一、慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响（论文文献综述）
张加勇[1]（2020）在《鸡饲料铅污染调查与硒颉颃铅致鸡脾脏毒性效应的评价》文中研究说明随着饲料业迅速发展,中国已成为世界上最大饲料生产国。饲料质量与畜牧业息息相关,其中包括畜禽健康和畜产品的安全性。铅是主要的环境污染物之一,含铅的“工业三废”排放均会污染环境和饲料原料,经由动物采食后进入生物链,进而蓄积体内,造成多个组织器官损伤。硒是机体必需的微量元素,具有抗衰老、增强机体免疫力、抗氧化和抗肿瘤等功效,对重金属具有排毒解毒的作用,被誉为“重金属的天然解毒剂”。为评估饲料铅的污染状况,本试验采用原子吸收光谱法对2014年-2016年黑龙江省部分地区的饲料进行抽检。此外,为探究饲料铅暴露对鸡脾脏细胞的毒性作用及硒对铅诱导脾脏毒性的保护作用,我们建立硒颉颃铅诱导鸡脾脏损伤模型,观察鸡脾脏组织的显微结构变化并检测铅和硒的含量、氧化应激水平、程序性坏死相关通路的m RNA和蛋白水平以及热休克蛋白的m RNA和蛋白水平,并开展了体外试验对上述结果进行验证,旨在从为硒颉颃铅诱导的鸡脾脏细胞毒性作用机制的研究提供理论依据。结果表明:（1）2014年-2016年各地的饲料抽检样品中,肉鸡饲料214份,铅含量超标率为18.22%;蛋鸡饲料226份,铅含量超标率为0.00%。（2）与正常组相比,硒组脾脏组织和细胞中检测的所有指标均差异不显着（p>0.05）,铅组脾脏中铅硒含量和氧化应激水平的检测结果均差异极显着（p<0.05）;硒铅组病理学、组织中铅硒含量、氧化应激水平、NF-κB通路和MAPK通路的检测结果介于对照组和铅组之间,统计学上均表现为显着差异,说明铅对鸡脾脏细胞具有毒性作用,并且硒可以缓解铅的毒性。（3）AO/EB双重荧光染色和流式细胞术结果显示,铅可以诱导鸡脾淋巴细胞发生程序性坏死,添加硒可以在一定程度上缓解淋巴细胞的坏死率。（4）通过对程序性坏死相关通路的基因（MLKL、RIP 1、RIP 3、FADD和Caspase-8）m RNA和蛋白水平的检测,结果发现,硒铅组和铅组MLKL、RIP 1、RIP 3和FADD的m RNA和蛋白水平均显着增加（p<0.05）,并且铅组的m RNA和蛋白水平增加的最多;硒铅组和铅组Caspase-8的m RNA和蛋白水平均显着降低（p<0.05）,并且在铅组的m RNA和蛋白水平达到了最低;进一步证实了饲料中添加硒可以显着改善铅诱导的鸡脾细胞程序性坏死。（5）通过对热休克蛋白相关基因（HSP 27、HSP 40、HSP 60、HSP 70和HSP 90）m RNA和蛋白水平的检测,发现铅可以诱导热休克蛋白相关基因在m RNA和蛋白水平的增加,添加硒可以缓解热休克蛋白相关基因在m RNA和蛋白水平的增加,提示铅可以通过激活热休克蛋白家族诱导脾脏组织和细胞发生应激。而硒的添加在一定程度上通过抑制热休克蛋白家族的激活缓解了铅诱导的鸡脾脏组织和细胞的应激。综上所述,肉鸡饲料存在铅含量超标现象,饲料中铅的过量对鸡脾脏具有毒性作用,表现为过量铅可以引起鸡脾脏病理学结构的改变,诱导脾脏细胞发生氧化应激,进而激活NF-κB信号通路和MAPK信号通路,导致脾脏细胞发生炎症反应和程序性坏死,并诱导热休克蛋白家族基因的表达,硒的添加可以在一定程度上缓解组织病理学改变、氧化应激、炎症反应和程序性坏死的发生,说明硒可以作为动物生产中铅的有效解毒剂。
吴遵桃[2]（2020）在《生命早期铅致SD大鼠学习记忆损伤及白藜芦醇的保护作用》文中认为目的生命早期铅暴露会对海马突触可塑性造成不可逆的影响,最终导致学习记忆功能障碍。然而,其损伤的具体机制尚未阐明。本研究通过建立生命早期铅暴露模型,以探究生命早期铅暴露对大鼠海马组织中SIRT1及其相关信号通路分子表达变化和由该通路调控的下游突触相关蛋白的表达差异,找寻铅暴露致突触可塑性损伤的具体机制。研究白藜芦醇在生命早期铅暴露诱导学习记忆损伤中的具体作用,为生命早期铅暴露致认知功能障碍的防治提供依据。方法以Sprague-Dawley大鼠为研究对象建立生命早期铅暴露模型,选用出生后21天断乳子代雄性大鼠进行后续实验。采用Morris水迷宫检测生命早期铅暴露对各组大鼠空间学习记忆能力的影响,用石墨炉原子吸收光谱法检测大鼠血铅含量,RT-qPCR检测海马组织中SIRT1/CREB/BDNF通路分子及其调控的突触前蛋白Syn-1、LIMK1及突触后蛋白PSD-95、NL-1的mRNA的变化趋势,采用Western blot检测这些目的基因蛋白的表达。结果1.生命早期铅暴露对大鼠空间学习记忆的影响水迷宫结果显示,与对照组相比,0.2%染铅组大鼠在定位导航实验中的潜伏期明显延长（P<0.05）,空间探索实验中第一次上平台时间显着增加（P<0.01）,穿越平台次数和在目标象限停留时间百分比明显降低（P<0.01;P<0.001）。此外,与0.05%染铅组相比,其逃避潜伏期延长（P<0.05）,穿越平台次数和目标象限停留时间百分比也显着降低（P<0.05;P<0.01）。与0.2%染铅组相比,0.2%染铅+Res组大鼠的逃避潜伏期和第一次上台前时间均明显缩短（P<0.05;P<0.05）,穿越平台次数及目标象限停留时间百分比都显着增加（P<0.05;P<0.05）。2.石墨炉原子吸收光谱法检测大鼠血铅含量三个不同浓度染铅组的血铅含量相对于对照组而言均显着增加（P0.05%vs对照<0.001;P0.1%vs对照<0.001;P0.2%vs对照<0.001）,且增加的趋势与染铅浓度呈正相关（P0.1%vs 0.05%<0.001;P0.2%vs 0.05%<0.001;P0.2%vs0.1%<0.001）。与 0.2%染铅组相比,0.2%染铅+Res组和0.2%染铅+EDTA组的血铅含量均明显降低（P<0.001;P<0.001）,但仍比对照组高（P<0.001;P<0.01）。3.各组大鼠海马组织中目的基因mRNA的表达情况RT-qPCR 结果显示,0.2%染铅组的 SIRT1、CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1的mRNA表达水平与对照组和0.05%组相比均明显下调,且差异都具有统计学意义。此外,与0.1%染铅组相比,0.2%染铅组中SIRT1、Syn-1、LIMK1、PSD-95和NL-1的表达水平也显着降低（P<0.05;P<0.01）。0.2%染铅+Res 组中 SIRT1、CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1 的 mRNA表达水平与0.2%染铅组相比均显着增加,且差异都具有统计学意义。4.各组大鼠海马组织中目的基因蛋白的表达水平Western blot结果显示,与对照组相比,0.2%染铅组的SIRT1、p-CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1的蛋白表达水平与对照组和0.05%组相比均下调,且差异都具有统计学意义。与0.2%染铅组相比,0.2%染铅+Res组的SIRT1、p-CREB、BDNF、Syn-1、LIMK1、PSD-95、NL-1的蛋白表达水平均明显上调,且差异均具有统计学意义。与对照组相比,0.05%染铅组Pro-BDNF表达水平显着降低（P<0.01）。0.2%染铅组的表达水平与对照组、0.05%染铅组及0.1%染铅组相比均明显增加（P<0.001;P<0.001;P<0.001）,且Res可以削弱其因铅暴露导致的上调（P<0.001）。结论1.生命早期铅暴露对突触可塑性的损伤与SIRT1/CREB/BDNF信号通路分子及其调控的突触前后蛋白的表达下降有关。2.白藜芦醇可以通过激活SIRT1/CREB/BDNF信号通路进而上调突触前和突触后蛋白的表达从而改善铅暴露导致的学习记忆损伤。
杨美媛[3]（2019）在《hnRNP U介导铅暴露对REST影响机制的研究》文中指出目的:当金属铅在人体内蓄积时会导致身体多个系统的损伤。有研究显示神经元限制性沉默因子（repressor element silencing transcription factor,REST）是含有锌指结构的蛋白,可以结合神经元限制性沉默元件（neuron-restrictive silencer element,NRSE）,从而影响某些特殊基因的表达。hnRNP U（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein U）是核不均一核糖核蛋白家族中的一员,作为一种RNA结合蛋白,参与转录及转录后调控过程。近期研究表明,hnRNP U与REST有特异性结合。本实验通过建立动物模型和细胞模型,研究在铅暴露环境下REST和hnRNP U表达的变化,为揭示铅的毒性机制提供依据。方法:1、铅暴露对大鼠海马组织REST和hnRNP U表达的影响:检测到怀孕的雌性大鼠随机分为空白组（CON）,低铅暴露组（LLG）和高铅暴露组（HLG）,CON饮用双蒸水,LLG饮用0.05%醋酸铅水溶液、HLG饮用0.2%醋酸铅水溶液。以自由饮水的方式进行铅暴露,直至仔鼠断乳（出生后3周）用于后续实验。采用Morris水迷宫系统检测大鼠的学习记忆能力;采用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-AES）检测大鼠全血和海马组织中的铅含量;采用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR）、蛋白免疫印迹实验（western blot,WB）和免疫荧光（immunofluorescent,IF）方法检测大鼠海马组织中REST和hnRNP U的表达情况。2、铅暴露对PC12细胞REST和hnRNP U表达的影响:PC12细胞中分别加入0μM、1μM和100μM的醋酸铅,采用RT-PCR、WB方法检测PC12细胞REST和hnRNP U mRNA和蛋白表达情况,进一步采用IF方法检测PC12细胞hnRNP U的表达情况。3、铅暴露环境下干预hnRNP U对REST表达的影响:PC12细胞分为空白组,对照组和实验组,空白组加入0μM醋酸铅,对照组和实验组各加入100μM醋酸铅处理后,空白组和对照组转染DDW,实验组转染hnRNP U-siRNA,采用RT-PCR方法检测hnRNP U和REST mRNA的表达情况;采用IF方法检测REST蛋白表达情况。结果:1、Morris水迷宫实验:铅暴露会损伤大鼠的学习记忆能力。（1）逃避潜伏期:与CON相比,LLG和HLG大鼠的逃避潜伏期时间显着延长,且差异具统计学意义（P<0.05）;（2）穿越平台次数:与CON相比,LLG和HLG大鼠的穿越平台次数显着下降（P<0.05）;且LLG和HLG之间也存在显着差异（P<0.05）。2、全血和海马组织中铅含量:CON未检测出铅含量,HLG血铅和海马铅含量均高于LLG,且LLG和HLG之间也存在显着差异（P<0.05）。3、铅暴露对大鼠海马组织REST表达的影响:（1）RT-PCR实验表明,与CON比较,LLG和HLG大鼠海马组织REST mRNA表达水平显着上升（P<0.05）,且LLG和HLG之间也存在显着差异（P<0.05）。（2）WB实验表明,与CON比较,LLG和HLG大鼠海马组织REST蛋白表达水平显着上升（P<0.05）,且LLG和HLG之间也存在显着差异（P<0.05）;（3）IF实验表明,与CON比较,LLG和HLG大鼠海马组织CA3、CA1和DG区REST蛋白表达水平显着上升（P<0.05）,且LLG和HLG在DG区之间也存在显着差异（P<0.05）。4、铅暴露对大鼠海马组织hnRNP U表达的影响:（1）RT-PCR实验表明与CON比较,LLG和HLG大鼠海马组织hnRNP U mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）。（2）WB实验表明,与CON比较,LLG和HLG大鼠海马组织hnRNP U总蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）,但核蛋白表达水平显着上调（P<0.05）。（3）IF实验表明,与CON比较,LLG和HLG大鼠海马组织CA1区hnRNP U核内分布增多,胞浆分布减少,核蛋白表达水平显着上升（P<0.05）,且LLG和HLG之间也存在显着差异（P<0.05）。5、铅暴露对PC12细胞REST表达的影响:（1）RT-PCR实验表明,与0μM组比较,1μM组和100μM组REST mRNA表达水平显着上升（P<0.05）,且1μM组和100μM组之间也存在显着差异（P<0.05）;（2）WB实验表明:与0μM组比较,1μM组和100μM组REST蛋白表达水平显着上升（P<0.05）,且1μM组和100μM组之间也存在显着差异（P<0.05）。6、铅暴露对PC12细胞hnRNP U表达的影响:（1）RT-PCR实验表明,与0μM组比较,1μM组和100μM组hnRNP U mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）。（2）WB实验表明:与0μM组比较,1μM组和100μM组hnRNP U蛋白表达水平无明显变化（P>0.05）。（3）IF实验表明,与0μM组比较,1μM组和100μM组hnRNP U核内分布明显增多,胞浆分布明显减少,核蛋白表达量显着上调,且1μM组和100μM组之间也存在显着差异（P<0.05）。7、干预hnRNP U对REST表达的影响:（1）RT-PCR实验表明,与空白组比较,对照组hnRNP U mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）,与对照组比较,实验组hnRNP U mRNA表达水平显着下降（P<0.05）;与空白组比较,对照组REST mRNA表达水平显着上升（P<0.05）,与对照组比较,实验组REST mRNA表达水平显着下降（P<0.05）。（2）IF实验表明,与空白组比较,对照组REST蛋白表达水平显着上升（P<0.05）;与对照组比较,实验组REST蛋白表达水平显着下降（P<0.05）。结论:铅暴露通过促进hnRNP U发生核转位,上调REST的mRNA表达水平,使其蛋白表达量增加,进一步影响REST调控的下游基因的表达,从而对学习记忆造成损伤。这为探讨铅的神经毒性机制提供理论依据,并为寻找治疗铅中毒的新药物提供新思路。
肖洁[4]（2019）在《益生菌对铅致学习记忆损伤的修复效应及其机理研究》文中研究说明目的:慢性铅暴露可引起以学习记忆损伤为特征的一系列神经退行性疾病的发生,儿童对铅暴露尤其敏感,血铅超标可导致儿童智力发育迟缓。益生菌制剂在发酵乳制品、功能性食品中应用广泛,对人体具有显着的健康调节效应。前期报道表明,益生菌的摄入可通过调整肠道菌群改善精神疾病,本文旨在探究是否可以通过该策略改善慢性铅暴露导致的典型学习记忆损伤,同时探明脑中表观遗传学因素在益生菌调节学习记忆过程中的作用。方法:在本实验中我们设置对照组、铅暴露组、铅暴露加益生菌摄入组、益生菌摄入组等四组。铅暴露方式为,在妊娠期大鼠饮水中给予低水平铅暴露（125ppm）,益生菌摄入方式为每只大鼠每天额外给予1010活菌单位的益生菌补充,幼鼠出生后继续接受暴露或益生菌定殖直至成年（PND 68）。造模完成后,利用水迷宫等行为学实验以及海马区神经元的树突棘形态来评估各组大鼠的学习记忆能力。此外,通过16S rRNA测序分析该暴露和修复条件下的肠道微生物组成,并分别通过蛋白质印迹和ELISA评估H3K27me3（组蛋白三甲基化）和免疫因子白介素6的表达情况,同时利用遗传和药物干预手段验证其在所述肠-脑通讯中的介导作用。结果:1)益生菌定殖可调节肠道健康并挽救慢性铅暴露引起的学习记忆损伤。慢性铅暴露引起发育期和成年期大鼠肠道菌群结构发生改变,主要表现为肠道菌群多样性降低,厚壁菌与拟杆菌的丰度及其相对比例的改变。益生菌摄入则维持了肠道菌群的相对稳态,使菌群结构整体上与对照更为接近。行为学实验结果显示慢性铅暴露对空间记忆及工作记忆能力的损害,益生菌摄入帮助大鼠在一系列行为学检测中取得更好成绩。海马区神经元树突棘形态的检测同样显示出益生菌对铅神经毒性的挽救效果;2)表观遗传调控元件EZH2-H3K27me3在益生菌修复铅神经损伤的过程中发挥重要作用。益生菌定殖修复了铅暴露引起的H3K27me3水平降低,敲低EZH2（组蛋白甲基化）下调H3K27me3水平后益生菌抵抗铅神经毒性的效应随之消失,而上调H3K27me3则显示出与摄入益生菌相同的神经保护作用;3)炎性因子IL-6（白介素6）建立了肠道菌群与铅神经损伤的通讯。益生菌使铅暴露引起的大鼠血清和海马中IL-6水平的异常升高恢复至正常。通过腹腔注射托珠单抗（一种IL-6受体拮抗剂）阻断IL-6对下游信号的传递,显着上调了铅组大鼠海马EZH2水平,并缓解了铅暴露引起的记忆损伤。结论:本研究结果表明,重塑肠道菌群是缓解慢性铅暴露引起的记忆功能障碍的新策略。在益生菌对学习记忆损伤的修复过程中,从边周到中枢神经系统的炎症-表观遗传途径,即IL-6-EZH2-H3K27me3,是介导所述脑肠通讯改善学习记忆状态的关键途径。这些发现为使用益生菌改善学习记忆损伤提供了实验证据,同时拓展了以脑中表观遗传变化为特定肠-脑作用机制研究的新视角。
赵静[5]（2019）在《铅镉联合暴露导致的神经毒性及HDAC2在其中的调控作用》文中研究指明食品重金属污染威胁着食品安全,铅和镉是食品中重金属污染的主要成分。已有研究表明铅和镉的单独暴露均会损伤发育期儿童的学习记忆,其损伤机制涉及多方面。铅和镉的联合暴露导致的神经毒性以及可能的表观遗传调控机制尚不清楚。研究铅镉联合暴露的神经毒性,有助于明确某些食品中铅和镉的安全限量标准,具有重要的科学意义和应用价值。本课题旨在探究铅镉联合暴露导致的神经毒性及其中可能表观调控机制,主要包括下结果:1.铅镉单独暴露和联合暴露对PC12细胞存活率和突起生长的影响。实验采用醋酸铅和氯化镉,以浓度为2.5、5、10、20μM的铅和0.1、0.2、0.4、0.8μM的镉处理PC12细胞,并用MTT比色法检测细胞存活率,Image J software统计细胞分支长度和数量。结果发现,铅和镉单独暴露均降低细胞存活率,且抑制了PC12细胞的突起生长,且对细胞存活率降低和突起生长的抑制作用呈剂量依赖性,铅镉联合暴露加重了对细胞存活率的降低,并加重了对细胞突起生长的抑制。2.铅镉单独暴露和联合暴露对Sprague Dawley（SD）大鼠学习记忆和海马CA1和DG区神经元树突棘密度的影响。SD大鼠从出生第一天开始通过饮水单独和联合暴露铅（150 ppm）和镉（5 ppm）至3月龄,运用水迷宫、Y迷宫实验和高尔基染色实验,探究铅镉单独暴露和联合暴露对SD大鼠学习记忆和海马CA1和DG区神经元树突棘密度的影响。行为学实验结果表明慢性铅和镉单独暴露对SD大鼠的学习记忆能力均有损伤,铅和镉联合暴露加重了对学习记忆能力的损伤;高尔基染色结果表明,铅和镉暴露显着降低了大鼠海马CA1区和DG区神经元二级分支的树突棘的密度,联合暴露加重了大鼠神经元树突棘的丢失。3.铅镉单独暴露和联合暴露对组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase2,HDAC2）表达的影响。通过蛋白质免疫印迹法和荧光定量聚合酶链式反应检测铅镉暴露后的PC12细胞和SD大鼠的海马组织中HDAC2的表达情况。PC12细胞处理剂量为10μM铅和0.1μM镉;SD大鼠染毒剂量与行为学实验相同。结果表明铅和镉暴露后海马组织和PC12细胞中HDAC2表达量均有所升高,联合暴露后HDAC2表达量较单一重金属暴露组的显着升高。4.HDAC2对铅镉单独暴露和联合暴露导致的突起生长抑制的调控作用。用TSA（HDAC2的抑制剂）和shHDAC2处理10μM铅和0.1μM镉暴露的未分化PC12细胞,TSA和shHDAC2均可以显着挽救铅镉联合暴露引起的PC12细胞的突起生长抑制。结论:体内和体外研究均表明铅镉联合暴露较铅镉单独暴露加重了其神经毒性。HDAC2在铅和镉联合暴露引起的突起生长抑制中发挥了重要的调节作用,为神经毒性干预提供了潜在的分子靶点。
娄志义[6]（2018）在《L—苏糖酸镁对铅致大鼠学习和记忆功能损伤的修复作用及机理研究》文中研究指明重金属对食品污染是世界范围内的重大安全问题,而铅污染显得更为严重。人体铅中毒的一个重要来源是食品中的铅,铅能够严重危害人的生殖系统、中枢神经系统以及生长发育,铅对儿童健康的影响是毒理学领域研究的热点,铅暴露能损伤儿童的学习和记忆功能,这已经受到社会广泛的关注。通过使用L-苏糖酸镁（magnesium-L-threonate,MgT）提高脑中的镁的含量,能增强记忆功能以及突触可塑性,那么提高脑中的镁对铅暴露导致的学习和记忆功能的损伤是否有影响,目前尚未见报道。在大鼠的发育期,铅暴露对Ezh2（Enhancer of zeste homolog 2,果蝇 zeste基因增强子的人类同源物2）的表达和N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体的表达都有影响,并且有一定的时间相关性,具有组蛋白甲基化转移酶活性的Ezh2,通过促进组蛋白的甲基化能够调节很多基因的表达,那么铅是否会通过调节Ezh2的表达进而调节NMDA受体亚单位基因的表达,MgT对铅暴露引起的NMDA受体的表达的影响是如何发挥作用的,均未见报道。目的1.探究食品源性的MgT对铅暴露引起的大鼠空间记忆的损伤的作用及可能的机制;2.探究铅暴露对NMDA受体亚单位表达的调节机理及MgT的作用方法1.利用Morris水迷宫实验检测MgT对铅至大鼠空间记忆能力损伤的影响。2.Golgi-cox染色实验用于树突棘密度及分支数量的形态学分析。3.用Western Blot检测成年大鼠海马中突触相关蛋白,检测PC12细胞、发育期大鼠海马细胞及成年大鼠海马细胞中Ezh2,H3K27me3和H3等蛋白的表达,用荧光定量PCR及RT-PCR分别检测发育期和成年大鼠海马、原代海马神经元和PC12细胞NMDA受体亚单位、AMPA（alha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazoleprop-ionic acid,α-氨基-3-轻基-5-甲 基异恶唑-4-丙酸）受体亚单位以（PSD-postsynaptic density protein 95,突触后密度蛋白-95）的mRNA表达。结果1.在水迷宫实验中,铅暴露显着的损伤了大鼠的记忆功能,而MgT能修复铅暴露大鼠的记忆功能的损伤。2.MgT提高了铅暴露大鼠海马的树突棘密度及树突分支的数量。3.MgT提高了 GluRl和NR2A蛋白在正常对照组及铅暴露组大鼠海马中的表达,而NR2B和PSD-95仅在正常对照组中有提高。4.镁能修复铅损伤的原代海马神经元树突棘密度,同时提高了铅损伤的NR2A、NR2B、GluRl、GluR2以及PSD-95等基因mRNA表达量。5.铅降低了 PC12细胞和14天大鼠海马中Ezh2,H3K27me3蛋白的表达水平,提高了 NR1 mRNA表达。6.铅提高了 60天成年大鼠海马中Ezh2,H3K27me3蛋白的表达水平,同时降低了 NR1 mRNA表达;7.MgT提高了正常对照组和铅鼠海马中NR1的表达以及H3K27me3蛋白的表达水平。结论1.MgT对铅暴露引起的大鼠空间记忆的损伤具有修复作用,这种作用与MgT能够增加铅损伤的大鼠海马组织树突棘密度及分支数量有关,而树突棘密度的增加又与MgT促进突触相关蛋白GluR1和NR2A的表达有关。2.镁能够增加铅损伤的原代海马神经元树突棘密度及PC12细胞突起生长,而树突棘密度的增加又与MgT促进突触相关蛋白NR2A、NR2B、GluR1、GluR2以及PSD-95的表达有关。3.铅可能通过Ezh2介导的H3K27三甲基化调节NR1的转录,MgT能够修复铅对NR1的表达的损伤作用,但是这种修复作用并非通过H3K27三甲基化的调节实现的。
赵再华[7]（2018）在《GLUT4在铅损伤学习记忆功能中的作用及机制》文中认为背景:铅是一种广泛存在的环境重金属毒物,具有显着的神经毒性,尤其是发育期铅暴露引起脑功能不可逆损伤是一个难治性、全球性的环境卫生课题,为此针对铅损伤学习记忆功能的机制研究一直是环境神经毒理学领域的热点与难点。海马作为大脑学习记忆的整合中心,是铅神经损伤作用的最主要靶点。海马突触可塑性是学习记忆形成的神经生物学基础,包括形态结构变化的结构可塑性和传递效能相关的功能可塑性。以往研究认为铅暴露对海马突触可塑性的影响是其神经毒性作用的核心环节,而其具体机制尚不明确,因此,深入研究铅暴露影响海马突触可塑性的机制,对于全面揭示铅损伤学习记忆功能的特点和规律、以及寻找潜在的医学干预靶点,都具有重要的意义。葡萄糖作为大脑最为主要的能量物质,对于维持大脑神经细胞功能和结构的完整性起到关键作用。研究表明大脑葡萄糖代谢异常可以引起突触功能和结构可塑性发生改变,进而导致学习记忆功能损伤。铅暴露可以引起大脑葡萄糖代谢水平降低,并且导致大脑能量代谢紊乱。同时,一些基于铅中毒的动物实验研究证实大脑功能失调与能量代谢紊乱相关,并且提出铅暴露引起的葡萄糖代谢异常是其根本原因。为此,研究铅暴露后大脑海马葡萄糖代谢的改变及其对突触可塑性的影响和相关机制,对于揭示铅损伤学习记忆功能的机制可能是一个新的突破口。葡萄糖不能在大脑神经细胞中合成或储存,需要通过葡萄糖转运体（GLUTs）转运进入神经细胞,其中GLUT4在海马依赖的学习记忆期间的神经元葡萄糖供给中发挥关键作用。脑内的胰岛素可通过激活PI3K-Akt信号通路诱导GLUT4转位至神经元细胞膜,在学习记忆期间向神经元提供更多的葡萄糖供给用以维持神经元结构和功能完整性,而铅暴露对GLUT4的影响尚不清楚。因此,研究铅暴露是否通过干扰GLUT4,引起学习记忆期间海马神经元葡萄糖供给不足,进而导致神经元突触可塑性改变并造成学习记忆功能损伤,将为进一步阐明铅损伤学习记忆功能的机制提供新的角度和重要的理论依据。目的:本研究通过建立铅暴露大鼠模型和原代培养海马神经元模型,综合应用形态学、分子生物学及功能学评价等技术手段,观察铅暴露对大脑突触可塑性和葡萄糖代谢的影响,研究神经元葡萄糖摄取水平的改变对突触可塑性的影响,并进一步探讨GLUT4在其中的作用及其调控机制。研究结果将为进一步阐明铅损伤学习记忆功能的机理提供新的理论基础。方法:1.建立模型1)动物模型:孕期铅暴露大鼠模型,分为对照组、铅暴露组,通过饮水染毒,剂量为0和0.02%的醋酸铅,在PND10（postnatal day）结束铅暴露,将PND30雄性大鼠作为研究对象。2)细胞模型:原代培养大鼠海马神经元,采用MTT法筛选合适的铅暴露浓度为0和1μM的醋酸铅,培养至DIV7（days in vitro）进行铅暴露,持续5 d,于DIV12进行观察。2.利用原子吸收分光光度法检测铅在大鼠血液中的含量,并利用Morris水迷宫检测铅暴露对大鼠空间学习记忆功能的影响。3.采用膜片钳记录检测铅暴露对大鼠海马LTP的影响,并通过Golgi染色结合Imaris软件观察铅暴露对大鼠海马锥体神经元树突棘的影响。4.利用小动物PET-CT扫描结合PMOD软件分析观察铅暴露对大鼠大脑葡萄糖摄取的影响。5.采用免疫印迹法（Western blot）观察铅暴露对大鼠海马组织和原代培养大鼠海马神经元中GLUT4、Akt和p-Akt等蛋白表达的影响。6.采用免疫荧光染色观察铅暴露对大鼠海马神经元和星型胶质细胞GLUT4蛋白表达的影响。7.利用2-NBDG结合流式细胞技术观察铅暴露对原代培养大鼠海马神经元中葡萄糖摄取的影响。8.通过慢病毒感染结合激光共聚焦显微镜活细胞工作站观察铅暴露对原代培养大鼠海马神经元树突棘的影响。9.通过质粒转染技术在原代培养大鼠海马神经元中过表达GLUT4观察神经元葡萄糖代谢改变对其突触可塑性的影响。10.通过腺病毒结合脑立体定位注射,在大鼠海马区过表达GLUT4观察大鼠海马神经元葡萄糖代谢改变对其学习记忆功能的影响。结果:1.孕期低水平铅暴露对大鼠学习记忆以及海马突触可塑性的影响1)检测大鼠血铅浓度发现,与对照组相比,铅暴露组大鼠在PND0、10和21各时间点血铅水平均显着升高;而在PND30,铅暴露组大鼠血铅水平与对照组相比无显着差异。2)Morris水迷宫结果表明,与对照组相比,PND30铅暴露组大鼠到达平台潜伏期显着延长而目标象限停留时间显着缩短。3)通过高频刺激诱导大鼠海马LTP发现,与对照组相比,铅暴露组大鼠海马区fEPSP斜率显着降低。4)Golgi染色结果表明,与对照组相比,铅暴露组大鼠海马区锥体神经元基树突和顶树突的树突棘密度均显着降低,并且Thin和Mushroom形态的树突棘数量均显着减少。2.孕期低水平铅暴露对大鼠大脑葡萄糖代谢的影响1)PET-CT结果显示,与对照组相比,铅暴露组大鼠的海马、杏仁核和嗅球的葡萄糖代谢水平显着降低。2)Western blot结果表明,与对照组相比,铅暴露组大鼠海马组织中GLUT1和GLUT3的蛋白表达均未见显着改变,而GLUT4的蛋白表达均显着降低。3)免疫荧光染色结果显示,在大鼠海马CA1区和DG区中,GLUT4与NeuN有显着的双标,并且与对照组相比,铅暴露组双标显着减少;而GLUT4与GFAP在大鼠海马CA1区和DG区未见显着双标。4)Western blot结果提示,与对照组相比,铅暴露组大鼠海马组织中p-Akt和PM-GLUT4蛋白表达水平显着降低。5)Western blot结果提示,单独胰岛素刺激使得大鼠海马组织p-Akt和PM-GLUT4蛋白表达显着增加;而在铅暴露组中,胰岛素刺激并未能扭转p-Akt和PM-GLUT4蛋白表达的减少。3.铅暴露后大鼠海马葡萄糖代谢异常对突触可塑性的影响1)流式细胞仪检测结果表明,与对照组相比,1μM的醋酸铅处理后原代培养海马神经元的葡萄糖摄取显着减少。2)Western blot结果表明,与对照组相比,铅暴露组原代培养海马神经元的GLUT4、PM-GLUT4和p-Akt蛋白表达水平均显着降低。3)Western blot结果显示,单独胰岛素处理后p-Akt水平以及PM-GLUT4蛋白表达水平显着增加;而铅暴露组中,胰岛素刺激并未能扭转p-Akt和PM-GLUT4蛋白表达的减少。4)过表达GLUT4后,铅暴露组原代海马神经元PM-GLUT4蛋白表达水平和葡萄糖摄取均显着回转,同时mEPSC振幅和树突棘密度均显着回升。4.GLUT4在铅暴露损伤学习记忆中的作用1)Western blot结果表明,大鼠海马区脑立体定位注射过表达GLUT4腺病毒后,铅暴露组大鼠海马组织中PM-GLUT4蛋白表达水平显着回转。2)PET-CT结果显示,大鼠海马区脑立体定位注射过表达GLUT4腺病毒后,铅暴露组大鼠海马区的葡萄糖代谢水平显着回升。3)Golgi染色结果表明,大鼠海马区脑立体定位注射过表达GLUT4腺病毒后,铅暴露组大鼠海马组锥体神经元基树突和顶树突的树突棘密度显着回转,并且Thin和Mushroom形态的树突棘数量均显着回升。4)膜片钳结果显示,大鼠海马区脑立体定位注射过表达GLUT4腺病毒后,铅暴露组大鼠海马区LTP的fEPSP斜率显着回升。5)水迷宫结果表明,大鼠海马区脑立体定位注射过表达GLUT4腺病毒后,铅暴露组大鼠寻找平台潜伏期和目标象限停留时间显着回转。结论:1)铅暴露引起大鼠海马突触的功能可塑性和结构可塑性损伤,导致学习记忆能力降低。2)铅通过干扰GLUT4的蛋白表达、抑制PI3K-Akt信号通路和GLUT4的转位上膜,引起大鼠海马神经元葡萄糖摄取减少。3)GLUT4介导的神经元葡萄糖摄取对于大鼠海马突触可塑性的维持具有重要的作用。4)抑制GLUT4的蛋白表达及其膜转位可能是铅损伤学习记忆功能的重要机制之一。综上所述,本实验研究结果表明铅暴露抑制了大鼠海马神经元GLUT4的蛋白表达和PI3K/Akt信号通路,使得GLUT4膜转位减少,从而引起神经元葡萄糖摄取减少,进而致使大鼠海马突触可塑性降低,最终导致大鼠学习记忆功能损伤。
邢栋[8]（2017）在《食品源铅暴露对发育期海马神经元发育的影响及机理研究》文中认为食品安全与人类健康息息相关,而随着环境问题的突出,食品源性铅暴露屡见不鲜。铅是一种传统的重金属污染物,对神经系统尤其是中枢神经系统具有毒性效应。本研究组的前期工作结果表明,发育期铅暴露会对大鼠大脑认知功能造成一定的损伤,但是其内在具体机制尚未完全明确。近来,有研究表明铅暴露对神经元发育过程有抑制作用,但对其内在调节机制研究甚少。目的:研究铅暴露对Sprague-Dawley（SD）大鼠海马区神经元增殖、分化的影响及相关信号通路;研究铅暴露调节神经元成熟的详细生物分子机制进而推测其致神经退行性疾病的潜在机制。方法:1.SD大鼠按照雌雄1:3配对后随机分为正常对照组和铅暴露组。正常对照组饮用蒸馏水,铅暴露组饮用铅水（250ppm醋酸铅溶于蒸馏水,30mL/d）。实验鼠自胚胎期开始接受铅暴露,出生后至断奶前（出生后21天）通过母乳间接接受铅暴露,断奶后通过饮用铅水直接接受铅暴露。对照组和铅暴露组幼鼠均于出生后第19天至21天通过腹腔注射给予5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,40mg/kg,每天一次,于第22天断头取材。免疫组织化学观察海马区新生神经元数量,Western blot检测经典Wnt通路相关蛋白表达量,Real-time Quantitative PCR（q-PCR）检测经典Wnt通路中mRNA的表达。2.以离体培养的海马神经元为实验材料,从RNA调控水平深入探究铅暴露抑制神经元发育的分子机制。取新生大鼠（出生后24小时内,P0）原代海马神经元进行细胞培养,体外培养第3天开始进行醋酸铅（5μM）处理,连续暴露11天,于第14天收样。Western blot实验和q-PCR实验分别从蛋白水平和mRNA层面检测Kmt2a（MLL1）的表达,同时q-PCR实验检测具有招募功能的长链非编码RNA（LncRNA）的表达。结果:1.铅暴露显着降低SD大鼠海马区新生神经元数目（BrdU标记）。2.铅暴露显着升高磷酸化β-catenin蛋白水平,降低磷酸化GSK-3β蛋白水平,而对GSK-3β和β-catenin总体蛋白水平没有产生显着影响。此外GSK-3β在mRNA水平上显着上升。3.铅暴露显着抑制MLL1蛋白水平和mRNA水平的表达。4.铅暴露可影响H3K4me3在染色质中分布,并且这种改变可能是通过影响具有招募功能的LncRNA表达实现的。结论:本研究从经典Wnt信号通路和靶分子H3K4me3两个分子机制作为切入点共同探究发育期铅暴露对大脑新生神经元的增殖、分化以及成熟两个方面过程的影响。1.发育期铅暴露可能通过抑制经典Wnt通路来影响发育期大鼠海马区新生神经元增殖、分化。2.对神经元发育成熟过程有重要调节作用的MLL1分子的表达受铅暴露影响,同时改变了H3K4me3在染色质上的分布,并且这一过程可能是通过调控具有招募功能的LncRNA实现的。该研究成果从神经元发育的角度为今后关于发育期铅暴露的神经毒性的研究提供了新的视野。
何慧明[9]（2017）在《食源性铅暴露对发育期原代海马神经元元突触传递的影响及可能机理》文中研究指明背景和目的:食源性铅中毒事件越来越受到人们的广泛关注。大量的研究表明,铅可导致大脑的神经系统的损伤,进而影响学习记忆和认知能力,其中对发育期儿童的损伤尤为明显。突触神经递质的传递是维持大脑神经活动正常工作的基础,但是铅对发育期的神经递质的传递的影响及其机理尚不明确。因此,本课题旨在研究“慢性铅暴露对原代海马神经元突触传递的影响及可能机理研究”。方法:1.以Sprague-Dawley（SD）新生大鼠（出生24h以内）为模型,取海马CA1组织进行离体培养,在第三天时加入5μM的醋酸铅进行慢性铅暴露处理。在第14天时,利用电生理膜片钳技术,记录突触后微小电流（mEPSC和mIPSC）,以评价慢性铅暴露对兴奋性突触传递和抑制性突触传递的影响。2.整体动物实验以SD母鼠为研究模型,250 ppm醋酸铅在SD大鼠孕期进行暴露至幼鼠出生30天。利用透射电镜观察CA1组织突触前膜囊泡分布;Q-PCR检测SNARE单体syntaxin1a、SNAP-25、VAMP2的m RNA表达量;Western Blot检测了SNARE复合体的蛋白表达量;电生理记录PPR。另一方面,为了阐明慢性铅暴露对突触传递影响的可能机理,以离体培养的原代海马神经元为模型,5μM的铅暴露3至14天。1.用Western Blot检测H3K27me3的蛋白含量,以及synapsin1和synapsin1的磷酸化水平。2.染色质免疫共沉淀技术检测检测H3K27me3与synapsin1的互作能力。3.Q-PCR检测H3K27me3下游调控基因synapsin1、synapsin2、synaptotagmin6以及CDK5的m RNA的表达量。4.电生理膜片钳技术进一步验证慢性铅暴露导致的递质释放的抑制是否有CDK5的参与。结果:（1）慢性铅暴露显着降低了原代海马神经元m EPSC和m IPSC的频率,但是对m EPSC和m IPSC的幅度无显着变化。（2）透射电镜的结果显示慢性铅暴露使突触前膜的囊泡在突触前膜的分布更加的弥散;Q-PCR结果表明慢性铅暴露导致了SNAP-25和VAMP2的m RNA显着下降,syntaxin1a的m RNA的含量显着上升;但是Western Blot的结果显示,SNARE复合体的蛋白含量不变。电生理结果显示慢性铅暴露使得囊泡的释放能力降低。（3）慢性铅暴露导致H3K27me3的蛋白含量显着下降,通过基因芯片技术筛选出与囊泡释放相关的基因,Q-PCR结果显示慢性铅暴露显着降低了synapsin1的m RNA水平,但synapsin2的水平显着上升。Chip实验结果显示慢性铅暴露组中H3K27me3与synapsin1的结合能力上升。（4）慢性铅暴露显着降低了synapsin1的第553位色氨酸位点的磷酸化水平,对synapsin1的总蛋白含量没有变化。慢性铅暴露显着提高了synapsin1磷酸化位点的上游CDK5的m RNA的表达量。结论:（1）慢性铅暴露抑制了原代海马神经元兴奋性和抑制性神经递质的释放,但是没有改变突触后膜的电流强度。（2）慢性铅暴露改变了突触前膜囊泡的分布,并且抑制了突触前膜囊泡的释放能力。（3）慢性铅暴露通过提高CDK5的表达量导致synapsin1的第553位色氨酸位点的磷酸化进而抑制神经递质的释放。
张倩[10]（2016）在《典型全氟/多氟磺酸化合物对大鼠长时程增强的影响和机制研究》文中进行了进一步梳理全氟辛烷磺酸（perfluorooctane sulfonate, PFOS）是一种最典型的全氟磺酸化合物,由于良好的表面活性和稳定性被广泛应用于日常生活和工业生产等多个领域。PFOS能够通过血脑屏障对发育神经系统造成影响,抑制仔鼠学习记忆能力,但其机制尚不清楚。自2009年PFOS被列入斯德哥尔摩公约,已在多国禁止生产使用,但在某些生产领域仍在持续使用,包括直接向环境中排放的泡沫灭火剂和杀虫剂。此外,PFOS替代品生产应用的快速发展,使得大量短碳链及插入氮、氧等杂原子的全氟／多氟磺酸类化合物的环境水平升高,然而相关的毒理学研究极其有限,环境健康风险未知。研究典型全氟／多氟磺酸化合物的神经毒性效应和机制,对于阐明这类污染物与学习能力损伤、神经退行性疾病之间的关系具有重要意义。本论文利用整体动物建立交叉哺育模型进行发育期暴露,研究PFOS对反映学习记忆能力的关键指标长时程增强（LTP）的影响,结合原代海马神经元细胞离体培养,从α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体运输调控探讨PFOS暴露引起LTP损伤的潜在机制。进一步对与学习记忆能力密切相关的Tau磷酸化和p淀粉样蛋白（Aβ）生成过程进行检测,阐明发育期PFOS暴露与神经退行性疾病的可能关联。最后,比较急性侧脑室暴露典型全氟／多氟磺酸化合物对在体LTP的影响,初步评价其神经毒性潜能。主要内容包括：（1）建立整体动物交叉哺育模型,利用电生理技术测定PFOS对大鼠海马CA1区在体LTP的影响,阐明发育期PFOS暴露损伤学习记忆能力的机制。结果显示：发育期PFOS暴露会剂量依赖性抑制LTP的诱发和维持,与PFOS影响大鼠自发行为和损伤学习记忆能力的结果一致,为PFOS的发育神经毒性提供了电生理学依据。高频刺激60 min后5 mg/L和15mg/LPFOS暴露组的场突触后电位（field-excitatory postsynaptic potential, fEPSP）幅值与对照组相比降低20-27%。反映基础突触传递能力的输入输出曲线（I/O）刺激强度在0.3-0.5 mA时PFOS处理组fEPSP幅值比对照组显着降低,双脉冲易化效应（PPF）在最大易化点TT15组显着低于对照组。结果提示PFOS发育期暴露会同时影响突触前细胞和突触后细胞的突触传递效率和突触可塑性,是PFOS损伤学习记忆能力的重要机制。（2）结合体内实验和体外实验,阐明PFOS损伤LTP的AMPA调控机制。PFOS发育期体内暴露引起GluRl和GluR2蛋白和基因的表达水平下调,同时引起磷酸化蛋白GluR1-s831和蛋白激酶CaMKⅡ-α表达水平下调。新生仔鼠原代海马神经元细胞暴露于2μM和20 μM PFOS后,AMPA受体亚基GluR1和GluR2在膜上的表达降低,与体内实验结果一致。PFOS引起谷氨酸作用蛋白GRIP1表达显着下调,与GluR2变化趋势一致,RNA剪辑酶ADAR2 mRNA表达比对照组增加2倍。NBQX抑制PFOS对细胞钙稳态和相关基因表达的影响。结果说明PFOS通过改变AMPA受体亚基的表达调节AMPA受体的动态分布,提高AMPA受体对Ca2+的通透性,损伤神经突触可塑性。（3）通过考察PFOS发育期暴露对Tau磷酸化和Aβ聚集水平的影响,阐明PFOS发育期暴露与神经退行性疾病之间的可能关联。结果发现：PFOS发育期暴露引起Tau总蛋白及mRNA表达水平上调,引起Tau蛋白在S199、T231、S396位点的磷酸化水平升高以及蛋白激酶GSK-3β蛋白含量显着上调。PFOS发育期暴露促进淀粉样蛋白前体App mRNA的表达上调,Aβ1-42表达增加,早老素Ps-1表达下调,引起App剪切过程异常和Aβ聚集。另外,PFOS血清浓度较低的出生前PFOS暴露组和出生后暴露组及出生前后均暴露组对Tau磷酸化和Aβ聚集水平的影响程度相当,提示胚胎期PFOS暴露具有较高的发育神经毒性。（4）比较典型全氟/多氟磺酸类化合物急性侧脑室注射对在体LTP的影响,研究PFOS替代物的潜在神经毒性效应和机制。结果表明,PFOS替代物均对LTP产生抑制作用,并随暴露浓度升高抑制作用增强。高频刺激后60 min,对照组fEPSP幅值仍维持在基线的140%以上,而100 μM PFOS、全氟己烷磺酸（PFHxS）和氯代多氟醚基磺酸（Cl-PFAES）的fEPSP幅值降低至基线的97%和98%,显着低于对照组。全氟丁烷磺酸钾盐（PFBS）对LTP的抑制作用较弱,fEPSP幅值维持在基线的122%,与对照组无显着差异。PFHxS和Cl-PFAES对LTP的损伤程度与PFOS相近,提示PFHxS和Cl-PFAES具有与PFOS相当的损伤神经突触可塑性的潜能。Cl-PFAES对基础波fEPSP有显着的抑制作用,提示Cl-PFAES可能具有与全氟磺酸类化合物不同的神经毒性作用机制。因此有必要进一步研究PFOS替代物的发育神经毒性。发育期PFOS暴露抑制LTP的诱导和维持,AMPA受体调控是其重要机制。PFOS通过抑制蛋白激酶CaMKⅡ-α对GluR1-s831、GluR2-s880的磷酸化,改变AMPA受体亚基GluR1、GluR2在细胞膜上的分布,引起AMPA受体内化,增强AMPA受体对钙离子的通透性。同时PFOS发育期暴露引起Tau磷酸化水平上调及Aβ聚集也提示PFOS发育期暴露与神经退行性疾病的可能关联。初步发现PFOS替代物的神经毒性潜能,提示有必要进一步研究其发育神经毒性效应和机制。研究结果为全氟/多氟化合物的人体健康风险评价提供科学依据。
二、慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响（论文提纲范文）
（1）鸡饲料铅污染调查与硒颉颃铅致鸡脾脏毒性效应的评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 1.1 铅污染现状 |
| 1.1.1 铅污染的来源 |
| 1.1.2 土壤和水污染现状 |
| 1.1.3 食品污染现状 |
| 1.1.4 饲料污染现状 |
| 1.2 铅毒性的研究进展 |
| 1.2.1 铅的一般毒性 |
| 1.2.2 铅的免疫毒性 |
| 1.2.3 铅与氧化应激 |
| 1.2.4 铅与细胞凋亡、自噬、坏死 |
| 1.3 程序性坏死与免疫的研究进展 |
| 1.3.1 程序性坏死的发生机理 |
| 1.3.2 程序性坏死与免疫功能 |
| 1.4 程序性坏死与疾病的研究现状 |
| 1.5 研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 鸡饲料样品的采集 |
| 2.1.2 试验动物分组与采样 |
| 2.1.3 淋巴细胞分离培养 |
| 2.2 仪器设备及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 饲料中铅含量的调查 |
| 2.3.2 鸡脾脏组织显微结构的观察 |
| 2.3.3 鸡脾脏组织中铅、硒含量的检测 |
| 2.3.4 氧化应激相关指标的检测 |
| 2.3.5 细胞因子含量的检测 |
| 2.3.6 AO/EB双重荧光染色 |
| 2.3.7 流式细胞术对细胞坏死的检测 |
| 2.3.8 RT-qPCR检测 |
| 2.3.9 Western blot检测 |
| 2.4 试验数据的统计与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鸡饲料铅污染调查 |
| 3.1.1 不同年份饲料铅污染的调查结果 |
| 3.1.2 不同种类鸡用饲料铅的检测结果 |
| 3.1.3 不同动物种类鸡用饲料铅的检测结果 |
| 3.1.4 不同生长阶段肉鸡饲料铅的检测结果 |
| 3.2 鸡脾脏组织显微结构观察结果 |
| 3.3 鸡脾脏组织中铅和硒含量检测结果 |
| 3.4 氧化应激相关指标检测结果 |
| 3.4.1 鸡脾脏组织氧化应激相关指标检测结果 |
| 3.4.2 淋巴细胞氧化应激相关指标检测结果 |
| 3.5 细胞因子含量的检测结果 |
| 3.5.1 鸡血清中细胞因子含量的检测结果 |
| 3.5.2 淋巴细胞中细胞因子含量的检测结果 |
| 3.6 AO/EB双重荧光染色对细胞坏死的检测结果 |
| 3.7 流式细胞术对细胞坏死的检测结果 |
| 3.8 NF-κB通路中相关因子的检测结果 |
| 3.8.1 鸡脾脏组织NF-κB通路相关因子mRNA水平和蛋白表达检测结果 |
| 3.8.2 淋巴细胞中NF-κB通路相关因子mRNA水平和蛋白的检测结果 |
| 3.9 RIP3依赖型程序性坏死相关基因的检测结果 |
| 3.9.1 鸡脾脏RIP3 依赖型程序性坏死相关基因mRNA水平和蛋白检测结果 |
| 3.9.2 淋巴细胞RIP3 依赖型程序性坏死相关基因mRNA水平和蛋白检测结果 |
| 3.10 MAPK通路相关基因的检测结果 |
| 3.10.1 鸡脾脏MAPK通路相关基因mRNA水平和蛋白的检测结果 |
| 3.10.2 淋巴细胞中MAPK通路相关基因mRNA水平和蛋白的检测结果 |
| 3.11 热休克蛋白基因的检测结果 |
| 3.11.1 鸡脾脏组织中热休克蛋白基因mRNA水平和蛋白的检测结果 |
| 3.11.2 淋巴细胞中热休克蛋白基因mRNA水平和蛋白的检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 鸡饲料铅污染情况、原因及对策 |
| 4.2 硒铅互作对脾组织病理形态学的影响 |
| 4.3 硒铅互作对脾组织硒铅含量的影响 |
| 4.4 硒铅互作对细胞因子表达水平的影响 |
| 4.5 硒铅互作对抗氧化功能的影响 |
| 4.6 硒铅互作对NF-κB通路表达的影响 |
| 4.7 硒铅互作对热休克蛋白表达的影响 |
| 4.8 硒铅互作对MAPK通路相关基因表达的影响 |
| 4.9 硒铅互作对鸡脾脏程序性坏死通路的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（2）生命早期铅致SD大鼠学习记忆损伤及白藜芦醇的保护作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 主要试剂的配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物饲养及分组 |
| 2.2.2 Morris水迷宫 |
| 2.2.3 大鼠标本的采集处理 |
| 2.2.4 大鼠血铅测定 |
| 2.2.5 组织中总RNA的提取及检测 |
| 2.2.6 RT-qPCR定量检测 |
| 2.2.7 Western blot检测海马组织中各蛋白的表达水平 |
| 2.3 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 铅暴露对大鼠空间学习记忆的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.1.1 定位导航实验 |
| 3.1.2 空间探索实验 |
| 3.2 铅暴露对大鼠血铅含量的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3 铅暴露对大鼠海马中SIRT1、CREB和BDNF分子的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3.1 铅暴露对大鼠海马中SIRT1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3.2 铅暴露对大鼠海马中CREB表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.3.3 铅暴露对大鼠海马中BDNF表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.4 铅暴露对大鼠海马中突触前蛋白Syn-1、LIMK1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.4.1 铅暴露对大鼠海马中Syn-1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.4.2 铅暴露对大鼠海马中LIMK1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.5 铅暴露对大鼠海马中突触后蛋白PSD-95、NL-1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.5.1 铅暴露对大鼠海马中PSD-95表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 3.5.2 铅暴露对大鼠海马中NL-1表达的影响及白藜芦醇的干预作用 |
| 4 讨论 |
| 4.1 生命早期铅暴露显着提高大鼠血铅含量 |
| 4.2 生命早期铅暴露损害大鼠空间学习记忆 |
| 4.3 白藜芦醇可下调铅暴露大鼠血铅水平及逆转铅暴露对大鼠空间学习记忆的损伤 |
| 4.4 白藜芦醇减轻因铅暴露致大鼠海马中SIRT1/CREB/BDNF通路分子的表达下调 |
| 4.5 白藜芦醇削弱铅暴露致突触前相关蛋白表达的下调 |
| 4.6 白藜芦醇削弱铅暴露致突触后相关蛋白表达的下调 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 生命早期铅暴8E致突触损伤机制以及白藜芦酵的神经保护作用 |
| 参考文献 |
| 个人简历,在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（3）hnRNP U介导铅暴露对REST影响机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 前言 |
| 第2章 铅暴露对大鼠REST和 hnRNP U表达的影响 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 大鼠学习记忆能力 |
| 2.3.2 大鼠全血和海马组织中铅含量 |
| 2.3.3 大鼠海马组织REST和 hnRNP U mRNA水平 |
| 2.3.4 大鼠海马组织REST和 hnRNP U蛋白水平 |
| 2.3.5 IF检测大鼠海马组织CA3、CA1和DG区 REST表达变化 |
| 2.3.6 IF检测大鼠海马组织CA1区hnRNP U表达变化 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 铅暴露对PC12 细胞REST和 hnRNP U表达的影响 |
| 3.1 概述 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 铅暴露PC12 细胞REST和 hnRNP U mRNA水平 |
| 3.3.2 铅暴露PC12 细胞REST和 hnRNP U蛋白水平 |
| 3.3.3 IF检测铅暴露PC12 细胞hnRNP U表达变化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 干预hnRNP U对铅暴露环境下REST表达的影响 |
| 4.1 概述 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 RT-PCR检测沉默hnRNP U后的hnRNP U和 REST mRNA水平 |
| 4.3.2 IF检测沉默hnRNP U后 REST蛋白水平 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（4）益生菌对铅致学习记忆损伤的修复效应及其机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 益生菌 |
| 1.1.1 益生菌的分类 |
| 1.1.2 益生菌的益生效应 |
| 1.1.3 益生菌制剂应用现状 |
| 1.2 神经系统疾病与肠道微生物 |
| 1.2.1 神经退行性疾病 |
| 1.2.2 学习记忆及损伤 |
| 1.2.3 铅的神经毒性 |
| 1.2.4 肠道微生物与神经系统的关联 |
| 1.3 课题背景意义及内容 |
| 1.3.1 研究背景和意义 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 1.3.3 技术路线图 |
| 第二章 益生菌对肠道菌群结构及学习记忆损伤的修复作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 |
| 2.1.3 相关引物 |
| 2.1.4 实验动物及样品采集 |
| 2.1.5 实验菌株 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 提取粪便总DNA |
| 2.2.2 绝对荧光定量聚合酶链式反应 |
| 2.2.3 肠道微生物测序分析 |
| 2.2.4 高尔基染色（Golgi-COX）实验 |
| 2.2.5 Morris 水迷宫实验 |
| 2.2.6 Y 迷宫实验 |
| 2.2.7 双道原子荧光法检测组织及血液铅含量 |
| 2.3 数据分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 益生菌修复铅引起的发育期大鼠肠道菌群改变 |
| 2.4.2 益生菌修复铅引起的成年大鼠肠道菌群改变 |
| 2.4.3 益生菌定殖修复铅引起的大鼠学习记忆能力损伤 |
| 2.4.4 益生菌定殖部分修复铅引起的神经元树突棘密度降低 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 第三章 益生菌修复铅神经损伤的机制 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂和药品 |
| 3.1.3 相关抗体 |
| 3.1.4 实验动物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 蛋白制样 |
| 3.2.2 BCA法检测蛋白液浓度 |
| 3.2.3 蛋白免疫印迹实验 |
| 3.2.4 组织免疫荧光实验 |
| 3.2.5 PC12 细胞培养 |
| 3.2.6 细胞脂质体转染实验 |
| 3.2.7 细胞分化实验 |
| 3.2.8 酶联免疫吸附试验 |
| 3.3 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 益生菌定殖修复铅暴露引起的H3K27me3 水平降低 |
| 3.4.2 EZH2-H3K27me3 介导益生菌定殖修复铅神经损伤的作用 |
| 3.4.3 白介素6 介导EZH2 以及学习记忆的改变 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 |
（5）铅镉联合暴露导致的神经毒性及HDAC2在其中的调控作用（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 食品中铅和镉的污染现状 |
| 1.1.1 食品中铅的污染现状 |
| 1.1.2 食品中镉的污染现状 |
| 1.2 铅和镉的神经毒性及可能机制 |
| 1.2.1 铅的神经毒性 |
| 1.2.2 铅的神经毒性的可能机制 |
| 1.2.3 镉的神经毒性 |
| 1.2.4 镉的神经毒性的可能机制 |
| 1.3 表观遗传学 |
| 1.3.1 表观遗传学涉及的机制 |
| 1.3.2 表观遗传学的研究方法 |
| 1.4 海马与学习记忆 |
| 1.5 树突棘和学习记忆 |
| 1.5.1 树突棘与树突 |
| 1.5.2 树突棘与突触 |
| 1.5.3 树突棘与学习记忆 |
| 1.5.4 树突棘的调节机制 |
| 1.6 课题研究的背景、意义和主要内容 |
| 1.6.1 课题研究的背景、意义 |
| 1.6.2 课题研究的主要内容 |
| 第二章 铅镉单独暴露和联合暴露对PC12细胞存活率和突起生长的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 细胞存活率检测 |
| 2.2.3 细胞突起检测 |
| 2.3 数据分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 铅和镉单独暴露对PC12细胞存活率的影响 |
| 2.4.2 铅和镉联合暴露对PC12细胞存活率的影响 |
| 2.4.3 铅和镉单独暴露对PC12细胞突起生长的影响 |
| 2.4.4 铅和镉联合暴露对PC12细胞突起生长的影响 |
| 2.5 讨论与小结 |
| 2.5.1 讨论 |
| 2.5.2 小结 |
| 第三章 铅和镉联合暴露对SD大鼠学习记忆和海马区树突棘密度的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂和药品 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 Morris水迷宫实验 |
| 3.2.3 Y迷宫实验 |
| 3.2.4 高尔基染色实验（Golgi -COX） |
| 3.3 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 铅镉联合暴露对SD大鼠学习记忆的影响 |
| 3.4.2 铅镉联合暴露对SD大鼠海马区树突棘密度的影响 |
| 3.5 讨论与小结 |
| 3.5.1 讨论 |
| 3.5.2 小结 |
| 第四章 铅镉联合暴露对HDAC2表达的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 主要仪器 |
| 4.1.2 主要试剂和药品 |
| 4.1.3 主要抗体 |
| 4.1.4 相关引物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 PC12细胞复苏和培养 |
| 4.2.2 蛋白样品的制备 |
| 4.2.3 BCA法测蛋白浓度 |
| 4.2.4 蛋白质免疫印迹法（Western Blot） |
| 4.2.5 细胞中总RNA提取 |
| 4.2.6 反转录 |
| 4.2.7 聚合酶链式反应 |
| 4.2.8 琼脂糖凝胶电泳 |
| 4.2.9 荧光定量聚合酶链式反应 |
| 4.3 数据分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 铅镉联合暴露对PC12细胞中HDAC2表达的影响 |
| 4.4.2 铅镉联合暴露对海马组织中HDAC2表达的影响 |
| 4.5 讨论与小结 |
| 4.5.1 讨论 |
| 4.5.2 小结 |
| 第五章 HDAC2在铅镉联合暴露导致神经毒性中的调节作用 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 主要仪器 |
| 5.1.2 主要试剂和药品 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 PC12细胞复苏和培养 |
| 5.2.2 大肠杆菌的培养 |
| 5.2.3 质粒提取方法 |
| 5.2.4 Lipofectamine 3000脂质体转染实验 |
| 5.2.5 细胞突起检测 |
| 5.3 数据处理 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 TSA处理对铅镉联合暴露的细胞突起生长的影响 |
| 5.4.2 shHDAC2处理对铅镉联合暴露的细胞突起生长的影响 |
| 5.5 讨论和小结 |
| 5.5.1 讨论 |
| 5.5.2 小结 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 概述 |
| 6.2 主要结论 |
| 6.3 创新点 |
| 6.4 展望 |
| 参考文献 |
| 硕士期间的学术活动及研究成果 |
（6）L—苏糖酸镁对铅致大鼠学习和记忆功能损伤的修复作用及机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 食品中的镁及其对动物的生理功能 |
| 1.1.1 食品中的镁及吸收 |
| 1.1.2 镁的临床学研究 |
| 1.1.3 镁是细胞新陈代谢过程中多种酶系统的活化剂 |
| 1.1.4 镁对蛋白质合成的作用 |
| 1.1.5 镁对动物学习和记忆的影响 |
| 1.1.6 镁影响学习记忆的分子机制 |
| 1.2 食品安全与铅污染 |
| 1.2.1 食品安全与环境中的铅 |
| 1.2.2 食品中铅的来源 |
| 1.2.3 铅在人体中的代谢及危害 |
| 1.3 铅的神经毒理作用及其机制 |
| 1.3.1 儿童血铅水平与认知能力的关系 |
| 1.3.2 铅暴露对动物学习和记忆的影响 |
| 1.3.3 铅影响学习记忆的分子机制 |
| 1.3.4 铅对血脑屏障的影响 |
| 1.3.5 铅的表观遗传学效应 |
| 1.3.6 铅中毒治疗的研究 |
| 1.4 海马的结构、功能与学习记忆 |
| 1.4.1 海马的结构 |
| 1.4.2 海马的纤维联系 |
| 1.4.3 海马与学习记忆 |
| 1.4.4 海马突触可塑性与学习记忆 |
| 1.5 树突棘与学习和记忆 |
| 1.5.1 树突棘的结构及可塑性 |
| 1.5.2 树突棘可塑性的调节 |
| 1.6 课题研究的背景和意义 |
| 第二章 大鼠慢性铅中毒模型的建立 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂和药品 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 血液铅含量测定 |
| 2.1.4 海马组织铅含量测定 |
| 2.1.5 Y迷宫实验 |
| 2.2 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 铅对大鼠体重的影响 |
| 2.3.2 血铅浓度 |
| 2.3.3 海马铅浓度 |
| 2.3.4 铅暴露对大鼠空间识别记忆的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 MgT对Pb暴露大鼠学习记忆影响的研究 |
| 3.1 材材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要药品 |
| 3.1.3 Morris水迷宫实验 |
| 3.1.4 海马组织铅含量测定 |
| 3.1.5 组织收集 |
| 3.1.6 Golgi-cox实验 |
| 3.1.7 Western blot实验 |
| 3.1.8 荧光定量PCR反应 |
| 3.2 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 MgT修复了铅暴露大鼠空间记忆的损伤 |
| 3.3.2 海马铅的浓度 |
| 3.3.3 MgT增加了铅暴露大鼠海马DG区树突棘密度 |
| 3.3.4 MgT增加了铅暴露大鼠海马CA1区树突棘密度 |
| 3.3.5 MgT增加了铅暴露大鼠海马树突分支的数量 |
| 3.3.6 MgT对铅暴露大鼠海马NMDA受体亚单位蛋白表达的影响 |
| 3.3.7 MgT对铅暴露大鼠海马AMPA受体亚单位蛋白表达的影响 |
| 3.3.8 MgT对铅暴露大鼠海马PSD-95蛋白表达的影响 |
| 3.3.9 MgT对铅暴露大鼠海马NR2A和GluR1 mRNA的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 MgT修复Pb损伤学习记忆的可能机理研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验仪器及药品 |
| 4.1.2 PC12细胞培养及处理 |
| 4.1.3 海马神经元培养及处理 |
| 4.1.4 荧光定量PCR |
| 4.1.5 数据统计与分析 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 MgT和Mg对铅暴露PC12细胞突起生长的影响 |
| 4.2.2 MgT对铅暴露PC12细胞相关基因表达的影响 |
| 4.2.3 Mg~(2+)对铅暴露原代海马神经元树突棘的影响 |
| 4.2.4 Mg~(2+)对铅暴露原代海马神经元NMDAR表达的影响 |
| 4.2.5 Mg~(2+)对铅暴露原代海马神经元AMPAR表达的影响 |
| 4.2.6 Mg~(2+)对铅暴露原代海马神经元PSD95表达的影响 |
| 4.2.7 Mg~(2+)对海马神经元EZH2表达的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 MgT和铅对NR1作用的表观遗传学研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验仪器及药品 |
| 5.1.2 实验细胞及培养 |
| 5.1.3 实验动物及处理 |
| 5.1.4 组织收集 |
| 5.1.5 大鼠脑组织中铅含量测定(同第二章) |
| 5.1.6 荧光定量PCR |
| 5.1.7 RT-PCR检测 |
| 5.1.8 Western blot |
| 5.1.9 数据统计与分析 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 铅对PC12细胞中NR1的转录调节 |
| 5.2.2 铅对发育期大鼠海马中NR1的转录调节 |
| 5.2.3 铅对成年大鼠海马NR1的转录调节 |
| 5.2.4 MgT对铅暴露大鼠海马NR1表达的修复作用 |
| 5.2.5 海马中铅浓度 |
| 5.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的学术活动及成果情况 |
（7）GLUT4在铅损伤学习记忆功能中的作用及机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 孕期低水平铅暴露对大鼠海马突触可塑性的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 孕期低水平铅暴露对大鼠大脑葡萄糖代谢的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 铅暴露后大鼠海马葡萄糖代谢异常对突触可塑性的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 GLUT4在铅暴露损伤学习记忆中的作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（8）食品源铅暴露对发育期海马神经元发育的影响及机理研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 铅暴露的主要来源 |
| 1.1.1 食物 |
| 1.1.2 大气 |
| 1.1.3 水 |
| 1.1.4 家居装饰材料及生活用品 |
| 1.1.5 学习玩具用品 |
| 1.2 微量铅的检测方法 |
| 1.2.1 双硫腙比色法 |
| 1.2.2 极谱法 |
| 1.2.3 氢化物-原子荧光光谱法 |
| 1.2.4 X射线荧光光谱法 |
| 1.2.5 火焰原子吸收光度法（FAAS） |
| 1.2.6 石墨炉原子吸收光度法（GFASS） |
| 1.2.7 电感耦合等离子体法（ICP-MS） |
| 1.2.8 溶出伏安法 |
| 1.2.9 微分电位溶出法 |
| 1.3 铅暴露对神经系统的影响 |
| 1.3.1 大脑神经元发育过程及意义 |
| 1.3.2 调控神经元发育的分子机制 |
| 1.4 Wnt信号通路以及LncRNA参与的表观遗传调控 |
| 1.4.1 Wnt信号通路 |
| 1.4.2 LncRNA参与的表观遗传调控 |
| 1.5 神经元发育与神经退行性疾病 |
| 1.6 课题研究的背景，意义以及主要内容 |
| 1.6.1 课题研究的背景及意义 |
| 1.6.2 课题研究的主要内容 |
| 1.6.3 实验技术路线图 |
| 第二章 食品源性铅暴露通过Wnt信号通路对发育期大鼠海马区新生神经元增殖和分化的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要药品与试剂 |
| 2.1.3 主要抗体 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.1.5 溶液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 脑部组织铅含量的测定 |
| 2.2.2 免疫组织化学实验 |
| 2.2.3 Western blot定量检测组织中蛋白含量实验 |
| 2.2.4 海马组织中基因水平的检测 |
| 2.3 数据处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 大鼠大脑海马组织铅含量测定 |
| 2.4.2 发育期铅暴露对大脑海马区神经元发育过程产生的影响 |
| 2.4.3 发育期铅暴露对经典Wnt信号通路关键分子蛋白表达量的影响 |
| 2.4.4 发育期铅暴露对经典Wnt信号通路关键分子mRNA水平的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 食品源性铅暴露对组蛋白H3K4甲基化修饰的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验器材 |
| 3.1.2 主要药品与试剂 |
| 3.1.3 主要抗体 |
| 3.1.4 培养基与溶液配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 原代海马神经元的培养 |
| 3.2.2 Western blot实验定量检测原代海马神经元细胞中H3K4me2，H3K4me3，MLL1蛋白含量 |
| 3.2.3 原代海马神经元中各基因水平的检测 |
| 3.3 数据处理 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 铅暴露对原代海马神经元中H3K4me2，H3K4me3，MLL1含量的影响 |
| 3.4.2 铅暴露对原代海马神经元中组蛋白甲基化酶Kmt2b及其去甲基化酶Kdm1a，Kdm5a的mRNA水平的影响 |
| 3.4.3 铅暴露对原代海马神经元中H3K4me3分布的影响 |
| 3.4.4 铅暴露对原代海马神经元中LncRNA含量的影响 |
| 3.5 讨论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 |
（9）食源性铅暴露对发育期原代海马神经元元突触传递的影响及可能机理（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 食品铅污染对人类安全的威胁 |
| 1.1.1 食品铅污染的现状 |
| 1.1.2 食品铅污染的来源 |
| 1.1.3 铅的吸收、转运以及代谢 |
| 1.1.4 含铅食品对人体的危害 |
| 1.2 铅对大脑影响及其分子机制 |
| 1.2.1 海马、突触以及学习记忆 |
| 1.2.2 铅对谷氨酸能神经递质释放的影响 |
| 1.2.3 铅暴露影响大脑发育的表观遗传学机制 |
| 1.2.4 兴奋性突触和抑制性突触平衡 |
| 1.2.5 突触前膜囊泡的释放 |
| 1.2.6 神经递质的释放与蛋白质磷酸化之间的关系 |
| 1.3 课题研究的背景、意义和主要内容 |
| 1.3.1 课题研究的背景和意义 |
| 1.3.2 课题研究的主要内容 |
| 1.3.3 技术路线路 |
| 第二章 慢性铅暴露对SD大鼠原代海马神经元突触传递的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂和药品 |
| 2.1.3 实验动物模型的建立 |
| 2.1.4 原代海马神经元的培养 |
| 2.1.5 膜片钳记录 |
| 2.1.6 Western Blot实验 |
| 2.1.7 海马区组织基因水平的检测 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 慢性铅暴露对原代海马CA1区神经元mEPSC的影响 |
| 2.2.2 慢性铅暴露对原代海马CA1区神经元mIPSC的影响 |
| 2.2.3 慢性铅暴露对大鼠海马突触前膜囊泡分布的影响 |
| 2.2.4 慢性铅暴露对突触前膜SNARE复合体单体的mRNA表达量的影响 |
| 2.2.5 慢性铅暴露对突触前膜SNARE复合体表达量的影响 |
| 2.2.6 慢性铅暴露对囊泡释放的能力的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 慢性铅暴露对神经递质释放影响的可能机理 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要仪器 |
| 3.1.2 主要试剂和药品 |
| 3.1.3 主要抗体 |
| 3.1.4 染色质免疫共沉淀 |
| 3.1.5 基因水平的检测 |
| 3.1.6 Western blot蛋白定量分析 |
| 3.1.7 数据分析 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 慢性铅暴露对组蛋白H3K27me3的影响 |
| 3.2.2 慢性铅暴露对H3K27me3下游调控基因的影响 |
| 3.2.3 慢性铅暴露对囊泡分布相关基因的影响 |
| 3.2.4 慢性铅暴露导致了synapsin1第553位色氨酸位点的磷酸化降低 |
| 3.2.5 慢性铅暴露对synapsin1磷酸化位点的上游CDK5的影响 |
| 3.2.6 CDK5可能参与调控了慢性铅暴露导致的神经递质释放的抑制 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 |
（10）典型全氟/多氟磺酸化合物对大鼠长时程增强的影响和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要中英文缩略表 |
| 1 绪论 |
| 1.1 全氟辛烷磺酸(PFOS)概述 |
| 1.1.1 PFOS的理化性质和应用 |
| 1.1.2 PFOS的环境污染现状 |
| 1.1.3 PFOS在野生动物体内的生物累积 |
| 1.1.4 PFOS的毒性效应 |
| 1.1.5 PFOS的发育神经毒性效应 |
| 1.1.6 PFOS的发育神经毒性机制 |
| 1.1.7 PFOS的人群暴露和环境流行病学调查结果 |
| 1.1.8 PFOS替代物的发展 |
| 1.2 学习记忆能力形成的相关机制 |
| 1.2.1 海马的学习记忆功能 |
| 1.2.2 突触可塑性与学习记忆 |
| 1.2.3 AMPA受体与学习记忆 |
| 1.2.4 钙稳态与学习记忆 |
| 1.3 神经退行性疾病与环境污染物暴露的关联 |
| 1.4 本文主要研究思路与内容 |
| 1.4.1 选题依据 |
| 1.4.2 研究目的和内容 |
| 1.4.3 研究意义 |
| 2 PFOS发育期暴露对大鼠LTP及AMPA分布的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.2 实验动物及染毒 |
| 2.1.3 血清及海马组织的收集 |
| 2.1.4 血清中PFOS含量的测定 |
| 2.1.5 旷场试验 |
| 2.1.6 电生理实验 |
| 2.1.7 膜蛋白的提取 |
| 2.1.8 总蛋白的提取 |
| 2.1.9 蛋白浓度测定 |
| 2.1.10 Western blot检测AMPA受体蛋白的分布水平 |
| 2.1.11 荧光定量PCR检测海马中AMPA受体相关基因的表达 |
| 2.1.12 数据统计分析 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.2.1 血清中PFOS的含量 |
| 2.2.2 PFOS暴露对大鼠自发行为的影响 |
| 2.2.3 PFOS发育期暴露对LTP的影响 |
| 2.2.4 PFOS发育期暴露对I/O和PPF的影响 |
| 2.2.5 PFOS发育期暴露对AMPA受体亚基表达的影响 |
| 2.2.6 PFOS发育期暴露对AMPA受体亚基磷酸化的影响 |
| 2.3 本章小结 |
| 3 PFOS暴露干扰大鼠原代海马神经元钙稳态的AMPA调控机制 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂和仪器 |
| 3.1.2 主要实验试剂配制 |
| 3.1.3 原代海马神经元培养和鉴定 |
| 3.1.4 原代海马神经元细胞存活率实验 |
| 3.1.5 原代海马神经元凋亡实验 |
| 3.1.6 原代海马神经元细胞钙成像实验 |
| 3.1.7 荧光定量PCR检测相关基因表达水平 |
| 3.1.8 数据统计分析 |
| 3.2 结果与讨论 |
| 3.2.1 原代海马神经元细胞培养与鉴定 |
| 3.2.2 PFOS对原代海马神经元细胞活性的影响 |
| 3.2.3 PFOS对原代海马神经元细胞凋亡的影响 |
| 3.2.4 原代海马神经元细胞钙成像实验 |
| 3.2.5 PFOS对原代海马神经元AMPA受体相关基因表达的影响 |
| 3.3 本章小结 |
| 4 PFOS发育期暴露对Tau磷酸化和Ap聚集的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂和仪器 |
| 4.1.2 实验动物及染毒 |
| 4.1.3 ELISA检测海马中Aβ1-42和GSK-3β蛋白表达水平 |
| 4.1.4 Western blot检测海马中凋亡相关蛋白表达水平 |
| 4.1.5 荧光定量PCR检测相关基因表达水平 |
| 4.1.6 数据统计分析 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.2.1 PFOS暴露对Tau蛋白和基因表达的影响 |
| 4.2.2 PFOS暴露对Tau磷酸化的影响 |
| 4.2.3 PFOS对Aβ1-42聚集的影响 |
| 4.3 本章小结 |
| 5 PFOS替代物对大鼠在体LTP的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 试剂与仪器 |
| 5.1.3 电生理实验 |
| 5.1.4 数据统计分析 |
| 5.2 结果与讨论 |
| 5.2.1 PFOS及其替代物对基础fEPSP的影响 |
| 5.2.2 PFOS及其替代物对I/O的影响 |
| 5.2.3 PFOS及其替代物对PPF的影响 |
| 5.2.4 PFOS及其替代物对大鼠在体LTP的影响 |
| 5.3 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 主要试剂配制 |
| 作者简介 |
| 攻读博士学位期间科研项目及科研成果 |
| 致谢 |
四、慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响（论文参考文献）
- [1]鸡饲料铅污染调查与硒颉颃铅致鸡脾脏毒性效应的评价[D]. 张加勇. 东北农业大学, 2020(04)
- [2]生命早期铅致SD大鼠学习记忆损伤及白藜芦醇的保护作用[D]. 吴遵桃. 郑州大学, 2020(02)
- [3]hnRNP U介导铅暴露对REST影响机制的研究[D]. 杨美媛. 南昌大学, 2019(01)
- [4]益生菌对铅致学习记忆损伤的修复效应及其机理研究[D]. 肖洁. 合肥工业大学, 2019(01)
- [5]铅镉联合暴露导致的神经毒性及HDAC2在其中的调控作用[D]. 赵静. 合肥工业大学, 2019(01)
- [6]L—苏糖酸镁对铅致大鼠学习和记忆功能损伤的修复作用及机理研究[D]. 娄志义. 合肥工业大学, 2018(01)
- [7]GLUT4在铅损伤学习记忆功能中的作用及机制[D]. 赵再华. 中国人民解放军空军军医大学, 2018(06)
- [8]食品源铅暴露对发育期海马神经元发育的影响及机理研究[D]. 邢栋. 合肥工业大学, 2017(07)
- [9]食源性铅暴露对发育期原代海马神经元元突触传递的影响及可能机理[D]. 何慧明. 合肥工业大学, 2017(07)
- [10]典型全氟/多氟磺酸化合物对大鼠长时程增强的影响和机制研究[D]. 张倩. 大连理工大学, 2016(06)