一、三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响(论文文献综述)
李昕宇[1](2021)在《小鼠Kupffer细胞的转分化研究》文中认为研究背景及目的:KCs是肝脏长期驻留的巨噬细胞,在慢性肝损伤期间KCs被激活并分泌促炎症和促纤维化细胞因子,作用于HSCs转分化形成肌成纤维细胞,最终产生胶原沉积,学术界广泛认可,HSCs是肝脏中胶原沉积的主要来源,也是肝纤维化病理过程的核心环节,而KCs除了能辅助HSCs参与纤维化以外,是否有其他途径产生胶原沉积尚未阐明。HSCs转分化成为肌成纤维细胞是肝纤维化的关键步骤,除了HSCs转分化以外,肝脏中还存在大量其他细胞转分化的现象,例如有实验研究证明了动物模型中肝细胞和胆管细胞相互转化。在肝外组织中的巨噬细胞,例如皮肤、心肌、肾脏等组织中巨噬细胞可更进一步转分化为纤维细胞并分泌胶原蛋白,和伤口损伤愈合修复密切相关。通过上述类比,提出KCs可以发生转分化的猜想,KCs转分化为类成纤维细胞后可能产生胶原沉积,甚至有可能参与肝组织损伤修复乃至肝纤维化形成。KCs的转分化理论提供了不同于传统纤维化理论着眼于HSCs的不同视角,把肝硬化的过程视为河流,HSCs的转分化可视作主干道,而KCs则可作为支流,提供了未来肝纤维化治疗的新思路和新靶点,同时给成纤维细胞提供了新的来源,完善了对肝纤维化的认识。材料和方法:首先本研究在两个不同的体外实验模型中进行平行实验:体外肝脏非实质细胞培养和精密肝切片培养。具体步骤如下:(1)构建特异性追踪KCs谱系的动物模型Emr1Cre+/-::Ribo Tag+/-的小鼠追踪KCs谱系。(2)分离KCs后进行体外培养。(3)使用精密肝切片培养技术进行精密肝片培养。(4)使用免疫荧光成像分析培养后的KCs表达的蛋白。(5)利用多聚体免疫共沉淀富集KCs,提取RNA,合成c DNA。(6)实时定量PCR(Fludigm)。其次在小鼠肝切片中进行胶原沉积研究,使用氯膦酸盐脂质体耗竭KCs,进行精密肝切片培养,对肝切片进行Masson三色染色和RT-PCR基因表达分析。最后使用IL1r敲除小鼠和Nlrp3基因敲除小鼠,使用精密肝切片培养技,实时定量PCR分析基因表达,使用LDH检测套盒定量分析肝片中细胞死亡情况。结果:(1)随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs的特征基因以及调控其表达的转录因子表达下调。(2)随着体外培养时间的推移,体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均发生:KCs中纤维化相关的基因以及调控其表达的转录因子表达上调。上述效应在非实质细胞培养和肝组织切片培养之间是高度一致的。(3)清除KCs后肝切片中胶原沉积减少。(4)Il-1r敲除小鼠的肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。(5)Nlrp3敲除小鼠肝片中细胞死亡相关基因表达与对照组没有显着差异。结论:KCs转分化在体外非实质细胞培养和精密肝切片培养两种模型中均有发生。KCs的转分化在体外培养中相对保守反应,转分化为类似成纤维细胞样的细胞,可以分泌胶原沉积相关蛋白。
刘宇飞[2](2021)在《消症丸对小鼠乳腺增生病及乳腺非典型增生、乳腺癌HCC1937细胞系的作用机制研究》文中研究指明研究目的:乳腺增生病是女性高发的良性疾病,在我国发病率高达40%左右,其临床症状有乳房胀痛、刺痛,触及乳房肿块伴压痛,时有乳头溢液等,严重影响患者生活质量。乳腺非典型增生及乳腺原位癌属于乳腺癌前病变范畴,随着疾病进展会逐渐演变为浸润性癌,影响患者生存。消症丸是基于张介宾《景岳全书》中柴胡疏肝散加减而成的中成药,临床研究表明该药能有效治疗乳腺增生病,且药物不良反应少,在临床中已经广泛应用。本研究将分为两大部分,分别探讨消症丸治疗乳腺增生病的作用机制,以及治疗乳腺非典型增生和原位癌的作用机制,以期为消症丸的临床应用及扩大药物临床适应证提供实验数据支持。研究方法:(1)消症丸治疗乳腺增生病的作用机制研究:通过网络药理学研究分析消症丸所含中药的有效化学成分,以及治疗乳腺增生病的关键化学成分、关键蛋白、主要生物学过程以及关键通路。建立乳腺增生病小鼠模型,通过检测激素水平以及HE观察病理形态验证模型建立情况;消症丸各剂量干预后,测定小鼠脏器指数变化;ELISA检测激素E2、P、LH、FSH水平;免疫组化法检测ERα、ERβ、PR表达;Western Blotting检测增殖相关蛋白Raf1、ERK1/2、ELK表达,以及血管生成相关蛋白HIF-1α、VEGFA、bFGF的表达。通过代谢组学分析模型组与对照组、消症丸各剂量组与模型组之间的代谢差异,筛选差异代谢物,分析其变化趋势、差异代谢物之间的作用关系以及作用涉及的代谢通路等。(2)消症丸治疗乳腺非典型增生及原位癌的作用机制研究:网络药理学分析消症丸治疗乳腺非典型增生及原位癌的关键化学成分、关键蛋白、主要生物学过程以及关键通路。建立乳腺非典型增生小鼠模型,HE染色验证模型;免疫组化检测ERα、ERβ、PR以及炎症指标TNF-α、IL-1β、iNOS表达;Western Blotting检测炎症相关蛋白FAK、Gas6、Axl的表达。体外实验验证消症丸主要有效成分柴胡皂苷A对乳腺原位癌细胞HCC1937的影响,MTT法检测细胞增殖抑制率并计算IC50值;倒置显微镜观察细胞形态,Hoechst 33258染色实验观察细胞核改变;划痕实验、Transwell小室实验观察细胞迁移及侵袭能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3 的表达。研究结果:(1)消症丸共包括78个药物活性成分,其活性成分的治疗作用靶点共123个,匹配4656个乳腺增生病靶点后,得到99个消症丸治疗乳腺增生病的可能作用靶点。与治疗作用最相关的活性成分包括槲皮素、木犀草素、山奈酚、川陈皮素等,与治疗相关的核心靶点包括IL6、EGFR、VEGFA、CASP3、MAPK8、ER等,与治疗相关的关键通路包括HIF-1信号通路、MAPK信号通路等。(2)激素造模法能有效建立小鼠乳腺增生病模型。消症丸对小鼠脏器指数及肝组织形态无异常影响;消症丸使乳腺增生病小鼠的E2、FSH水平降低,P、LH水平升高;消症丸能恢复小鼠乳腺组织的正常结构,降低乳腺导管上皮内ERα、ERβ、PR表达;消症丸可抑制Raf-ERK-ELK通路蛋白表达,也可抑制HIF-1α、bFGF的蛋白表达,但对VEGFA蛋白的影响不显着。(3)代谢组学分析共发现654种代谢产物,模型组与空白组相比,有36个代谢物显着上调,5个显着下调。将消症丸低、中、高剂量组与模型组进行比较,分别有7个、30个、36个代谢物显着上调,以及分别有19个、25个、34个代谢物显着下调。四组比较数据的交集代谢产物包括:牛磺胆酸、牛磺-α-鼠胆酸钠盐、甘氨胆酸、胆固醇花生四烯酸酯、二十碳五烯酸等,KEGG分析发现,消症丸低、中、高剂量组治疗乳腺增生病与胆固醇代谢(map04979)、代谢通路(map01100)、HIF-1信号通路(map04066)等相关。(4)消症丸的123个作用靶点匹配8087个疾病靶点后,筛选出消症丸治疗乳腺非典型增生及原位癌的关键蛋白包括GAS6、AXL、IL6、VEGFA、EGFR等,关键通路包括细胞凋亡、TNF信号通路等。(5)DMBA联合激素造模法能有效建立小鼠乳腺非典型增生模型。高剂量消症丸以及联用FAK抑制剂能使乳腺非典型病变小鼠乳腺组织的结构趋于正常,降低乳腺导管上皮内ERα、ERβ、PR表达以及炎症因子TNF-α、IL-1β水平。高剂量消症丸对FAK蛋白磷酸化以及Gas6的蛋白抑制作用明显,联用FAK抑制剂后对Gas6的蛋白抑制作用更为显着。各组对Axl蛋白磷酸化作用不显着。(6)消症丸主要成分柴胡皂苷A可抑制乳腺原位癌HCC1937细胞的增殖,破坏细胞形态,降低细胞的迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。柴胡皂苷A能上调 Bax 表达,并下调 Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 表达。研究结论:(1)消症丸能改善乳腺增生病小鼠的激素水平,抑制乳腺上皮细胞过度增殖,作用机制与FGF-Raf-ERK-ELK通路相关。代谢组学研究提示消症丸治疗小鼠乳腺增生病与胆固醇代谢等相关。(2)消症丸能治疗小鼠乳腺非典型增生,降低乳腺组织的炎症水平,其作用机制与FAK-Gas6信号通路相关。体外实验表明柴胡皂苷A对乳腺原位癌HCC1937细胞具有诱导凋亡的作用,其机制与内源性线粒体凋亡途径相关。
鲁丁强,庞广昌[3](2021)在《G蛋白偶联雌激素受体研究进展及在食品功能评价中的应用》文中指出大量研究结果证明,尽管植物化学物、中草药和植物雌激素类化合物都具有丰富性、多样性,但是在结构和功能上却显示出很多共性——几乎都具有雌激素类功能。研究还发现,大多数植物雌激素类化合物均能与雌激素受体(estrogen receptors,ERs),特别是ERα和ERβ相识别,进一步与核受体超家族形成互作网络,调节细胞核中基因的表达、修饰,从而控制机体的营养和能量代谢以及表观遗传适应。但一个关键的问题是,这些植物雌激素类化合物不仅可以控制慢速的以转录为基础的信号途径,还可以调节快速的以钙离子通道为基础的神经与内分泌信号途径,而后者需要依赖于G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptors,GPCRs)。近年来的研究结果发现,GPR30/G蛋白偶联雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)就是构成两条信号途径的关键节点,本文将围绕GPER的研究进展及其在食品功能评价等方面的应用进行综述、分析和展望。
赵帅[4](2020)在《九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌移植瘤生长抑制作用》文中进行了进一步梳理九香虫Aspongopus chinensis Dallas,1851为半翅目Hemiptera兜蝽科Dinidoridae药用昆虫,始记载于《本草纲目》;传统常用于支气管炎、胃痛、性功能障碍、子宫内膜异位症等多种疾病的治疗;现代医学证明其具有抗癌、抗菌等作用,其血淋巴可体外抑制人乳腺癌细胞、胃癌细胞的增殖。但其作为药物开发利用必须环节的动物模型研究(体内实验)仍不明确。本研究在进一步确认九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞体外生长具抑制作用的基础上,开展了小鼠乳腺癌4T1移植瘤动物模型的构建、九香虫血淋巴及血淋巴和常规化疗药物顺铂联合用药对移植瘤体内生长的影响研究,明确了九香虫血淋巴体内、外对小鼠乳腺癌4T1细胞的作用效果和联合用药效果。具体研究方法及结果如下:1.九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞体外生长的影响九香虫血淋巴作用于小鼠乳腺癌4T1细胞,通过形态学观察,发现九香虫血淋巴可促使乳腺癌细胞皱缩及漂浮细胞的增多;MTT法检测显示,九香虫血淋巴可显着抑制乳腺癌细胞的增殖,具有时间及浓度依赖性;Hoechst 33258染色法检测显示,随着九香虫血淋巴作用时间的增加,凋亡细胞比例增加;流式细胞术检测显示,随着九香虫血淋巴浓度的升高,S期细胞比例显着性增多,G1期细胞比例显着性减少,显着阻滞乳腺癌细胞于S期。2.九香虫血淋巴灌胃给药对小鼠乳腺癌移植瘤体内生长的影响构建小鼠乳腺癌移植瘤动物模型,通过观察治疗期间乳腺癌瘤体及小鼠体重的变化,血常规观察血细胞变化,瘤体及肝、脾、肺、肾重量变化,H&E染色观察组织结构变化,探究不同浓度九香虫血淋巴灌胃用药对乳腺癌移植瘤的影响。结果显示,九香虫血淋巴灌胃给药抑制乳腺癌移植瘤生长抑制效果不明显,对小鼠生长状态及肝、脾、肺、肾无明显影响;对顺铂抑制乳腺癌肿瘤效果及引起的小鼠体重、肝、脾减轻的副作用,联合用药无明显增效减毒作用。3.九香虫血淋巴腹腔注射给药对小鼠乳腺癌移植瘤体内生长的影响利用2中方法开展了九香虫血淋巴腹腔注射给药对小鼠乳腺癌移植瘤体内生长的影响研究,并利用Hoechst 33258染色观察了肿瘤组织凋亡,探究腹腔注射不同浓度九香虫血淋巴对乳腺癌移植瘤的影响。结果显示九香虫血淋巴腹腔注射给药可显着抑制乳腺癌移植瘤的生长,诱导肿瘤组织细胞的凋亡;可缓解顺铂引起的小鼠体重、肝、脾减轻及血小板减少的副作用,但不能明显增强顺铂抑制乳腺癌肿瘤的效果。综上:九香虫血淋巴体内、外具有良好的抗乳腺癌活性,对生物体本身无明显毒副作用,且可以缓解部分抗癌药物产生的毒副作用。
李春梅[5](2020)在《三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚在典型果蔬中的分布特征及毒性作用研究》文中指出典型农药用非离子表面活性剂三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚(TSPEOs)是一组由不同聚合物组成的混合物,在农药制剂生产中广泛使用。然而,目前国内外仅开展了少量有关TSPEOs检测技术的研究,其在农产品中的浓度水平仍然不清,迁移转化行为不明,风险未知。因此,本文首先针对TSPEOs在果品中的安全水平不清问题,开展了TSPEOs在我国主产区桃、樱桃、猕猴桃果品中的残留水平调查,并对其健康风险进行了评估,结果显示果品中TSPEOs检出率100%,其浓度水平与多菌灵和啶虫脒的残留水平显着相关(P<0.05),但急性和慢性膳食风险值分别为4.7-8.1%和0.1-2.0%,风险较低。进一步针对TSPEOs在蔬菜种植过程中的迁移转化行为不明问题,开展了 TSPEOs在油麦菜不同种植模式中的降解规律研究。结果表明不同聚合度TSPEOs在油麦菜露地和设施模式下的降解半衰期分别为1.82-4.34 d和2.18-5.39 d;露地模式下,TSPEOs在油麦菜中降解速率更快,其中高聚合度TSPEOn(n=10-18)降解速率更快;设施模式下,高聚合度TSPEOn(n=14-18)在油麦菜中会逐渐向低聚合度单体降解,该研究为制定TSPEOs在蔬菜上的管理措施和使用标准提供了科学数据支撑。在上述研究基础上,针对TSPEOs在农产品中普遍存在所引发的潜在健康风险问题,开展了不同聚合度TSPEOs助剂系列产品对小鼠的28 d亚慢性毒性效应研究。结果显示TSPEOs可显着抑制小鼠的生长,且农乳602#的主要毒性靶器官是肝脏,肝脏抗氧化酶活性的显着改变可能是导致其损伤的重要机制之一,而农乳604#的主要毒性靶器官是胃,该研究为综合评价TSPEOs助剂健康风险提供了科学依据。最后,针对TSPEOs大量使用可能威胁生态环境健康问题,开展了不同聚合度TSPEOs助剂系列产品对斑马鱼的急性毒性研究,结果显示TSPEOs对斑马鱼的急性毒性会随着聚合度的升高而降低,其中农乳604#毒性最高,为中高等毒性。进一步采用UPLC-QExactive-MS代谢组学方法研究了其对斑马鱼的胚胎毒性,筛选出潜在生物标志物13个,标志物的生物功能表明农乳602#可引起斑马鱼胚胎抗氧化系统异常、脂肪酸和碳水化合物代谢紊乱,而农乳604#主要导致脂肪酸和碳水化合物代谢紊乱,该研究有助于推进TSPEOs的生态风险评估及其安全使用。
吕鹏[6](2020)在《龙贝逍遥散调控miR-145/c-Myc/TP53信号通路抗乳腺癌机制研究》文中研究说明乳腺癌是世界最常见的恶性肿瘤之一。我国乳腺癌的死亡率呈持续上升趋势,据世界卫生组织国际癌症研究中心IARC预计,在2030年我国乳腺癌发病数可达到23.4万例。目前,紫杉类药物及蒽环类药物仍是治疗乳腺癌单药有效的化疗药物。然而,临床实践证实仍有30%~50%的乳腺癌患者对其不敏感。中医药在乳腺癌多学科综合治疗方案具有生存时间及生活质量优势。乳腺癌属于中医学“乳岩”及“乳石痈”等范畴。根据乳腺癌“肝郁脾虚、痰瘀互阻”的病机特点,课题组提出乳腺癌的基本治则是“疏肝健脾,活血化痰”。逍遥散具疏肝解郁,健脾养血之功,为疏肝健脾的经典古方。加入具有活血化痰功效的穿山龙、浙贝母组成的龙贝逍遥散辨证加减应用于临床取得较好临床疗效,机制研究发现逍遥散类方剂抗乳腺癌癌作用可能与调控凋亡相关基因及靶蛋白表达有关。乳腺癌是一个多基因、多因素、多阶段及多途径的复杂过程,乳腺癌的发生和发展包括遗传改变和表观遗传的改变。从遗传及表观遗传方面综合深入探索其靶点及作用机制,为临床验方龙贝逍遥散推广应用于乳腺癌的综合治疗方案具有重要意义。目的1.在明确龙贝逍遥散对人正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞增殖与迁移作用,以及miR-145甲基化及低表达对乳腺癌细胞增殖与迁移的作用及作用机制的前提下,明确龙贝逍遥散体外对乳腺癌细胞的作用机制;2.明确龙贝逍遥散对体内乳腺癌移植瘤的作用及作用机制。方法1.体外实验观察龙贝逍遥散抑制乳腺癌细胞增殖与迁移的作用及作用机制研究:①龙贝逍遥散抑制人乳腺癌细胞功能实验:CCK-8法筛选龙贝逍遥散抑制乳腺癌细胞增殖的浓度;根据IC50值的药物浓度进行细胞划痕实验,检测龙贝逍遥散抑制乳腺癌细胞迁移的作用;②慢病毒转染miR-145入乳腺癌细胞系MDA-MB-231,CCK8法及划痕实验检测miR-145对乳腺癌细胞增殖与迁移作用,qPCR法检测miR-145对miR-145/c-Myc/TP53信号通路及凋亡相关基因caspase3、Bcl-2及Bax表达的影响;③BSP及qPCR法检测龙贝逍遥散冻干粉乳腺癌细胞miR-145启动子甲基化及miR-145表达的调控作用,以及龙贝逍遥散冻干粉对miR-145/c-Myc/TP53信号通路及凋亡相关基因caspase3、Bcl-2及Bax表达的影响。2.体内移植瘤实验观察龙贝逍遥散对乳腺癌移植瘤的作用及作用机制研究:构建MDA-MB-231及高表达miR-145的MDA-MB-231的乳腺癌移植瘤模型,设立正常对照组、肿瘤模型组、高表达miR-145移植瘤组、龙贝逍遥散冻干粉组、紫杉醇组、联合用药组(龙贝逍遥散冻干粉联合紫杉醇)进行药物干预,观察裸鼠一般状态;给药结束后剥离瘤体,测量移植瘤长短径,计算瘤体积、移植瘤瘤重和抑瘤率;观察裸鼠生存期;BSP及qPCR方法检测龙贝逍遥散对移植瘤组织miR-145启动子甲基化及miR-145表达的影响,以及龙贝逍遥散对miR-145/c-Myc/TP53通路及凋亡相关基因caspase3、Bcl-2及B ax表达的影响。结果1.体外实验龙贝逍遥散抑制乳腺癌细胞增殖与迁移的作用及作用机制:①龙贝逍遥散冻干粉对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的IC50值,48h为0.7613mg/ml,72h为0.7664mg/ml。龙贝逍遥散冻干粉对ER阳性乳腺癌细胞株MCF-7的IC50值,48h为1.261mg/ml,72h为1.095mg/ml。龙贝逍遥散冻干粉对人正常乳腺上皮细胞 MCF-10A 的 IC50 值,48h 为 2.891mg/ml,72h 为 2.423mg/ml。MDA-MB-231细胞IC50值最小,对中药最为敏感,而正常乳腺上皮细胞MCF-10A的IC50值最大,表明该细胞对中药处理最为耐受;且龙贝逍遥散冻干粉在MCF-7及MDA-MB-231的IC50值内对MCF-10A无明显抑制作用甚至促增殖作用。相同条件培养48h后,根据MDA-MB-231及MCF-7的IC50值浓度,龙贝逍遥散冻干粉能明显抑制乳腺癌细胞迁移(P<0.05),而对人正常乳腺上皮细胞迁移无明显抑制作用(P>0.05)。②荟萃分析结果表明,miR-145在乳腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织和正常乳腺组织,SMD为-2.90(95%CI=-3.11,-2.70)。此外,ER阳性和HER-2阳性乳腺癌组织中miR-145表达明显低于ER及HER-2阴性乳腺癌组织。miR-145在淋巴结转移阴性或直径小于2cm的乳腺癌患者中的表达明显高于淋巴结转移阳性或直径大于2cm的乳腺癌患者(P<0.001)。MCF-7及MDA-MB-231乳腺癌细胞miR-145启动子处于高甲基化状态,其miR-145表达明显低于人正常乳腺上皮细胞MCF-10A;慢病毒转染miR-145入MDA-MB-231细胞后,发现miR-145能抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖与迁移。过表达miR-145可上调MDA-MB-231细胞Bax及caspase3 mRNA表达水平(P<0.01),下调c-Myc及Bcl-2的mRNA表达水平(P<0.01;P<0.001),但对TP53无显着影响(P>0.05)。③龙贝逍遥散冻干粉0.8mg/ml干预MDA-MB-231细胞24h后,可部分下调MDA-MB-231细胞miR-145启动子的甲基化状态,并可上调MDA-MB-231细胞miR-145、TP53、Bax 及 caspase3 mRNA 表达水平(P<0.01),下调 c-Myc 及 Bcl-2 的mRNA表达水平(P<0.05;P<0.01)。2.龙贝逍遥散对体内乳腺癌移植瘤的作用及作用机制:①miR-145高表达移植瘤组、龙贝逍遥散冻干粉组、联合用药组及正常对照组裸鼠状态较好,反应灵敏,活动及饮食、饮水量正常,皮肤红润;模型对照组及紫杉醇组裸鼠一般状态较差。②各组裸鼠腋下移植瘤持续增长,模型对照组裸鼠瘤块生长速度从给药后第4天开始明显快于miR-145高表达移植瘤组、紫杉醇组、龙贝逍遥散冻干粉组、联合用药组。药物干预10天后取材,肿瘤模型组、高表达miR-145移植瘤组、龙贝逍遥散冻干粉组、PTX组及联合用药组瘤重分别为1.01±0.20g、0.73±0.13g、0.55±0.10g、0.53±0.10g及0.42±0.04g。高表达miR-145移植瘤组、龙贝逍遥散冻干粉组、PTX组及联合用药组的抑瘤率分别为27.72%、45.54%、47.52%及58.42%,联合用药组对三阴性乳腺癌移植瘤的抑瘤率最高。③利用Log-rank(Mantel-Cox)test(conservative)统计分析生存期,龙贝逍遥散组生存期优于联合用药组优于高表达miR-145移植瘤组优于PTX组优于肿瘤模型组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。④体内机制研究表明,经过药物干预后,龙贝逍遥散冻干粉分及联合用药组移植瘤组织细胞miR-145表达较肿瘤模型组比较明显上升(P<0.01),PTX组较肿瘤模型组具有上升趋势(P>0.05)。与肿瘤模型组比较,龙贝逍遥散冻干粉组、PTX组及联合用药组TP53、caspase3及BAX相对表达量不同程度上升,c-Myc及BCL-2相对表达量呈现不同程度下调,且龙贝逍遥散冻干粉联合应用PTX较单纯应用PTX比较,在TP53、c-Myc及BCL-2mRNA相对表达量上具有协同作用(P<0.05)。结论1.龙贝逍遥散能抑制乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231的增殖与迁移,在抑制乳腺癌细胞的有效剂量内对人正常乳腺上皮细胞MCF-10A无明显增殖抑制作用,显示出一定的靶向性,尤其对于三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞最为敏感;2.基于文献荟萃分析及细胞实验证实miR-145启动子甲基化及低表达与乳腺癌发生发展密切相关,miR-145可通过调节miR-145/c-Myc/TP53信号通路及凋亡相关基因表达抑制乳腺癌细胞增殖与迁移;3.龙贝逍遥散抑制乳腺癌细胞增殖与迁移的机制可能与通过miR-145启动子去甲基化调控miR-145/c-Myc/TP53信号通路及凋亡相关基因caspase3、Bcl-2及Bax等表达有关;4.龙贝逍遥散可改善乳腺癌移植瘤小鼠的一般状态,提高小鼠生存质量,延长小鼠生存期,抑制小鼠乳腺癌移植瘤的生长,与紫杉醇联合应用能提高紫杉醇的抑瘤作用,其作用机制可能通过miR-145启动子去甲基化调控miR-145/c-Myc/TP53信号通路及凋亡相关基因caspase3、Bcl-2及Bax等发挥抗小鼠移植瘤作用。
王敏[7](2020)在《三种民族药的药理作用初步研究》文中提出本论文总结了硕士期间的课题研究工作,共分三章进行论述。第一章阐述了三叶悬钩子(Rubus delavayi)抗旋毛虫的体内及体外活性;第二章讲述了分心木(Diaphragma juglandis)抗肾虚的作用;第三章论述了灰毛康定黄芪(Astragalus tatsienensis var.incanus)急性毒性的实验研究工作。目的:探究三种药用植物的药理活性或毒性,并寻找其活性成分,从而为这三种药用植物的开发奠定基础。方法:建立体外培养旋毛虫和小鼠感染旋毛虫模型用于评价三叶悬钩子水提物对旋毛虫的体外及体内活性,并追踪活性部位。采用氢化可的松诱导小鼠肾阴虚和肾阳虚模型用于探究分心木对肾虚的作用。对灰毛康定黄芪进行急性毒性评价。结果:1、三叶悬钩子具有一定的体外抗旋毛虫活性,且呈现出浓度依赖性。对于七日龄成虫,28.57 mg/m L和7.41 mg/m L的三叶悬钩子给予10 h,或者3.85 mg/m L药物给予20 h能杀灭全部成虫;而空白组(RPMI-1640)、阴性组(CMC-Na)和1.96 mg/m L的三叶悬钩子组的成虫在给药48 h后才能全部死亡。对于八日龄成虫,28.57 mg/m L的三叶悬钩子给予3 h,16.67 mg/m L药物给予18 h,或7.41 mg/m L和1.96 mg/m L药物给予42 h能杀灭全部成虫;空白组和阴性组观察至72 h时多数死亡,少数存活且活动减弱。肌幼虫在三叶悬钩子2 mg/m L和吡喹酮1 mg/m L,给药48 h后肌幼虫全部死亡。而肌幼虫囊包直接给药后并不能杀伤肌幼虫,其死亡率为0%。2、小鼠对旋毛虫的免疫应答有性别差异。与正常小鼠相比,仅感染旋毛虫的雄性小鼠的胸腺系数明显增大(t=4.595,P<0.05);淋巴细胞百分比明显下降而单核细胞和粒细胞百分比明显上升(t=2.604,P<0.05);胸腺组织变化不明显而脾脏组织变化明显;免疫调节性T细胞比例上升,但无统计学意义。感染旋毛虫后,小鼠血清中细胞因子变化也存在雌雄差异,与正常小鼠相比,感染旋毛虫的雌性小鼠IL-2含量上升而雄性小鼠下降(F=5.664,P<0.05);雄性和雌性小鼠的IL-4、IL-10含量均上升(F=10.461,P<0.05;F=1.170,P>0.05),且雄性高于雌性。因此雄性小鼠对旋毛虫的免疫应答强于雌性小鼠。3、三叶悬钩子在体内也有抗旋毛虫活性。(1)三叶悬钩子水提物对不同时期旋毛虫均有杀灭活性。对成虫期效果最佳的是1000 mg/kg的药物,减虫率为35.93%;移行期效果最佳的是500 mg/kg的药物,减虫率为73.29%;成囊期效果较好的是500 mg/kg的药物,减虫率为34.27%。(2)三叶悬钩子水提物(500、200、80 mg/kg)对旋毛虫三个时期的体内杀伤活性有时间依赖性和浓度依赖性。对于成虫期的旋毛虫,效果最好的是感染3 h后给予80 mg/kg药物,其减虫率为77.31%;其次为感染48 h后给予80 mg/kg药物,其减虫率为48.41%;效果最差的是感染24 h后给药,给予80 mg/kg药物其减虫率最高仅为24.34%。因此,三叶悬钩子对小肠成虫期的最佳给药时间为感染3 h后,最佳给药剂量为80 mg/kg。对于移行期的旋毛虫,效果最佳的是感染15 d后给予500 mg/kg药物,其减虫率为43.14%;其次为感染20 d后给予200 mg/kg药物,其减虫率为28.30%;感染7 d后给药的效果最差,给予80 mg/kg药物其最高减虫率为20.71%。故幼虫移行期最佳给药时间为感染后第15 d,最佳给药剂量为500 mg/kg。(3)三叶悬钩子的不同溶剂提取部位对小肠成虫期旋毛虫繁殖均有抑制作用。其中抑制作用最强的是水总提物1000 mg/kg组,其减虫率为67.51%。其次为三叶悬钩子纯水洗脱部位1000 mg/kg,减虫率为61.62%;杀虫效果作用最强的是化合物jrd-14a 50 mg/kg,其减虫率为78.36%。4、分心木及去除无机元素的分心木S1和分心木S2对肾虚小鼠具有保护作用。(1)对肾阴虚的作用。分心木可升高肾阴虚小鼠降低的脾脏和胸腺指数;分心木和分心木S2样品可修复模型小鼠受损的肾脏、睾丸、输卵管、子宫和卵巢组织;分心木及分心木S1样品可显着升高模型小鼠的血清肌酐、睾酮、雌二醇含量。以上结果显示,分心木三个样品均具有一定程度治疗肾阴虚的作用,效果较明显的是分心木样品组。(2)对肾阳虚的作用。分心木、分心木S1和分心木S2可提高肾阳虚小鼠降低的脾脏和胸腺指数;分心木、分心木S1和分心木S2样品可修复模型小鼠受损的肾脏、睾丸、输卵管、子宫、卵巢组织;与模型组相比,分心木和分心木S1样品可升高肌酐含量,分心木S2样品可升高睾酮含量、降低雌二醇含量。以上结果显示,分心木三个样品均具有一定程度治疗肾阳虚的作用,但三个分心木样品组之间差异并不显着。5、灰毛康定黄芪的急性毒性实验。给予灰毛康定黄芪提取物后,小鼠心脏和肾髓质没有病理表现,部分肝细胞出现水肿,肾皮质中的肾小体数量增加。雌性小鼠白细胞、单核细胞、红细胞增多,但血红蛋白浓度和含量减少。结论:1、三叶悬钩子具有一定的体外抗旋毛虫活性,且呈现出浓度依赖性。杀七日龄成虫最佳浓度为28.57 mg/m L和7.41 mg/m L。杀八日龄成虫最佳浓度为28.57 mg/m L。三叶悬钩子2 mg/m L给药48 h可以完全杀灭肌幼虫,而对肌幼虫囊包无效。三叶悬钩子在体内也有抗旋毛虫活性,对旋毛虫三个发育时期均有效果。对成虫期的旋毛虫效果最好的是感染后3 h给予80 mg/kg的药物;对于移行期的旋毛虫效果最好的是感染后15 d给予500 mg/kg的药物。三叶悬钩子活性部位追踪结果显示抑制作用最强的是化合物jrd-14a。2、分心木三个样品对肾阴虚均有治疗作用,效果较明显的是分心木样品。分心木三个样品对肾阳虚也均有治疗作用,但三个样品组之间差异不显着。3、灰毛康定黄芪不具有强烈的急性毒性,仅对部分组织和血液指标产生影响。
张暖[8](2020)在《齐元富教授治疗乳腺癌用药规律及其核心方调控Wnt/β-eatenin信号通路的实验研究》文中研究指明目的:1.研究齐元富教授治疗乳腺癌用药规律,提取齐元富教授治疗乳腺癌的核心方及新方。2.研究乳腺癌核心方对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长、增殖、迁移、侵袭及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:1.收集齐元富教授治疗乳腺癌的处方,采用中医传承辅助平台系统进行数据分析,得到药物频次、处方规律、新方分析等结果,并提取齐元富教授治疗乳腺癌的核心方,探讨其治疗乳腺癌的特色。2.制备乳腺癌核心方含药血清,进行体外细胞培养实验,通过MTT法、细胞计数法观察乳腺癌核心方含药血清对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长增殖的影响,通过HE染色法观察乳腺癌核心方含药血清对人乳腺癌细胞MDA-MB-231形态的影响,通过划痕试验、Transwell实验观察其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移、侵袭能力的影响,通过Western blot实验观察乳腺癌核心方对Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达量的影响。结果:1.齐元富教授治疗乳腺癌,用药药性以寒、温、平为主,五味以苦、甘、辛为主。归经以肝经为主。药物频次排在前十位的药物为:柴胡、重楼、甘草、佛手、合欢皮、薏苡仁、浙贝母、太子参、白花蛇舌草、白术。基于关联规则分析常用药对:柴胡、重楼;佛手、合欢皮;白术、枳壳;白英、蛇莓。得到齐元富教授治疗乳腺癌新处方7个。2.乳腺癌核心方:柴胡15g重楼15g甘草15g佛手30g合欢皮30g薏苡仁45g浙贝母30g太子参30g白花蛇舌草24g白术15g夏枯草15g莪术15g枳壳15g白英15g蛇莓15g。3.MTT实验各含药血清组均在药物干预24h后出现抑制作用,随着药物浓度增加,抑制作用逐渐增强。HE染色后,各药组细胞数量明显减少,细胞变小变圆,呈多边形,细胞团缩在一起,胞质和胞核区别不明显。乳腺癌核心方含药血清可有效抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长、增殖、迁移、侵袭,联合阿霉素具有协同作用。乳腺癌核心方含药血清可下调β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达,纠正Wnt/β-catenin通路紊乱,进而抑制乳腺癌转移。结论:1.基于中医传承辅助平台对齐元富教授治疗乳腺癌进行数据挖掘,探索出其用药规律,为临床治疗乳腺癌提供了更多的选择。2.乳腺癌核心方具有抑制乳腺癌生长、增殖、迁移、侵袭的作用,其机理可能与调控Wnt/β-catenin通路有关。
李玢[9](2020)在《芳香烃受体核转运子(ARNT)促进骨骼肌再生的作用机制研究与应用》文中研究说明研究背景和目的:骨骼肌的再生是修复骨骼肌损伤的关键。随着年龄的增长,骨骼肌再生能力明显下降,而骨骼肌再生的关键——低氧通路,其活性也受到抑制。目前科学界对于低氧通路导致骨骼肌再生能力下降的机制仍然缺乏完整的认识。有研究表明芳香烃受体核转运子(ARNT)是低氧通路中的关键组成部分,可能是调控骨骼肌再生的关键。本研究旨在探索骨骼肌再生机制,为提高老龄人口骨骼肌再生效率,寻找促骨骼肌再生方法提供理论依据。方法:1.分析衰老对骨骼肌再生能力的影响选用幼龄鼠与老龄鼠分别构建骨骼肌冰冻损伤模型,于术后第5、10天取材。HE染色再生肌纤维横截面积以量化骨骼肌再生能力;使用ELISA、Western、qRT-PCR、PCR芯片分析低氧通路、Notch通路、骨骼肌再生相关基因的表达变化;免疫荧光染色、多普勒超声用以评估小鼠下肢血流情况;提取骨骼肌前体细胞(SMPs)进行体外诱导以探究不同年龄来源成肌细胞数量及分化差异。2.探索ARNT在骨骼肌再生过程中的作用与机制采用siRNA技术使C2C12细胞系中的ARNT基因沉默并观察细胞分化差异及相关因子的表达变化;构建骨骼肌特异性敲除ARNT基因的转基因小鼠,并对比其与野生型小鼠在骨骼肌再生、低氧通路、Notch通路、相关基因表达、血管血流、SMPs数量及分化能力等方面的差异。3.探索改善骨骼肌再生能力的方法对老龄鼠、幼龄鼠、转基因鼠、野生型小鼠分别加入低氧通路激活剂(ML228),分析各组小鼠骨骼肌再生能力的及相关通路的变化。结果:1.衰老导致骨骼肌的再生能力减弱,低氧通路相关因子、ARNT、NICD、Myogenin、Myf5,下肢血流,SMPs数量等均随年龄的增长而表达量下降,而下肢血管密度及SMPs分化能力无差异。2.沉默ARNT基因后,C2C12细胞的分化能力和相关基因表达下调。转基因鼠骨骼肌的再生能力显着下降,ARNT表达受抑制,HIF-1α入核减少、NICD含量和MyoD、Myogenin、Myf5基因的表达均下降。而下肢血管密度、血流及SMPs数量和分化能力无变化。3.老龄鼠和转基因鼠在加入ML228后骨骼肌再生能力显着增强,HIF-1α核异位,Notch通路及相关基因的表达量上调,下肢血管密度、血流无变化;而ML228对幼龄鼠及野生型小鼠的骨骼肌再生无促进作用。结论:ARNT随年龄的增长而表达下降是造成老龄骨骼肌再生能力降低的主要原因,其机制是与年龄相关骨骼肌内低氧通路和Notch通路受到抑制。低氧信号的药理学激活剂可以改善受损骨骼肌的再生能力,有望成为药物重塑衰老骨骼肌再生能力的新靶点。
马静[10](2020)在《蒿本内酯对前列腺癌相关成纤维细胞的抑制效应》文中研究表明目的:研究蒿本内酯对前列腺癌相关成纤维细胞(Cancer Associated Fibroblasts,CAFs)的选择性促凋亡效应、对CAFs作用于T细胞的免疫抑制效应的抑制及上述两方面效应的相关分子机制。方法:在蒿本内酯的促凋亡效应研究中,选用人前列腺癌相关成纤维细胞作为研究对象,采用人前列腺正常成纤维细胞(Normal Fibroblasts,NFs)作为对照组,采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术和免疫组化检测蒿本内酯作用于CAFs后的细胞凋亡及细胞周期的改变;采用Western blot及qPCR检测蒿本内酯作用于CAFs后凋亡相关蛋白的表达变化。构建C57BL/6小鼠皮下前列腺癌移植瘤模型,每组8只小鼠,前列腺癌细胞系为RM-1,接种密度为5×105/只小鼠,荷瘤第2天后腹腔注射蒿本内酯,剂量为5mg/kg体重,隔日记录肿瘤体积,第18天终止实验,并取肿瘤组织拍照。在蒿本内酯抑制CAFs对T细胞的免疫抑制效应的研究中,采用MTT法测定蒿本内酯对CAFs及脾细胞生长情况的影响;采用流式细胞术检测蒿本内酯是否恢复T细胞的增殖;采用Western Blot及实时定量荧光PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)检测蒿本内酯作用CAFs后相关蛋白及mRNA的水平;采用酶联免疫吸附试验检测蒿本内酯作用CAFs后的上清刺激T细胞IFN-γ的表达水平;采用免疫组织化学检测体内及体外实验中蒿本内酯作用CAFs后α-SMA的表达水平。结果:在选择性促凋亡实验中,MTT结果显示蒿本内酯对CAFs有明显的抑制作用。流式细胞学结果显示蒿本内酯可诱导CAFs发生凋亡,且呈现剂量-效应关系。组化染色结果显示蒿本内酯处理后,细胞色素C(Cytochrome C)阳性的CAFs细胞比例增加,且呈现剂量-效应关系。Western Blot结果显示,蒿本内酯处理CAFs后,内源性凋亡相关蛋白明显变化,且呈现时间依赖关系。细胞周期的流式细胞学检测结果显示,蒿本内酯处理的CAFs发生细胞周期G2-M期阻滞,Western Blot结果显示,P53蛋白下调,p-P53、P21、Cyclin B1和Cyclin D1上调。采用TLR4阻断剂CLI-095后,早期凋亡和晚期凋亡细胞比例均有所下降,组化染色结果与之一致,qPCR结果显示,与蒿本内酯处理组相比,TLR4阻断后,蒿本内酯处理CAFs后,CAFs的Bax转录水平有所下降,而Bcl-2转录水平有所回升。Western Blot结果显示,TLR4阻断后,Caspase9表达水平有所回升,Cleaved Caspase9有所下降,Bax不再增加,p-P53依然呈上升趋势,Cytochrome C不再上升。流式细胞学检测显示,TLR4阻断后,CAFs的细胞周期不再阻滞于G2/M期。采用Caspase广谱阻断剂Z-VAD-FMK后,蒿本内酯诱导的CAFs早期凋亡减少,组化结果与之一致,而Caspase阻断后,细胞周期的流式分析结果显示蒿本内酯处理CAFs后,CAFs依然阻滞于G2/M期。在抑制CAFs免疫抑制功能的研究中发现,一定浓度范围内蒿本内酯对脾细胞生长无影响,但其可以恢复被CAFs上清抑制的T细胞增殖,同时蒿本内酯处理后CAFs后会激活相关信号通路蛋白表达水平改变,包括MyD88、TRAF6、p-P65等。采用TLR4阻断剂后蒿本内酯不再抑制CAFs的免疫抑制功能,并且阻断剂预处理之后CAFs的NF-κB信号通路未被激活。蒿本内酯通过TLR4下调CAFs的α-SMA表达水平。同时在体内实验中发现蒿本内酯能明显下调前列腺癌组织中α-SMA的表达。qPCR实验发现蒿本内酯通过TLR4下调CAFs的IL-10的表达水平。在T细胞增殖实验中发现在蒿本内酯处理之后的CAFs上清中加入IL-10能明显抑制T细胞增殖。同时在酶联免疫吸附实验中发现CAFs上清能明显抑制T细胞分泌IFN-γ,蒿本内酯处理之后的CAFs上清能恢复T细胞分泌IFN-γ,而使用TLR4阻断剂预处理或加入IL-10后蒿本内酯不再恢复T细胞分泌IFN-γ。结论:蒿本内酯可能通过阻滞CAFs细胞周期和诱导CAFs内源性凋亡抑制前列腺癌CAFs的增殖。蒿本内酯通过TLR4下调CAFs的IL-10的表达水平从而改变前列腺癌CAFs的免疫抑制功能,恢复被CAFs上清抑制的T细胞增殖和恢复T细胞IFN-γ的表达。蒿本内酯有望成为抗肿瘤新药候选分子。
二、三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响(论文提纲范文)
(1)小鼠Kupffer细胞的转分化研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
abstract |
中英文缩写词对照表 |
前言 |
第1章 绪论 |
1.1 肝脏概述 |
1.2 肝脏纤维化 |
1.2.1 肝细胞的死亡与凋亡 |
1.2.2 肝纤维化发展 |
1.2.3 肝纤维化中肌成纤维细胞的组成 |
1.3 KCs在肝脏学中的研究进展 |
1.3.1 KCs的起源 |
1.3.2 KCs在肝脏结构中的定位 |
1.3.3 KCs的免疫作用 |
1.3.4 KCs的异质性 |
1.3.5 KCs的可塑性 |
1.3.6 KCs与肝脏疾病 |
1.4 细胞谱系追踪技术 |
1.4.1 细胞谱系追踪技术的基本原理 |
1.4.2 细胞谱系追踪的标记方法 |
1.4.3 细胞谱系追踪在肝脏研究中的应用 |
1.4.4 细胞谱系追踪的未来 |
1.6 细胞的转分化 |
1.6.1 细胞转分化概述 |
1.6.2 自然发生的转分化 |
1.6.3 实验性转分化 |
1.6.4 肝脏中的转分化 |
1.6.5 转分化应用于再生医学的优点和局限性 |
第2章 KCs在体外非实质细胞培养过程中的形态和表型变化研究 |
2.1 引言 |
2.2 实验材料 |
2.2.1 实验动物 |
2.2.2 实验试剂 |
2.2.3 主要实验耗材与设备 |
2.2.4 主要实验试剂配制 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 非实质细胞分离 |
2.3.2 收集培养的非实质细胞 |
2.3.3 多聚体免疫共沉淀 |
2.3.4 RNA提取 |
2.3.5 基因表达分析 |
2.3.6 免疫荧光成像 |
2.3.7 统计学方法 |
2.4 结果 |
2.5 讨论 |
2.6 小结 |
第3章 精密肝切片培养实验过程中,KCs特征性基因表达下调 |
3.1 引言 |
3.2 实验材料 |
3.2.1 实验动物 |
3.2.2 实验试剂 |
3.2.3 主要实验耗材与设备 |
3.2.4 主要实验试剂配制 |
3.3 实验方法 |
3.4 实验结果 |
3.5 讨论 |
3.6 小结 |
第4章 在精密肝切片培养和体外非实质细胞培养实验中,KCs中纤维化相关基因表达分析研究 |
4.1 引言 |
4.2 实验材料 |
4.2.1 实验动物 |
4.2.2 主要实验试剂 |
4.2.3 主要实验耗材与设备 |
4.3 实验方法 |
4.4 结果 |
4.5 讨论 |
4.6 小结 |
第5章 KCs在培养过程中转录因子基因表达研究 |
5.1 引言 |
5.2 实验材料 |
5.2.1 实验动物 |
5.2.2 实验试剂 |
5.2.3 主要实验耗材与设备 |
5.3 实验方法 |
5.4 结果 |
5.5 讨论 |
5.6 小结 |
第6章 KCs与肝片中胶原沉积的初步探索研究 |
6.1 引言 |
6.1.1 实验动物 |
6.1.2 实验试剂 |
6.1.3 主要实验耗材与设备 |
6.1.4 主要实验试剂配制 |
6.2 实验方法 |
6.2.1 KCs耗竭 |
6.2.2 肝片培养、基因分析等方法同前所述 |
6.3 结果 |
6.4 讨论 |
6.5 小结 |
结论 |
本实验创新点 |
参考文献 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
致谢 |
(2)消症丸对小鼠乳腺增生病及乳腺非典型增生、乳腺癌HCC1937细胞系的作用机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
中英文缩略词 |
第一部分 文献综述 |
综述 乳腺增生病的中西医研究进展 |
参考文献 |
第二部分 实验研究 |
前言 |
研究一 消症丸治疗乳腺增生病的机制研究 |
实验一 消症丸治疗乳腺增生病的网络药理学分析 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
实验二 消症丸治疗小鼠乳腺增生病的体内实验研究 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
实验三 消症丸治疗小鼠乳腺增生病的代谢组学分析 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
研究二 消症丸治疗乳腺非典型增生及原位癌的机制研究 |
实验四 消症丸治疗乳腺非典型增生及原位癌的网络药理学分析 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
实验五 消症丸治疗小鼠乳腺非典型增生的体内实验研究 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
实验六 消症丸主要成分对乳腺原位癌作用的体外实验研究 |
1 材料与方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
结语 |
参考文献 |
致谢 |
个人情况 |
(3)G蛋白偶联雌激素受体研究进展及在食品功能评价中的应用(论文提纲范文)
1 胃肠道是植物化学物发挥作用的主要部位 |
1.1 胃肠道不仅是重要的营养消化和吸收系统,也是重要的分子结构识别系统 |
1.2 GPER在机体通讯系统中发挥关键作用 |
2 GPER-ER-AHR-EGFR信号调节网络 |
2.1 经典固醇受体 |
2.2 固醇类激素通过GPER受体传递信号 |
3 核受体超家族及其调节网络 |
3.1 ERs的结构 |
3.2 ERα与辅因子互作 |
3.3 ER的转录辅因子与酶活性 |
3.4 三苯氧胺-ER辅阻遏因子 |
3.5 核受体通过辅助因子所形成的调节网络[117] |
3.6 AHR与核受体之间的复杂关系 |
4 GPER及其与配体互作 |
4.1 GPER的分布 |
4.2 GPER和核受体的结构与功能 |
4.3 GPER结构及其与配体之间的互作 |
4.4 受体互作网络与表观遗传修饰 |
5 复杂多样的GPER和ERs受体传感系统 |
5.1 GPER的毒性和有益双重作用 |
5.1.1 ERs的多种生理功能 |
5.1.2 植物雌激素的有益和有害作用 |
5.2 ERs的双向调节作用 |
5.3 华夏民族的饮食智慧 |
6 GPER研究需要进一步解决的关键科学问题 |
6.1 GPERs的精细结构有待解析 |
6.2 GPER与配体之间的互作参数与动力学问题 |
6.3 GPER用于食品及其化学成分的功能性评价 |
6.3.1 食品营养学的出路 |
6.3.2“中华饮食理论”对食品功能评价的贡献 |
6.3.3“阴、阳”、“热、温、平、凉、寒”属性、“五味”及其受体 |
6.3.4 GPER与食品功能评价 |
7 结语 |
(4)九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌移植瘤生长抑制作用(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
前言 |
第一章 文献综述 |
1 九香虫研究进展 |
1.1 九香虫传统临床应用 |
1.2 九香虫现代药用研究 |
2 中药治疗乳腺癌的研究进展 |
2.1 乳腺癌的中医学认识 |
2.2 中药治疗乳腺癌的基础实验研究 |
2.3 中药治疗乳腺癌的临床研究 |
第二章 九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞的体外作用效果 |
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验方法 |
2 结果与分析 |
2.1 九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞形态变化的影响 |
2.2 MTT法检测九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖的影响 |
2.3 Hoechst33258染色检测九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞凋亡的影响 |
2.4 流式细胞术检测九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌4T1细胞周期的影响 |
3 小结与讨论 |
第三章 九香虫血淋巴灌胃用药对小鼠乳腺癌移植瘤的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验方法 |
2 结果与分析 |
2.1 小鼠乳腺癌移植瘤动物模型的构建 |
2.2 九香虫血淋巴灌胃用药对小鼠乳腺癌移植瘤的影响 |
2.3 九香虫血淋巴灌胃用药对小鼠血细胞的影响 |
2.4 九香虫血淋巴灌胃用药对小鼠体重及肝、脾、肺、肾重量的影响 |
2.5 九香虫血淋巴灌胃用药对小鼠瘤体及肝、脾、肺、肾组织结构的影响 |
3 小结与讨论 |
第四章 九香虫血淋巴腹腔注射用药对小鼠乳腺癌移植瘤的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验试剂 |
1.3 实验仪器 |
1.4 实验方法 |
2 结果与分析 |
2.1 小鼠乳腺癌移植瘤动物模型的构建 |
2.2 腹腔注射九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌移植瘤的影响 |
2.3 腹腔注射九香虫血淋巴对小鼠血细胞的影响 |
2.4 腹腔注射九香虫血淋巴对小鼠体重及肝、脾、肺、肾重量的影响 |
2.5 腹腔注射九香虫血淋巴对小鼠瘤体及肝、脾、肺、肾组织结构的影响 |
2.6 腹腔注射九香虫血淋巴对小鼠肿瘤细胞凋亡的影响 |
3 小结与讨论 |
第五章 全文总结及展望 |
1 全文总结 |
2 论文创新点 |
3 论文的不足和展望 |
致谢 |
参考文献 |
附录 |
(5)三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚在典型果蔬中的分布特征及毒性作用研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第一章 绪论 |
1.1 农产品中TSPEOs的分布特征 |
1.1.1 分析方法 |
1.1.2 残留水平 |
1.1.3 迁移转化行为 |
1.2 TSPEOs的毒性特征 |
1.3 本文主要研究内容及研究思路 |
第二章 果品中TSPEOs的浓度分布及风险评估研究 |
2.1 概述 |
2.2 实验材料与方法 |
2.2.1 样品采集 |
2.2.2 实验材料 |
2.2.3 前处理方法 |
2.2.4 仪器分析方法 |
2.2.5 健康风险分析 |
2.3 结果与讨论 |
2.3.1 方法学验证 |
2.3.2 浓度水平 |
2.3.3 TSPEOs与农药残留水平之间的相关性分析 |
2.3.4 健康风险评估 |
2.4 小结 |
第三章 油麦菜不同种植模式下TSPEOs的降解规律研究 |
3.1 概述 |
3.2 实验材料与方法 |
3.2.1 盆栽实验 |
3.2.2 田间试验 |
3.2.3 前处理方法 |
3.2.4 仪器分析方法 |
3.3 结果与讨论 |
3.3.1 方法学验证 |
3.3.2 降解行为 |
3.3.3 分布特征 |
3.4 小结 |
第四章 TSPEOs对小鼠的亚慢性毒性效应研究 |
4.1 概述 |
4.2 实验方法 |
4.2.1 暴露实验 |
4.2.2 测定指标及方法 |
4.3 结果与讨论 |
4.3.1 TSPEOs对小鼠体重和脏器系数的影响 |
4.3.2 TSPEOs对小鼠脏器系数的影响 |
4.3.3 TSPEOs对小鼠血清生化指标的影响 |
4.3.4 TSPEOs对小鼠肝、肾组织生化指标的影响 |
4.3.5 TSPEOs对小鼠组织形态学的影响 |
4.4 小结 |
第五章 基于代谢组学的TSPEOs对斑马鱼胚胎毒性研究 |
5.1 概述 |
5.2 实验材料与方法 |
5.2.1 实验仪器 |
5.2.2 急性毒性实验 |
5.2.3 胚胎毒性实验 |
5.2.4 样品前处理 |
5.2.5 仪器分析方法 |
5.2.6 数据分析 |
5.3 结果与讨论 |
5.3.1 急性毒性试验结果 |
5.3.2 方法学评价 |
5.3.3 代谢轮廓模式分析 |
5.3.4 潜在生物标记物的鉴定 |
5.3.5 代谢通路分析 |
5.3.6 生物标志物分析 |
5.4 小结 |
第六章 主要结论 |
参考文献 |
致谢 |
作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 |
(6)龙贝逍遥散调控miR-145/c-Myc/TP53信号通路抗乳腺癌机制研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
文献综述 |
综述一 乳腺癌相关miRNA研究进展及miR-145临床病理的荟萃分析 |
1 miRNA概述 |
2 miRNA在乳腺癌发生发展中作用研究 |
3 miRNA在乳腺癌诊断治疗中作用研究 |
4 miR-145与乳腺癌临床病理意义的荟萃评价 |
5 展望 |
参考文献 |
综述二 中药单药及复方抗乳腺癌基础研究进展 |
1 单味中药抗乳腺癌基础研究 |
2 中药复方抗乳腺癌基础研究 |
3 展望 |
参考文献 |
前言 |
实验研究 |
实验一 龙贝逍遥散冻干粉对乳腺癌细胞增殖与迁移的影响 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
实验二 龙贝逍遥散冻干粉对乳腺癌细胞作用机制研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
实验三 龙贝逍遥散对乳腺癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用与机制研究 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
结语 |
参考文献 |
致谢 |
在学期间主要研究成果 |
个人简介 |
(7)三种民族药的药理作用初步研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
缩略词表 |
第一章 白族药三叶悬钩子抗旋毛虫活性研究 |
前言 |
1 三叶悬钩子体外抗旋毛虫活性研究 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验仪器与试剂 |
1.3 实验方法 |
1.4 实验结果 |
1.5 结果讨论 |
2 雌雄小鼠感染旋毛虫早期免疫能力差异 |
2.1 实验材料 |
2.2 实验仪器与试剂 |
2.3 实验方法 |
2.4 实验结果 |
2.5 结果讨论 |
3 三叶悬钩子体内抗旋毛虫活性实验研究 |
3.1 实验材料 |
3.2 实验仪器与试剂 |
3.3 实验方法 |
3.4 实验结果 |
3.5 结果讨论 |
参考文献 |
第二章 分心木对小鼠肾虚模型的作用研究 |
前言 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验仪器与试剂 |
1.3 实验方法 |
1.4 肾阴虚实验结果 |
1.5 肾阳虚实验结果 |
1.6 结果讨论 |
参考文献 |
第三章 灰毛康定黄芪急性毒性实验研究 |
前言 |
1.1 实验材料 |
1.1.1 供试植物来源 |
1.1.2 供试植物样品粗提物的制备 |
1.1.3 实验动物 |
1.2 实验仪器与试剂 |
1.2.1 实验仪器 |
1.2.2 实验试剂 |
1.3 实验方法 |
1.3.1 给药剂量的确定 |
1.3.2 实验分组 |
1.3.3 统计学方法 |
1.4 实验结果 |
1.4.1 灰毛康定黄芪对小鼠体重的影响 |
1.4.2 灰毛康定黄芪对小鼠行为学的影响 |
1.4.3 灰毛康定黄芪对小鼠血常规的影响 |
1.4.4 灰毛康定黄芪对小鼠脏器指数的影响 |
1.4.5 灰毛康定黄芪对组织病理学的影响 |
1.5 结果讨论 |
参考文献 |
附录 |
文献综述 抗旋毛虫药物及药理机制研究进展 |
参考文献 |
致谢 |
攻读学位期间发表的学术论文 |
(8)齐元富教授治疗乳腺癌用药规律及其核心方调控Wnt/β-eatenin信号通路的实验研究(论文提纲范文)
提要 |
abstract |
引言 |
第一部分 基于数据挖掘技术探讨齐元富教授治疗乳腺癌用药规律研究 |
前言 |
1 材料与方法 |
1.1 数据资料来源 |
1.2 软件选择 |
1.3 纳入与排除标准 |
1.4 数据的录入与核对 |
1.5 中药药物名称的规范方法 |
1.6 数据分析 |
2 结果 |
2.1 处方药味个数 |
2.2 四气 |
2.3 五味 |
2.4 归经 |
2.5 用药频数 |
2.6 基于关联规则的组方规律分析 |
2.7 基于数据挖掘形成的治疗乳腺癌核心处方 |
2.8 基于熵聚类的组方配伍规律 |
3 讨论 |
3.1 四气 |
3.2 五味 |
3.3 归经 |
3.4 用药频数 |
3.5 常用药对 |
3.6 齐元富教授治疗乳腺癌核心处方 |
3.7 新处方分析 |
3.8 小结 |
参考文献 |
第二部分 实验研究 |
1 实验材料 |
1.1 实验所用细胞及细胞来源 |
1.2 实验所用动物 |
1.3 主要药品 |
1.4 实验试剂及耗材 |
1.5 主要仪器设备 |
1.6 主要溶液配制 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
2.1 实验药品制备 |
2.2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
3.1 细胞复苏 |
3.2 细胞传代 |
3.3 细胞冻存 |
实验一 MTT法检测乳腺癌核心方对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231 增殖的影响 |
1 实验材料 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
4 实验分组 |
4.1 对照组 |
4.2 空白鼠血清对照组 |
4.3 乳腺癌核心方组 |
4.4 阿霉素组 |
5 实验步骤 |
6 统计分析 |
7 实验结果 |
7.1 MTT实验对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 OD值的影响 |
7.2 MTT实验对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响 |
实验二 计数法检测乳腺癌核心方对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231 生长曲线的影响 |
1 实验材料 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
4 实验分组 |
4.1 对照组 |
4.2 乳腺癌核心方组 |
4.3 阿霉素组 |
4.4 联合组(阿霉素+核心方组) |
5 实验步骤 |
6 实验结果 |
实验三 HE染色检测乳腺癌核心方对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231 形态的影响 |
1 实验材料 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
4 实验分组 |
5 实验步骤 |
6 实验结果 |
实验四 细胞划痕实验检测乳腺癌核心方对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231 迁移的影响 |
1 实验材料 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
4 实验分组 |
5 实验步骤 |
6 实验结果 |
实验五 TRANSWELL实验检测乳腺癌核心方对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231侵袭的影响 |
1 实验材料 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
4 实验分组 |
5 实验步骤 |
5.1 制备预铺基质胶的Transwell小室,具体步骤如下 |
5.2 制备细胞悬液 |
5.3 染色 |
6 实验结果 |
实验六 WESTERNBLOT检测乳腺癌核心方对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达的影响 |
1 实验材料 |
2 乳腺癌核心方含药血清制备 |
3 细胞培养 |
4 实验分组 |
5 实验步骤 |
5.1 细胞总蛋白的提取 |
5.2 BCA法定量测蛋白浓度 |
5.3 免疫印迹实验 |
6 实验结果 |
7 讨论 |
7.1 .实验结果分析 |
7.2 Wnt/β-catenin信号通路与肿瘤 |
7.3 小结 |
参考文献 |
第三部分 文献综述 |
第一节 中医对乳腺癌的认识 |
1 病名和症状 |
2 病因病机 |
2.1 外因 |
2.2 内因 |
3 治疗原则 |
4 现代中医治疗乳腺癌 |
4.1 术后并发症 |
4.2 围放疗期 |
4.3 内分泌治疗期 |
4.4 围化疗期 |
4.5 乳腺癌多发转移 |
4.6 情志因素 |
第二节 现代医学对乳腺癌的认识 |
1 流行病学 |
2 病因 |
2.1 家族遗传 |
2.2 内分泌因素 |
2.3 饮食与肥胖 |
2.4 环境因素 |
2.5 月经、生育、哺乳因素 |
2.6 精神、心理因素 |
3 临床表现 |
3.1 乳房肿块 |
3.2 乳头 |
3.3 乳房皮肤 |
3.4 淋巴结 |
3.5 疼痛 |
3.6 全身症状 |
3.7 特殊乳癌表现 |
4 扩散转移 |
4.1 局部侵犯 |
4.2 淋巴转移 |
5 治疗 |
5.1 手术 |
5.2 放射治疗 |
5.3 化疗 |
5.4 内分泌治疗 |
5.5 免疫治疗 |
5.6 靶向治疗 |
参考文献 |
结语 |
附录 |
致谢 |
查新报告 |
论文着作 |
(9)芳香烃受体核转运子(ARNT)促进骨骼肌再生的作用机制研究与应用(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一章 衰老对骨骼肌再生能力的影响 |
1.1 引言 |
1.2 材料与方法 |
1.3 结果 |
1.4 讨论 |
1.5 结论 |
第二章 ARNT在骨骼肌再生过程中的作用及机制 |
2.1 引言 |
2.2 材料与方法 |
2.3 结果 |
2.4 讨论 |
2.5 结论 |
第三章 改善骨骼肌再生能力的方法探索 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
3.5 结论 |
全文总结 |
参考文献 |
附录 |
1 综述 |
参考文献 |
2 中英文缩略词表 |
攻读学位期间成果 |
致谢 |
(10)蒿本内酯对前列腺癌相关成纤维细胞的抑制效应(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
材料与方法 |
1 实验对象 |
1.1 细胞系 |
1.2 实验动物 |
2 主要实验试剂 |
2.1 化学试剂 |
2.2 抗体 |
2.3 其他 |
3 主要实验仪器 |
4 实验方法 |
4.1 蒿本内酯抑制前列腺癌CAFs的增殖 |
4.2 蒿本内酯抑制CAFs的免疫抑制功能 |
5 统计学方法 |
结果 |
1 蒿本内酯抑制前列腺癌CAFs的增殖 |
1.1 一定剂量范围内蒿本内酯显着抑制CAFs和 PC-3 却不抑制NFs |
1.2 蒿本内酯诱导前列腺癌CAFs凋亡 |
1.3 蒿本内酯可能通过内源性途径诱导CAFs凋亡 |
1.4 蒿本内酯使CAFs的细胞周期阻滞在M+G2 期 |
1.5 蒿本内酯通过TLR4 诱导CAFs凋亡和周期阻滞 |
1.6 蒿本内酯通过TLR4-MyD88 途径抑制CAFs增殖 |
1.7 蒿本内酯通过激活Caspase家族诱导细胞凋亡 |
1.8 蒿本内酯可能不通过Caspase途径阻滞细胞周期 |
1.9 蒿本内酯通过 TLR4 抑制小鼠前列腺癌生长 |
2 蒿本内酯抑制CAFs的免疫抑制功能 |
2.1 一定浓度范围内蒿本内酯对CAFs和脾细胞的增殖无明显抑制作用 |
2.2 蒿本内酯抑制CAFs对 T细胞的免疫抑制效应 |
2.3 蒿本内酯通过TLR4 抑制CAFs的免疫抑制功能 |
2.4 蒿本内酯作用于CAFs的 TLR4 并激活NF-κB信号通路 |
2.5 蒿本内酯可能通过TLR4 下调CAFs的α-SMA表达水平 |
2.6 蒿本内酯通过下调CAFs的 IL-10 抑制CAFs的免疫抑制功能 |
讨论 |
结论 |
参考文献 |
英汉缩略词对照表 |
当归及其活性成分蒿本内酯的抗肿瘤研究 |
1 当归的抗肿瘤研究 |
2 蒿本内酯的抗肿瘤效果 |
参考文献 |
攻读硕士学位期间发表论文情况 |
致谢 |
四、三苯氧胺对小鼠睾丸形态结构的影响(论文参考文献)
- [1]小鼠Kupffer细胞的转分化研究[D]. 李昕宇. 吉林大学, 2021(01)
- [2]消症丸对小鼠乳腺增生病及乳腺非典型增生、乳腺癌HCC1937细胞系的作用机制研究[D]. 刘宇飞. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]G蛋白偶联雌激素受体研究进展及在食品功能评价中的应用[J]. 鲁丁强,庞广昌. 食品科学, 2021(07)
- [4]九香虫血淋巴对小鼠乳腺癌移植瘤生长抑制作用[D]. 赵帅. 贵州大学, 2020(01)
- [5]三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚在典型果蔬中的分布特征及毒性作用研究[D]. 李春梅. 中国农业科学院, 2020
- [6]龙贝逍遥散调控miR-145/c-Myc/TP53信号通路抗乳腺癌机制研究[D]. 吕鹏. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]三种民族药的药理作用初步研究[D]. 王敏. 大理大学, 2020(05)
- [8]齐元富教授治疗乳腺癌用药规律及其核心方调控Wnt/β-eatenin信号通路的实验研究[D]. 张暖. 山东中医药大学, 2020(01)
- [9]芳香烃受体核转运子(ARNT)促进骨骼肌再生的作用机制研究与应用[D]. 李玢. 南方医科大学, 2020(01)
- [10]蒿本内酯对前列腺癌相关成纤维细胞的抑制效应[D]. 马静. 西南医科大学, 2020(11)