、中浓度艾烟组和高浓度艾烟组6组,每组12只。除溶剂对照组使用0.2%羧甲基纤维素钠溶液灌胃之外,其余各组均使用奥硝唑溶液灌胃建立弱精子症大鼠模型。从奥硝唑溶液灌胃的第11天开始,使用不同浓度的艾烟和香烟进行干预。烟雾浓度以遮光率表示,溶剂对照组和模型组的遮光率均为0%,低、中、高浓度艾烟组的遮光率分别为0.4%、2%和15%,香烟组与中浓度艾烟组的遮光率保持一致。各组每日干预1次,每次进行20分钟,每周6天,共干预8周。干预结束后,每组随机选取8只进行体重增量、睾丸质量、睾丸指数、精子质量和氧化应激等指标的检测,剩余4只对其睾丸组织的形态病理学变化进行检测。结果1.体重增量:溶剂对照组大鼠的体重增长最快,其余各组大鼠的体重增量均有不同程度的减少。与溶剂对照组相比,除中浓度艾烟组表现出一定差异（P<0.05）外,其余各组大鼠的体重增量无显着差别（P>0.05）。2.睾丸质量和睾丸指数:溶剂对照组大鼠的睾丸质量最重,其余各组大鼠的睾丸质量均有不同程度的减轻。与溶剂对照组相比,各组大鼠的睾丸质量和睾丸指数均无明显差异（P>0.05）。3.精子参数:与溶剂对照组相比,模型组大鼠的精子活力和精子活率显着降低（P<0.01,P<0.01）,VCL、VSL、VAP、ALH、LIN、WOB 和 STR 等精子动力学参数也明显下降（P<0.01或P<0.05）。不同浓度的艾烟干预后,可以改善弱精子症大鼠的精子活力、精子活率和运动能力,具体表现为低、中、高浓度的艾烟提高了弱精子症大鼠的精子活力（P<0.01,P<0.01,P<0.01）和精子活率（P<0.01,P<0.01,P<0.01）,VCL、VSL、VAP、ALH、LIN、WOB和SRT等精子动力学参数也显着上升（P<0.01或P<0.05）,并且在实验设定的浓度范围内,随着艾烟浓度的升高,精子质量的改善效果呈现递增趋势。香烟对弱精子症大鼠的精子活力和精子活率也表现出一定的促进作用（P<0.05,P<0.05）,但VCL、VSL、VAP、ALH、WOB和SRT等大部分精子动力学参数与模型组相比无显着差别（P>0.05）。4.睾丸组织GSH-Px、SOD、CAT、MDA和NOS含量:与溶剂对照组相比,模型组大鼠的睾丸组织抗氧化酶GSH-Px和CAT活性显着降低（P<0.05,P<0.01）,SOD活性无明显变化（P>0.05）,氧化产物MDA和NOS含量明显增加（P<0.01,P<0.01）。不同浓度的艾烟干预后,可以显着提高弱精子症大鼠睾丸组织抗氧化酶的活性,降低氧化产物的含量,具体表现为低浓度艾烟可以提高抗氧化酶SOD和CAT的活性（P<0.05,P<0.01）,降低氧化产物MDA和NOS的含量（P<0.01,P<0.05）;中浓度艾烟可以提高抗氧化酶GSH-Px、SOD和CAT的活性（P<0.05,P<0.05,P<0.05）,降低氧化产物NOS的含量（P<0.05）;高浓度艾烟可以提高抗氧化酶GSH-Px和CAT的活性（P<0.01,P<0.01）。不同浓度的艾烟在改善氧化应激损伤的过程中,没有表现出确切的浓度-效应规律。香烟未能改善弱精子症大鼠睾丸组织的氧化应激反应,各项指标与模型组相比无显着差别（P>0.05）。5.睾丸组织形态病理学变化:与溶剂对照组相比,模型组大鼠睾丸组织内生精小管萎缩,各级生精细胞排列紊乱、连接松散,层次和数目均减少;管腔间隙增宽,管腔内精子细胞和成熟精子减少;间质细胞轻度水肿。低、中浓度艾烟干预后,睾丸组织形态结构有不同程度的恢复,生精小管呈圆形或卵圆形,结构基本饱满;各级生精细胞数量增多,层次增加,管腔内可见精子细胞和成熟精子增多。高浓度艾烟和香烟在一定程度上加重了睾丸组织的形态结构损伤,香烟组的损伤表现更为明显。结论1.不同浓度的艾烟改善了弱精子症大鼠的精子活力、精子活率和运动能力,并且在实验设置的浓度范围内,随着艾烟浓度的升高,精子质量的改善效果呈递增趋势。2.不同浓度的艾烟提高了弱精子症大鼠睾丸组织抗氧化酶的活性,降低了氧化产物的含量,低、中浓度艾烟改善了睾丸组织形态结构损伤,推测艾烟可能通过提高机体抗氧化能力的方式,改善弱精子症大鼠的精子质量。3.香烟未能改善弱精子症大鼠的精子质量和睾丸组织的氧化应激反应,加重了睾丸组织形态结构损伤,与艾烟产生的效应不同。
赖文[9]（2019）在《MTHFR基因多态性与公猪精液品质的相关性的研究》文中研究指明公猪精液品质直接影响母猪受胎率、产仔数及后代质量,对猪场生产性能和经济效率至关重要。有研究报道,5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因缺陷会引起机体同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）水平升高,诱导产生氧化应激,并导致精子发生障碍及不育,是叶酸与Hcy代谢中的重要酶,对于调节细胞内的叶酸水平、DNA合成和甲基化具有重要作用。本论文旨在建立和检测公猪精液和血浆Hcy含量、精浆过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平,研究MTHFR基因的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）与不同品种公猪精浆中的H2O2水平和MDA水平的相关关系,以期筛选公猪精子MTHFR基因的SNP位点作为早期预警公猪精液品质的生物标志,为公猪站提前淘汰劣质公猪提供理论依据。主要研究结果如下:1)公猪精子Hcy含量与液品质的关系:试验选取健康的杜洛克、长白、大白49头,根据记录的精子密度、有效精子数和精子活力将49头公猪分为精液品质优（精子活力>80%且精子畸形率<10%）和差（精子活力<70%或精子畸形率>20%）2组。其中精液品质优的公猪33头,差的16头。精液品质差的组精子密度、有效精子数和精子活力均显着低于精液品质优的组公猪（P<0.01）,而精子畸形率显着高于精液品质优的组公猪（P<0.01）。利用高效液相色谱法检测血浆和精子的Hcy水平,并分析其与公猪精液品质的关联性。结果表明,精液品质差的组公猪精子Hcy含量显着高于精液品质优的组公猪（P<0.01）,但血浆Hcy含量无显着差异（P>0.05）。2)公猪精子MTHFR基因多态性与精液品质的关系:根据公猪站记录选取采样前3个月公猪精液利用率为100%的公猪中精液品质最好（主要是精子活力高和畸形率低,精子活力>90%和精子畸形率<5%）的公猪20头,以及利用率小于60%的公猪中精液品质最差（主要是精子活力低和畸形率高,精子活力<75%和精子畸形率>15%）的公猪20头。分别采样提取精子DNA和扩增MTHFR外显子片段。然后将40头公猪各片段的PCR原液混合,通过一代测序技术,鉴定公猪精子MTHFR外显子上的SNP位点。结果表明:公猪精子MTHFR基因外显子上共存在13个SNP位点,其中两个导致编码氨基酸改变;与人的MTHFR基因的SNP位点相比,有7个位点是一致的,没有发现与人不育症相关的MTHFR 677C>T的相似位点。采集945头杜洛克公猪、459头长白和86头大白公猪的精液样品,利用高通量SNP分型技术对1490头公猪精子样品的MTHFR的基因SNP位点进行检测,并与精液量、精子密度、总精子数、有效精子数、精子活力、精子畸形率等指标进行了关联分析。结果表明:杜洛克公猪c.450C>T位点与精子活力显着相关（P<0.05）;c.294C>T位点与总精子数和有效精子数都显着相关（P<0.05）。长白公猪c.450C>T位点与精液量显着相关;c.450C>T位点与精子密度显着相关;c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T和c.414C>G位点不仅与精子密度显着相关,还与精子畸形率显着相关（P<0.05）。没有发现SNP位点与大白公猪精液品质相关。对长白公猪符合哈达温伯格定律的c.1485A>G、c.1287A>G、c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T、和c.414C>G的6个位点和大白公猪符合哈代温伯格定律的c.1485A>G、c.1287A>G、c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T、c.450C>T、c.414C>G的7个位点进行基因连锁不平衡分析。结果表明:长白公猪精子MTHFR外显子上的6个SNP位点构成2个单倍型模块,模块1的c.1485A>G和c.1287A>G位点处于强连锁不平衡状态（D’>0.8,r2>0.33）;模块2的c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T、和c.414C>G的4个SNP两两之间均处于强连锁不平衡状态（D’>0.8,r2>0.33）;大白公猪精子MTHFR外显子上的7个SNP构成1个单倍型模块,模块中的c.1485A>G、c.1287A>G、c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T的5个SNP位点两两之间均处于强连锁不平衡状态（D’>0.8,r2>0.33）。3)试验选取170头长白公猪,检测了精浆中的H2O2和MDA水平,并与MTHFR基因的SNP位点进行关联性分析。结果表明:长白公猪MTHFR的c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T、c.414C>G和c.294C>T位点不同基因型精浆中的H2O2水平和MDA水平存在显着性差异。综上所述,本研究主要结论如下:精液品质差组公猪精子Hcy含量显着高于精液品质优组公猪,但血浆Hcy含量无显着差异。长白公猪MTHFR c.1278G>A、c.1041G>A、c.570C>T、c.414C>G和c.294C>T位点不同基因型不仅与精液品质存在显着性差异,还与精浆中的H2O2水平和MDA水平存在显着性差异,因此这些位点的多态性可能作为潜在的预测长白公猪精液品质的生物标记。
李娜[10]（2019）在《C型利钠肽（CNP）与弱精子症的相关性分析及机制探索》文中研究说明第一部分CNP与弱精子症患者精子运动功能的相关性研究[目的]检测正常人及弱精子症患者精浆中的CNP浓度,探索CNP对弱精子症患者精子活力的作用及其可能机制。[方法]本部分实验分为四部分。一、按照提前拟定的纳入排除标准,收集正常人及弱精子症患者的精液标本,对收集到的精液标本进行预处理,分离精子和精浆,运用酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测精浆中的CNP浓度;精子留备后用。二、用CNP（空白对照组:Omol/L;实验组:10-6mol/L）处理弱精子症样本的精子,分别在不同时间点（第10 min、30 min、60 min、120 min、240 min）检测各组的精子活力。三、应用CNP及各种拮抗剂处理弱精子症患者的精子,处理1h后比较各实验组及空白对照组间精子活力、cGMP水平（ELISA检测）的差异。实验分组:①空白对照组;②CNP组（10-6mol/L）;③8-Br-cGMP（cGMP（环磷酸鸟苷）类似物）组;④KT5823（PKG（cGMP依赖性蛋白激酶）抑制剂）组;⑤CNP+KT5823 组;⑥CNP+NPR-B拮抗剂组;⑦8-Br-cGMP+KT5823。四、运用RT-PCR技术分别检测正常人及弱精子症患者的精子CatSperl mRNA的表达水平,用CNP（空白对照组:Omol/L,;实验组:10-6mol/L）对弱精子症样本的精子进行处理,lh后分别检测CatSperl mRNA的表达水平。[结果]目前分别收集到正常精液标本47例和弱精子症精液标本45例,其精浆中CNP浓度分别为259.75±12.57pg/ml、223.04±20.91pg/ml,差异具有统计学意义（p<0.01）。用CNP（0mol/L、10-6rrmol/lL）对弱精子症样本的精子进行处理,CNP组的精子活力高于对照组,且在第60min和第120min时,差异最为明显（p<0.01）。精子处理1h后,比较各组的精子活力,CNP组与8-Br-cGMP组的精子活力均高于对照组（p<0.05）、CNP+KT5823组与NPR-B拮抗剂组的精子活力均低于CNP组（p<0.01）;检测各组精子内的cGMP浓度,结果与精子活力的趋势一致,即CNP组与8-Br-cGMP组的精子内cGMP浓度均高于对照组（p<0.01）、CNP+KT5823组与NPR-B措抗剂组的精子内cGMP浓度均低于CNP组（p<0.01）。弱精子症患者的精子CatSperl mRNA表达水平低于正常人（p<0.01）,用CNP（10-6mol/L）对弱精子症样本的精子处理1h后,其CatSper1 mRNA的表达水平略高于对照组,但差异无统计学意义。[结论]弱精子症患者精浆中的CNP浓度低于正常组;10-6mol/L的CNP处理精子可增加精子活力,在第60min和120min时,实验组与对照组的精子活力差异最为明显;CNP通过NPR-B/cGMP通路来增加精子的运动能力;弱精子症患者精子中的CatSper1 mRNA表达水平低于正常组,CNP对于CatSper1 mRNA表达的影响有待进一步探索。第二部分CNP对弱精子症小鼠体重和生殖系统的影响[目的]构建弱精子症动物模型,比较CNP对弱精子症小鼠体重和生殖系统的影响。[方法]应用环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）腹腔注射的方式,构建弱精子症动物模型。分组如下:①A组:空白对照（PBS）;②B组:CTX（50mg/kg/d）;③C组:CTX（50mg/kg/d）+CNP（25μg/kg/d）;④D组:CTX（50mg/kg/d）+CNP（50μig/kg/d）。药物注射方案如下:A组小鼠连续注射10天PBS,每天一次;B组小鼠连续注射5天CTX（50mg/kg/d）,然后继续注射5天PBS;C组小鼠连续注射5天CTX（50mg/kg/d）,再给予连续注射CNP（25μg/kg/d）5天;D组小鼠连续注射5天CTX（50mg/kg/d）,再给予连续注射CNP（50μμg/kg/d）5天。比较CNP对各组小鼠体重和生殖系统（精液质量、睾酮水平、生殖器官形态学）的影响。[结果]B组（14.48±1.78g）小鼠的体重明显低于A组（24.22±1.67g）,C组（17.04±0.99g）小鼠的体重高于B组,且差异具有统计学意义。与A组（2.20土0.25mg/gb.w.）相比,B组的附辜生殖腺指数（1.45±0.38mg/gb.w.）显着降低;C组和D组的附睾生殖腺指数分别为2.03±0.34mg/gb.w.和1.87±0.29mg/gb.w.,均高于B组,差异具有统计学意义（p<0.05）,而各组的睾丸生殖腺指数之间无明显差异。另外,B组的精子总活力为（18.55±3.42）%,明显低于A组（（30.50±2.30）%）;与B组相比,C组和D组的精子总活力分别为（31.25±8.93）%和（29.41±7.67）%,均高于B组,且具有统计学差异（p<0.05）。注射环磷酰胺后,B组（（2.09±0.41）×106cells/mL/two epi.）的精子密度低于对照组（（3.61±0.35）×106cells/mL/two epi.）,C组（（2.99±0.48）×106cells/mL/twoepi.）小鼠的精子密度高于B组（p<0.01）。与空白对照组相比,B组（仅注射CTX）的睾酮水平明显降低;C组、D组的睾酮水平均高于B组,且都具有统计学差异。HE染色显示,C组的睾丸、附睾的组织形态,与B组相比,损伤均有一定程度的改善,而精囊腺无明显差异。[结论]CNP可以在一定程度上改善弱精子症小鼠的生长状况,C组和D组的附睾生殖腺指数、精子活力均高于B组,且低浓度CNP对于缓解环磷酰胺对生殖系统损害的效应更为明显,此外,CNP对于环磷酰胺导致的睾酮浓度降低具有一定的拮抗作用。第三部分CNP调控精子运动功能的在体机制探索[目的]探索CNP在体调控精子运动功能的可能机制。[方法]本部分实验分为三部分。一、CNP对组织氧化应激水平的影响:取以上4组小鼠的睾丸进行匀浆,分别检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）;对睾丸和附睾组织进行ROS免疫荧光染色,分析CNP对组织氧化应激水平的影响。二、CNP对精子内cGMP及CatSperl表达的影响:取各组小鼠附睾中的精子,检测精子细胞内cGMP的浓度;取各组小鼠附睾头部中的精子,通过RT-PCR检测精子细胞内CatSperl mRNA的表达水平。三、CNP对免疫功能的影响:运用ELISA方法检测血清中TNF-α、IL-6的浓度;检测生殖道不同组织（睾丸、附睾）中TNF-α、IL-6的mRNA水平。[结果]与B组（CTX组）相比,C组（CTX+25μpg/kg/d CNP组）的GSH-Px、SOD、CAT水平更高,而C组的MDA水平低于B组,结果均具有统计学意义（p<0.05）;D组（CTX+ 50μg/kg/d CNP组）的GSH-Px、CAT水平均高于B组,D组的MDA水平低于B组,而其SOD水平与B组无明显差异。免疫荧光显示,C组和D组的睾丸组织ROS浓度低于B组,各组附睾组织的ROS水平无明显差异。C组和D组附睾精子的cGMP水平均高于B组,差异具有统计学意义;C组和D组精子细胞内CatSper1 mRNA水平高于B组,但差异无统计学意义。与A组相比,B组小鼠血清中的TNF-α、IL-6水平升高,而C组小鼠血清中的TNF-α、IL-6水平低于B组。B组睾丸、附睾中的TNF-α mRNA水平均高于A组,C组睾丸、附睾中的TNF-α mRNA水平均低于B组;B组睾丸、附睾中的IL-6 mRNA水平均高于A组,C组睾丸、附睾中的IL-6 mRNA水平均低于B组;D组附睾中的IL-6 mRNA水平均低于B组。[结论]CNP可通过增加附睾精子细胞内的cGMP水平来调节精子的运动功能;CNP还可能通过改善组织氧化应激水平、降低TNF-α和IL-6等免疫因子的表达,从而影响精子运动。
二、男性不育患者精浆超氧化物歧化酶同工酶活力和丙二醛含量的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、男性不育患者精浆超氧化物歧化酶同工酶活力和丙二醛含量的研究（论文提纲范文）
（2）金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展 |
| 1. 男性不育症中医病名认识 |
| 2. 男性不育症病因病机 |
| 3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗 |
| 4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展 |
| 1. 特发性弱精子症流行病学 |
| 2. 特发性弱精子症诊断 |
| 3. 特发性弱精子症可能病因及机制 |
| 3.1 氧化应激损伤 |
| 3.2 线粒体功能障碍 |
| 3.3 表观遗传学作用 |
| 3.4 基因异常 |
| 3.5 精子蛋白组差异 |
| 3.6 翻译后修饰 |
| 3.7 环境因素 |
| 3.8 不良生活方式 |
| 3.9 精神心理因素 |
| 4. 特发性弱精子症的治疗 |
| 4.1 一般治疗 |
| 4.2 药物治疗 |
| 4.3 辅助生殖技术 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究 |
| 前言 |
| 1. 研究伦理 |
| 2. 研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 中止/退出标准 |
| 2.6 中止/退出病例的处理 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 分组及样本量计算 |
| 3.2 研究用药及疗程 |
| 3.3 观察指标及观察时点 |
| 3.4 精液采集及精液分析 |
| 4. 统计学分析 |
| 5. 研究结果 |
| 5.1 试验入组及完成情况 |
| 5.2 一般资料分析 |
| 5.3 有效性分析 |
| 5.4 安全性分析 |
| 6. 讨论 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 动物伦理 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂与药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 实验检测指标 |
| 1.7 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况变化 |
| 2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化 |
| 2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化 |
| 2.4 大鼠精子浓度变化 |
| 2.5 大鼠精子活力变化 |
| 2.6 大鼠性激素水平变化 |
| 2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化 |
| 2.8 大鼠肝肾功指标变化 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建 |
| 3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析 |
| 3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析 |
| 4. 小结 |
| 实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验检测指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化 |
| 2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化 |
| 2.3 大鼠精子线粒体ATP变化 |
| 2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
| 附件1 |
| 附件2 |
| 中医药科技查新报告书 |
（3）辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 羊精液保存技术研究进展 |
| 1.2 羊精液常温保存稀释液成分 |
| 1.2.1 营养物质 |
| 1.2.2 缓冲物质 |
| 1.2.3 抑菌物质 |
| 1.3 羊精液品质的评价指标 |
| 1.3.1 精子活力及运动性能 |
| 1.3.2 质膜完整完整性 |
| 1.3.3 精子顶体完整性 |
| 1.3.4 活性氧(ROS)含量 |
| 1.3.5 丙二醛(MDA)含量 |
| 1.3.6 总抗氧化能力(T-AOC) |
| 1.3.7 超氧化物歧化酶(SOD)活性 |
| 1.3.8 过氧化氢酶(CAT)活性 |
| 1.3.9 三磷酸腺苷(ATP)含量 |
| 1.3.10 线粒体膜电位(MMP) |
| 1.3.11 乳酸脱氢酶(LDH)活性 |
| 1.4 精子ROS的研究进展 |
| 1.4.1 内源性来源 |
| 1.4.2 外源性来源 |
| 1.5 氧化应激的影响 |
| 1.5.1 脂质过氧化 |
| 1.5.2 蛋白功能失调 |
| 1.5.3 细胞凋亡 |
| 1.5.4 DNA损伤 |
| 1.6 抗氧化剂应用进展 |
| 1.6.1 酶类 |
| 1.6.2 维生素 |
| 1.6.3 氨基酸及多肽类 |
| 1.6.4 植物提取物 |
| 1.7 本研究的目的和意义 |
| 1.7.1 本研究的目的 |
| 1.7.2 本研究意义 |
| 第2章 辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 数据统计分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子活率的影响 |
| 2.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子活力的影响 |
| 2.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子VAP和VCL的影响 |
| 2.2.4 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ALH的影响 |
| 2.2.5 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子质膜完整率的影响 |
| 2.2.6 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子顶体完整率的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 辅酶Q_(10)对湖羊精液抗氧化能力的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.1.3 数据统计分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子T-AOC的影响 |
| 3.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子MDA含量的影响 |
| 3.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ROS含量的影响 |
| 3.2.4 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子SOD活性的影响 |
| 3.2.5 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子CAT活性的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 辅酶Q_(10)对湖羊精液能量代谢的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.1.3 数据统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子ATP含量的影响 |
| 4.2.2 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子MMP的影响 |
| 4.2.3 不同浓度辅酶Q_(10)对湖羊精子LDH相对活性的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（4）精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6与精子运动能力及体外受精结局的相关性分析（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 探讨ROS对精子运动能力及SOD2和PRDX6 表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 检测SOD2和PRDX6 在弱精症患者精子中的表达变化,探讨其与精子运动能力的相关性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 探究精子SOD2和PRDX6 的表达与IVF结局的相关性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述:活性氧(ROS)与男性不育 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表的论文 |
（5）补肾祛湿法对肾虚湿热型不育患者精子氧化应激水平及DFI影响的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理论研究 |
| 1、男性不育症的西医研究 |
| 1.1 定义 |
| 1.2 病因及病理 |
| 1.2.1 病因 |
| 1.2.2 危险因素 |
| 1.2.3 病理 |
| 1.3 男性不育症的西医治疗 |
| 1.3.1 常规治疗 |
| 1.3.2 药物治疗 |
| 1.3.3 手术治疗 |
| 1.3.4 辅助生殖技术 |
| 2、男性不育症的中医药研究 |
| 2.1 起源与发展 |
| 2.2 病因病机 |
| 2.2.1 古代中医对男性不育症的病因病机认识 |
| 2.2.2 现代中医对男性不育症的病因病机认识 |
| 2.3 中医治疗 |
| 2.3.1 中药治疗 |
| 2.3.2 针灸治疗 |
| 2.3.3 其他疗法 |
| 3、精子氧化应激及精子DNA碎片率 |
| 3.1 相关定义 |
| 3.2 精子氧化应激及精子DNA碎片率与男性不育症的关系 |
| 3.3 精子氧化应激及精子DNA碎片率的治疗现状 |
| 3.3.1 西药治疗 |
| 3.3.2 手术治疗 |
| 3.3.3 中医药治疗 |
| 第二章 临床研究 |
| 1、临床资料 |
| 1.1 研究内容 |
| 1.2 一般资料 |
| 1.3 诊断标准 |
| 1.3.1 男性不育症西医诊断标准 |
| 1.3.2 肾虚湿热证中医辨证标准 |
| 1.3.3 精液质量正常诊断标准 |
| 1.3.4 精子氧化应激水平诊断标准 |
| 1.3.5 精子DNA碎片率异常诊断标准 |
| 1.4 病例观察标准 |
| 1.4.1 纳入标准 |
| 1.4.2 排除标准 |
| 1.4.3 剔除标准 |
| 1.4.4 脱落标准及处理 |
| 2、研究方法 |
| 2.1 治疗方法 |
| 2.1.1 基础治疗 |
| 2.1.2 药物治疗 |
| 2.1.3 疗程及终点 |
| 2.1.4 注意事项 |
| 2.2 观察内容 |
| 2.2.1 一般观察内容 |
| 2.2.2 疗效性观察 |
| 2.2.3 观察节点 |
| 2.3 疗效判断标准 |
| 2.3.1 现代医学疗效评价标准 |
| 2.3.2 中医证侯疗效评价标准 |
| 2.4 统计方法 |
| 3、研究结果 |
| 3.1 治疗前两组间一般资料统计分析 |
| 3.2 治疗前后两组相关疗效指标对比分析 |
| 3.3 治疗后两组间总体疗效统计分析 |
| 3.3.1 西医总体疗效比较 |
| 3.3.2 中医证候总体疗效比较 |
| 第三章 讨论 |
| 1、补肾祛湿法治疗男性不育症的立论依据 |
| 1.1 西医对男性不育症治疗的局限性 |
| 1.2 中医对男性不育症治疗的优势 |
| 2、加减聚精汤的选药依据 |
| 3、本研究的治疗结果分析 |
| 4、补肾祛湿法治疗不育患者精子氧化应激及DNA损伤的探讨 |
| 5、总结 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 本实验的不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）锌对少弱精子症大鼠生殖功能影响的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 微量元素锌与雄性生殖功能的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 综述一 中医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 西医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态 |
| 3.2 大鼠体重,睾丸、附睾重量 |
| 3.3 大鼠睾丸、附睾脏器系数 |
| 3.4 精子浓度及活动率 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究 |
| 实验一 灵归方对ORN诱导弱精子症大鼠附睾LC相关通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 精子浓度及活动率 |
| 3.2 附睾LC含量 |
| 3.3 灵归方对附睾OCTN2蛋白表达的影响 |
| 3.4 灵归方对附睾OCTN2 mRNA表达的影响 |
| 实验二 灵归方对弱精子症大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 灵归方对血清性激素水平的影响 |
| 3.2 灵归方对附睾组织GSH-Px、SOD活性,MDA含量的影响 |
| 3.3 灵归方对睾丸、附睾组织结构的影响 |
| 讨论 |
| 1. 选择LC相关通路作为研究的依据 |
| 2. 选择ORN作为造模药物的依据 |
| 3. 灵归方组方分析 |
| 4. 灵归方改善弱精子症大鼠作用机制 |
| 4.1 灵归方增加弱精子症大鼠附睾LC含量 |
| 4.2 灵归方上调OCTN2蛋白及mRNA在附睾中的表达 |
| 4.3 灵归方抗氧化作用 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附录 |
（8）艾烟对弱精子症大鼠精子质量的影响和抗氧化机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 弱精子症的现代研究进展 |
| 1 弱精子症的病因 |
| 2 弱精子症的发病机制 |
| 3 弱精子症的治疗 |
| 4 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 氧化应激与男性不育研究进展 |
| 1 氧化应激的产生 |
| 2 氧化应激的分子机制 |
| 3 氧化应激的病理影响 |
| 4 氧化应激损伤的治疗 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述三 艾烟在氧化应激中的作用探讨 |
| 1 艾烟的抗氧化研究 |
| 2 衰老的自由基学说 |
| 3 艾烟抗氧化的作用机制 |
| 4 艾烟的安全性 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 艾烟干预弱精子症模型大鼠的实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 艾烟对弱精子症大鼠氧化应激损伤的保护机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 结语 |
| 1 结论 |
| 2 创新性 |
| 3 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）MTHFR基因多态性与公猪精液品质的相关性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 ABBREVIATION |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 前言 |
| 2 公猪精液品质的评价 |
| 2.1 精液量 |
| 2.2 精子密度 |
| 2.3 精子活力 |
| 2.4 精子形态 |
| 3 影响精液品质的因素 |
| 3.1 品种 |
| 3.2 月龄 |
| 3.3 环境 |
| 3.4 营养 |
| 4 活性氧与精子功能 |
| 4.1 精液中ROS种类及其来源 |
| 4.2 精液氧自由基清除系统 |
| 4.3 活性氧对精子形态和功能的影响 |
| 5 机体Hcy水平与雄性生殖 |
| 5.1 机体Hcy的代谢 |
| 5.2 影响机体Hcy生成的因素 |
| 5.3 Hcy的毒性作用 |
| 5.4 Hcy诱导氧化应激 |
| 5.5 Hcy对雄性生殖的影响 |
| 6 MTHFR的基因多态性 |
| 6.1 单核苷酸基因多态性 |
| 6.2 MTHFR基因的基因多态 |
| 6.3 MTHFR的基因多态性与雄性生殖 |
| 7 研究目的与意义 |
| 第二部分 试验内容 |
| 试验一 公猪机体Hcy水平对公猪精液品质的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试验动物与分组 |
| 1.2 饲养管理 |
| 1.3 试验样品的采集与制备 |
| 1.3.1 精液样品的采集 |
| 1.3.2 样品的测定方法 |
| 1.4 主要仪器与设备 |
| 1.5 主要试剂与试剂盒 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 建立高效液相色谱法检测公猪精子Hcy含量 |
| 3.2 公猪精子Hcy含量与精液品质关联分析 |
| 3 讨论 |
| 试验二 精子MTHFR基因多态性与公猪精液品质 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验样品来源 |
| 1.2 主要试剂与试剂盒 |
| 1.3 试剂的配制 |
| 1.4 精子DNA提取 |
| 1.5 PCR反应 |
| 1.6 公猪精子MTHFR基因外显子SNP的测定 |
| 1.7 单倍型和基因连锁不平衡分析 |
| 1.8 统计分析 |
| 1.9 主要分子生物学软件和分析工具 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 精子MTHFR基因多态性鉴定 |
| 2.2 不同品种公猪精子MTHFR基因多态性位点的分布频率 |
| 2.2 MTHFR基因连锁不平衡分析 |
| 2.3 公猪精子MTHFR基因多态性位点与精液品质关联分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 MTHFR基因多态性与分布频率 |
| 3.2 MTHFR基因多态性与精液品质以及雄性生殖的关系 |
| 试验三 长白公猪精子MTHFR基因多态性位点与过氧化氢和MDA含量关联分析 |
| 1 材料方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 长白公猪精子MTHFR基因多态性位点与过氧化氢含量 |
| 2.2 长白公猪精子MTHFR基因多态性位点与MDA含量 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 结语 |
| 1 研究结论 |
| 2 创新点 |
| 3 本研究的不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）C型利钠肽（CNP）与弱精子症的相关性分析及机制探索（论文提纲范文）
| 前言 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 CNP与弱精子症患者精子运动功能的相关性研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料(对象)与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 实验小结 |
| 第二部分 CNP对弱精子症小鼠体重和生殖系统的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料(对象)与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 实验小结 |
| 第三部分 CNP调控精子运动功能的在体机制探索 |
| 1 前言 |
| 2 材料(对象)与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 实验小结 |
| 致谢 |
| References |
| 综述 |
| References |
| 附件1 攻读学位期间发表论文目录 |
| 附件2 英文缩略词一览表 |
四、男性不育患者精浆超氧化物歧化酶同工酶活力和丙二醛含量的研究（论文参考文献）
- [1]畸形精子症患者中氧化应激与精子DNA损伤的关系探讨[J]. 乜照燕,吴海峰,李亮,江乾,陈丽君. 国际泌尿系统杂志, 2022(01)
- [2]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]辅酶Q10对湖羊精液常温保存效果的研究[D]. 褚长江. 扬州大学, 2021(09)
- [4]精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6与精子运动能力及体外受精结局的相关性分析[D]. 杨梓涵. 重庆医科大学, 2021(01)
- [5]补肾祛湿法对肾虚湿热型不育患者精子氧化应激水平及DFI影响的临床研究[D]. 卢桂林. 南京中医药大学, 2021(01)
- [6]锌对少弱精子症大鼠生殖功能影响的机制研究[D]. 谭鹤. 河北医科大学, 2021(02)
- [7]灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究[D]. 晏斌. 中国中医科学院, 2020(01)
- [8]艾烟对弱精子症大鼠精子质量的影响和抗氧化机制研究[D]. 刘雅洁. 北京中医药大学, 2020(04)
- [9]MTHFR基因多态性与公猪精液品质的相关性的研究[D]. 赖文. 华中农业大学, 2019(02)
- [10]C型利钠肽（CNP）与弱精子症的相关性分析及机制探索[D]. 李娜. 华中科技大学, 2019(01)