一、鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定（论文文献综述）
王文彬,伏春燕,阎佩佩,石天虹,李霞,魏祥法,刘瑞亭,董以雷,刘雪兰[1]（2022）在《鸡传染性喉气管炎实验室诊断与序列分析》文中认为从山东省东营市某养鸡企业采集具有呼吸道症状及产蛋障碍的蛋鸡组织共8份,经病史与免疫程序调查、病鸡的临床症状与组织病理变化,初步怀疑是传染性喉气管炎、传染性支气管炎或低致病性禽流感病毒感染。通过病毒血凝试验排除了低致病性禽流感病毒;通过PCR方法确定为传染性喉气管炎病毒感染;最终对扩增的病毒gD基因与TK基因进行测序并与BLAST比对分析,发现该病毒与疫苗毒株同源性高达99%。以上结果表明,传染性支气管炎疾病的免疫接种仍然重要。
张先东,蒋郁明,费奕强,薛晓阳,侯月娥[2]（2022）在《鸡传染性支气管炎诊断技术研究进展》文中进行了进一步梳理鸡传染性支气管炎（avian infectious bronchitis,IB）具有极强的传染性,为我国二类动物疫病。IB的准确诊断对其防控具有极其重要作用。本文综述了病毒分离、血清学诊断、免疫组织化学技术、分子生物学诊断、蛋白芯片技术等主要的IB诊断方法。病毒分离是诊断IB的重要手段,但其耗时长且对操作有一定要求,因此近年来将其与基因测序分析相结合来进行IB诊断及基因型鉴别;在常规血清学方法中,酶联免疫吸附试验（ELISA）和血凝抑制试验（HI）是推荐用于鸡群大规模筛查及免疫效果评价的方法,病毒中和试验（VNT）具有高度特异性,常被应用于毒株的变异鉴定,但是耗时且缺乏标准化,建议选用更成熟的ELISA方法 ;随着分子生物学技术的发展,聚合酶链式反应（PCR）因具有更高的准确性,且能实现实时定量分析,已被广泛应用于实验室检测;重组聚合酶等温扩增技术（RPA）特异性好,对试验条件要求不高,适用于养殖场的大规模IB筛查。另外,蛋白芯片技术、免疫层析试纸条、鸡声信号分析装置也为IB诊断提供了全新的思路。
杨明珠,陈晓春,宋佳诚,侯亚欣,李俊平[3]（2022）在《重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展》文中认为重组病毒活载体疫苗是通过基因工程方法构建的活载体疫苗,规避了传统疫苗的一些缺点,具有极大的优势和应用前景。目前被广泛用作重组病毒载体的动物疱疹病毒有火鸡疱疹病毒（Herpesvirus of turkey, HVT）、伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）、鸭瘟病毒（Duck enteritis virus, DEV）、鸡传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus, ILTV）等。对疱疹病毒基因组序列进行分析显示,其基因组大,复制非必需区域多,容纳外源基因的能力强。同时疱疹病毒具有宿主范围广泛、免疫持续期长、安全性较好及相关基因操作技术成熟等优点。笔者总结了当前构建重组动物疱疹病毒的主要方法,包括传统同源重组技术、细菌人工染色体（BAC）技术、Fosmid文库及CRISPR/Cas9基因编辑技术,简述了各个方法的基本原理及技术特点,比较了各个方法的优缺点,并分析了各个方法的最适运用条件,从而更准确地为研究工作提供理论及技术参考;对外源基因的表达方式进行分析,论证了不同启动子对外源基因表达的调控作用不同,同时对不同疱疹病毒的常用插入位点进行了研究成果的列举总结,并对当前重组病毒HVT、PRV、DEV及ILTV活载体疫苗的研究进展进行总结,对相关生物制品的注册应用信息进行了归纳,介绍了高选择率外源基因及高成功率插入位点,从而为相关生物制品的研制提供理论参考。
盛晓丹,郭卉,秦春芝,刘霞,黄迪海,徐怀英,秦卓明[4]（2021）在《一例由疫苗接种引起的商品肉鸡多病原混合感染》文中进行了进一步梳理为确诊山东某商品肉鸡群发病的原因,采集病死鸡的喉头、气管等组织,分别进行核酸和病原分离鉴定。结果显示,传染性喉气管炎病毒（ILTV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和禽腺病毒4型（FAd V-4）等特异性PCR均呈阳性,而新城疫病毒（NDV）、低致病性禽流感H9N2等均为阴性。测序结果表明,ILTV分离株（PY）与疫苗株（K317）ICP4基因的核苷酸同源性为100%;而IBV分离株（PY）与疫苗株H120、4/91 N基因的同源性分别为86.4%、86.6%,显示出较大的差异。CAM途径接种鸡胚分离出腺病毒,且对SPF鸡胚具有一定的致病性。同时,从病鸡肝脏中分离到大肠杆菌,药敏试验证实对多粘菌素B、健牧茶多酚、阿莫西林棒酸、头孢噻肟敏感,采用敏感药物治疗后取得一定的临床治疗效果。综上所述,该病是一起由疫苗接种应激而引起的多病原混合感染。
张龙,林裕胜,江锦秀,张靖鹏,黄潇航,胡奇林[5]（2021）在《一例鸡细小病毒、鸡传染性贫血病毒及鸡传染性支气管炎病毒共感染病例的检测》文中指出【目的】对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊。【方法】通过对鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus, IBV）、腺病毒（Fowl adenovirus, FadV）、鸡细小病毒（Chicken parvovirus,ChPV）、新城疫病毒（Newcastlediseasevirus, NDV）、鸡传染性贫血病毒（Chickeninfectiousanemiavirus,CIAV）、传染性法氏囊病毒（InfectiousbursalDiseasevirus, IBDV）、喉气管炎病毒（Laryngotracheitisvirus,LTV）、禽肾炎病毒（Avian nephritis virus,ANV）等病原进行PCR检测,并对扩增片段进行克隆测序,利用生物信息学软件对测序结果进行分析。【结果】PCR检测结果及测序结果显示:鸡细小病毒ChPV、鸡传染性支气管炎病毒IBV、鸡传染性贫血病病毒CIAV为阳性,其余病原检测结果均为阴性。同源性分析结果显示分离株与ChPV的同源性为92.17%～100%,与IBV的同源性为76.9%～84.3%,与CIAV的同源性为91.19%～92.14%;遗传进化树分析结果显示分离到的IBV毒株及CIAV毒株均独处于一个单独的分支,分离到的ChPV毒株与广西参考株亲缘关系较近。【结论】从南平市某鸡场检测到ChPV、IBV、CIAV等3种病原的共感染病例,分离到的IBV毒株的S1基因及CIAV毒株的VP1基因可能已经发生变异。
杨晶晶,金红岩[6]（2021）在《Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立及应用》文中指出为了建立一种特异、敏感的Ⅰ群禽腺病毒（FAdV-Ⅰ）检测方法,根据GenBank中FAdV-Ⅰ不同血清型Hexon基因序列,选择保守区域设计内、外2对特异性检测引物,通过反应条件的优化,建立了FAdV-Ⅰ套式PCR检测方法。结果:该方法能够特异性扩增FADV-Ⅰ,而检测减蛋综合征病毒（EDSV）、鸡痘病毒（APV）、马立克病病毒（MDV）、鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）、鸭瘟病毒（DEV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）、新城疫病毒（NDV）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV）均为阴性;检测下限为102.0 TCID50,灵敏度是普通PCR方法的100倍;对3个不同浓度FAdV-Ⅰ的批内重复性检测和批间重复性检测的结果完全一致;相对于病毒分离鉴定方法的符合率为90.91%;用该方法检测91份临床病料样品,共检测出阳性样品58份,其中血清4型、8a型、8b型、11型阳性样品分别为38份、8份、7份、5份。结果说明本试验建立的FAdV-Ⅰ套式PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性、准确性,能够用于FAdV-Ⅰ的临床检测。
唐建萍[7]（2021）在《鸡传染性喉气管炎病防治》文中指出传染性喉气管炎与传染性支气管炎大致相同,都属于典型的呼吸系统疾病,临床上以呼吸困难、咳出带血的分泌物为主要特征。年龄越小的鸡受到病原侵染后,表现的症状越严重,要求管理人员从疾病的流行角度入手,掌握该类疾病在养殖场的实际发生动态及对不同年龄鸡群所造成的危害,做到及时发现及时处理,短时间内控制病情,避免损失进一步加大。该文主要论述鸡传染性喉气管炎的发病和诊断经过。
吴咪[8]（2021）在《鸡传染性喉气管炎病毒流行株生物学特征及影响其复制相关宿主蛋白作用机制的研究》文中研究表明鸡传染性喉气管炎病毒（Infectious Laryngotracheitis Virus,ILTV）属疱疹病毒科α疱疹病毒亚科,可引起鸡的传染性喉气管炎。早在1925年美国首次报道鸡传染性喉气管炎以来,在上世纪六十年代我国也发现了该病,相继在我国各省均有发生,该病是目前危害养禽业的重要疫病之一。国内外主要使用弱毒疫苗预防该病,但因疫苗株毒力普遍偏强,因此存在潜伏感染的危害以及无法鉴别疫苗株与野毒株的缺点。目前对ILTV基础研究较少,制约了鸡传染性喉气管炎防控技术的发展。本研究针对影响ILTV复制的关键宿主蛋白为切入点,首次鉴定到信号肽酶复合物亚基3（SPCS3）是影响ILTV在细胞中复制的关键宿主蛋白之一,发现SPCS3蛋白可以切割ILTV的gL蛋白。本研究内容及主要试验结果如下:1.分别对三株ILTV:SH2016、SH2017、GD2018的生长特性及致病性进行研究。三株ILTV均可在鸡肝癌细胞（LMH）增殖,感染ILTV后120h,SH2016滴度可达到103.08TCID50,SH2017和GD2018分别可达到103.42TCID50和105.08TCID50,其中GD2018较其它两株更适应LMH细胞生长;经绒毛尿囊膜方式接种9～11日龄SPF鸡胚,接种后168h,收取尿囊膜,SH2016滴度可达到103.25TCID50,SH2017和GD2018分别可达到102.67TCID50和104.33TCID50,GD2018更适应在尿囊膜上生长;收取尿囊液,SH2016滴度可达102.67TCID50,SH2017和GD2018分别可达到100.33TCID50和100.5TCID50,SH2017和GD2018不生长,SH2016可以在尿囊腔中复制。以尿囊腔方式接种9～11日龄SPF鸡胚,接种后168h,收取尿囊膜,SH2016滴度可达103.25TCID50,SH2017和GD2018分别可达到102.58TCID50和101.83TCID50;收取尿囊液,SH2016滴度可达104.58TCID50,SH2017和GD2018分别可达到101.25TCID50和100.67TCID50,即SH2017和GD2018几乎不生长,而SH2016更适应在尿囊腔中增殖。此外,分别用三株ILTV感染8周龄SPF鸡,SH2016临床症状最明显,是唯一引起鸡死亡的毒株,且三株ILTV只能在鸡喉气管组织中复制,其他脏器并未检测到;GD2018在攻毒后第14d,抗体效价最高,SH2016在攻毒后第21d抗体效价最高。2.分别对三株ILTV基因组进行高通量测序,拼接出全基因组序列,根据基因组结构,预测各蛋白序列。三株ILTV基因组长度分别为:SH2016为153.805kb、SH2017为153.024kb、GD2018为153.855kb;GC含量分别为:SH2016为48.16%、SH2017为48.06%、GD2018为48.10%。三株ILTV基因组结构均由UL、US、IRs及TRs四个区域组成。对病毒基因组核酸序列及10个编码蛋白氨基酸序列进行系统进化分析,基因组DNA进化树上,SH2016与俄罗斯分离株Rus/Ck/Tatarstan/1009/1643株亲缘关系最近,而与SH2017、GD2018关系较远;SH2017与美国分离株LT Blen亲缘关系最近;GD2018与俄罗斯分离株Rus/Ck/Penza/2013/2701及意大利分离株4784/80亲缘关系较近。g C及gL蛋白进化树中,三株ILTV在同一分支,该蛋白具有较高的保守性;gD、gE及gG蛋白进化树中,SH2016与GD2018在同一分支,同源性较高,而与SH2017同源性较低;gB、gH、gM、gI及TK蛋白进化树中,SH2017与GD2018同源性较高,而与SH2016同源性较低。对三株ILTV病毒10个蛋白氨基酸突变位点进行比较,发现除三株ILTV的gC蛋白序列完全一致外,其它9个病毒蛋白都有不同程度的氨基酸位点差异,这些蛋白差异疑与三株ILTV复制能力及致病性的差异相关。3.构建鸡全基因组CRISPR/Cas9敲除文库,对LMH细胞全基因组范围进行逐一扫描式敲除,构建基因敲除细胞文库,然后用ILTV感染细胞文库,对存活的细胞进行高通量测序,确定存活细胞中敲除的宿主基因。第一次测序结果发现3个非编码RNA（ncRNA）基因和SPCS3（信号肽酶复合物亚基-3）基因可能与病毒复制相关,随后的三次重复实验结果均显示,SPCS3基因是存活细胞中敲除率最高的基因,因此推测宿主蛋白SPCS3可能是影响ILTV复制的关键蛋白之一。4.比较ILTV在LMH细胞和SPCS3蛋白截短的LMH细胞系（分别命名为1-6和1-14）中的生长,在1-6细胞系中,ILTV的病毒滴度降低102.625倍,在1-14细胞系中,ILTV的病毒滴度降低103.75倍,表明SPCS3蛋白截短确实可以对ILTV的复制起到抑制作用。通过在线生物软件对ILTV中具有信号肽及多个跨膜结构的病毒蛋白进行预测,成功构建9个含有单一信号肽的病毒蛋白及4个含有多个跨膜结构的病毒蛋白真核表达质粒,转染细胞后,其中8个病毒蛋白成功表达,比较各病毒蛋白在LMH细胞及1-14细胞系中表达差异,结果显示,ILTV的衣壳糖蛋白L（gL）蛋白在两种细胞中的蛋白分子量差异明显,表明SPCS3蛋白截短影响了其切割gL蛋白的功能,这可能是影响ILTV复制的主要原因。5.为了解SPCS3蛋白截短对其它α疱疹病毒的影响,分别将鸭肠炎病毒（DEV）和人单纯疱疹病毒1型（HSV-1）两种α疱疹病毒感染LMH细胞和1-14细胞系,比较其生长差异。结果显示,与在LMH细胞上相比,DEV在1-14细胞系中病毒滴度降低102倍,而HSV-1在两种细胞上的生长无差异。进一步构建DEV和HSV-1两种病毒的gL蛋白真核表达质粒,分别转染LMH细胞和1-14细胞系后,两种病毒的gL蛋白在LMH细胞与1-14细胞系中,分子量大小无明显变化,但是DEV的gL蛋白在1-14细胞系中表达量明显低于LMH中的表达量,而HSV-1的gL蛋白在1-14细胞系种表达量没有明显变化,进一步表明截短的SPCS3可能影响gL蛋白的稳定性,从而影响DEV复制。本研究丰富了我国ILTV毒株全基因组序列生物学信息,明确了三株ILTV流行株的生物学特性。通过CRISPR/Cas9高通量筛选技术,筛选到一种与禽疱疹病毒复制相关的宿主蛋白分子,完善了ILTV复制中发挥关键作用的宿主蛋白作用机制,为ILTV致病分子机制研究尝试了新的思路。
黄东明[9]（2021）在《表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸭肠炎病毒的构建及免疫效力测定》文中提出鸡传染性喉气管炎是由喉气管炎病毒引起的鸡的一种上呼吸道传染病,该病毒属于α-疱疹病毒科,感染后病鸡主要表现为结膜炎、咳血、呼吸困难等症状,是禽养殖业中重要的疫病之一。目前该病的防治主要是通过接种弱毒疫苗,能够产生较好的免疫保护,然而,在临床使用时发现,该弱毒疫苗存在毒力返强现象,造成鸡群周期性感染,造成较大经济损失。随着生物技术的发展,重组病毒活疫苗逐渐成为研究热点。目前,美国已经有两种不同的重组病毒疫苗进入实际临床应用,分别是表达ILTV gB/UL32双基因的鸡痘病毒疫苗,以及表达ILTV g I/g D的HVT重组疫苗,免疫后均能产生特异性保护。在国内,Tong等研发一种表达ILTV gB基因的重组鸡痘病毒,免疫后也能抵抗ILTV的攻击。尽管如此,由于鸡痘病毒在实际临床应用时易受到母源抗体的影响,造成免疫失败,不能抵御病毒入侵。因此,急需研发一种安全、可靠的疫苗。鸭肠炎病毒也是α-疱疹病毒科的成员,其基因组庞大,并含有多个复制非必需基因以及基因间隔区,能够表达多个外源基因,同时该病毒可在鸡成纤维细胞上培养,并释放至上清中,制备简单,容易保存,是一个良好的病毒载体。目前,研究者已经构建了表达多种外源基因的重组鸭肠炎病毒,免疫后均可产生特异性的保护。本研究基于CRISPR/Cas9基因编辑和同源重组技术,获得一株表达鸡传染性喉气管病毒gB基因的重组鸭肠炎病毒,Western blot结果表明gB蛋白正确表达,重组病毒的生长与亲本毒相比无显着差异,连续传20代后外源基因仍然稳定存在。将其免疫SPF鸡,同时设置阴性对照组,第14天时在喉气管内攻毒,结果显示,重组病毒发病率为30%,死亡率为20%,临床指数为0.8,保护指数为77.8%,大部分鸡在攻毒后表现温和,无明显病症,只有两只鸡出现急性死亡,保护效率为80%;而对照组攻毒后,发病率为100%,临床指数为3.7,死亡率为90%。上述实验表明,该重组病毒可作为一株良好的疫苗候选株。本实验成功构建了表达鸡传染性喉气管病毒gB蛋白的重组鸭肠炎病毒,为鸡传染性喉气管炎疫苗研制提供了新思路和技术储备。
盛洁[10]（2021）在《表达IBV纤突蛋白的ILT重组病毒构建及其免疫效果评价》文中研究表明鸡传染性支气管炎（Infectious bronchitis,IB）是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）引起的一种急性上呼吸道传染病,对全球家禽养殖业危害严重,是目前养禽业面临的最重要疫病之一。有必要基于IBV流行病学研究结果,针对目前我国主要流行的毒株类型研制新型疫苗。纤突（Spike,S）蛋白是IBV病毒粒子表面重要的糖蛋白,在病毒入侵以及受体结合等方面发挥重要作用。纤突蛋白在成熟过程中进一步裂解为S1亚基和S2亚基,其中S1亚基含有病毒主要的中和表位,是IBV重要的免疫原基因,往往将其作为IBV型特异性疫苗设计的主要靶点。鸡传染性喉气管炎（Infectious laryngotracheitis,ILT）是由鸡传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus,ILTV）引起的影响家禽生产的另一大病毒性呼吸道传染病。该病往往呈地方性散发,但近年来国内鸡群频繁暴发ILT,造成较大的经济损失,弱毒疫苗作为防控该病的有效手段,引起养禽业界的重视。ILTV和IBV作为两种重要呼吸道病毒,由于两者对宿主的感染部位和免疫机理相似,研制联合疫苗成为同时防控这两种疫病的迫切需求,ILTV具备作为疫苗载体表达其他病原保护性抗原的潜质。鉴于此,基于ILT弱毒株来构建表达IB重要免疫原基因的重组ILT基因工程载体联合疫苗便成为同时防控IB和ILT两种疫病的最优选择。本研究以ILTV弱毒株CK/CH/LHLJ/120305株为亲本毒株,将其US9基因缺失并插入增强型绿色荧光蛋白表达盒（EGFP）后获得的ILTV突变体ILTV-ΔUS9-G株作为中间病毒,采用基因同源重组技术,将ILTV-ΔUS9-G株病毒的EGFP基因分别替换为IBV GI-19（QX）型强毒株CK/CH/LDL/091022株的S基因和S1基因,获得表达IBV S蛋白的重组病毒ILTV-ΔUS9-S株及表达IBV S1蛋白的重组病毒ILTV-ΔUS9-S1株。两株重组病毒插入的外源基因S基因和S1基因不影响其体外复制能力,且ILTV-ΔUS9-S1株较亲本弱毒CK/CH/LHLJ/120305株复制滴度更高。两株重组病毒在LMH（Leghorn male hepatocellular cell,鸡肝癌细胞系）上连续传代15代,并以本研究制备的抗IBV S1蛋白的单克隆抗体对重组病毒进行间接免疫荧光检测,结果显示,IBV S蛋白和S1蛋白分别在两株重组病毒中能稳定表达,但表达量较低。两株重组病毒接种SPF鸡后,无不良临床反应,说明重组病毒对鸡是安全的。为评价两株重组病毒对ILTV强毒的免疫保护效果,采用间接ELISA对免疫鸡的血清抗体进行检测,结果显示,免疫后7 d两株重组病毒即能诱导鸡只产生高水平的血清抗体,其中ILTV-ΔUS9-S1株诱导产生的抗体水平更高。从ILTV WG株攻毒后的临床表现来看,两株重组病毒免疫组鸡只不表现呼吸道症状,喉头、气管中的病毒载量远低于对照组鸡只,且ILTV-ΔUS9-S株免疫组鸡只的咽拭子攻毒后8 d不再排毒,ILTV-ΔUS9-S1株免疫组攻毒后12 d不再排毒,显示两株重组病毒均能提供针对ILTV强毒株的完全保护。对于重组病毒针对IBV CK/CH/LDL/091022强毒株的免疫保护效果,s Ig A及IFN-γELISpot检测结果显示,两株重组病毒仅能诱导部分鸡只产生有限的特异性粘膜免疫及细胞免疫反应,对免疫后鸡只进行血清抗体检测,显示免疫后两个免疫组仅有部分鸡血清抗体转阳。两株重组病毒免疫组与对照组在IBV强毒攻毒后5 d时气管和肾脏内均可检测到病毒,各组病毒载量无显着差异,但攻毒后8 d重组病毒ILTV-ΔUS9-S株及ILTV-ΔUS9-S1株免疫组的咽拭子排毒率分别为50%,60%;攻毒后12 d分别为10%,0;相对于对照组在攻毒后8 d和12 d排毒率为80%和20%而言,两株重组病毒免疫后能够在一定程度上加速免疫鸡呼吸道内病毒的清除,但总体而言所激发的免疫保护作用较弱。综上所述,本研究成功构建了分别表达GI-19（QX）型IBV S蛋白和S1蛋白基因的重组ILTV,ILTV-ΔUS9-S株及ILTV-ΔUS9-S1株,两株重组病毒都能对ILTV强毒株攻击提供完全保护,也能够激发针对IBV GI-19（QX）型强毒株S1蛋白的免疫反应,但并不能提供针对IBV强毒的完全免疫保护作用,有待进一步改进和优化外源免疫原基因的表达水平,提升ILTV作为重组基因工程载体的潜在价值。
二、鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定（论文提纲范文）
（1）鸡传染性喉气管炎实验室诊断与序列分析（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 病料与试验动物 |
| 1.2 主要试剂和引物 |
| 1.3 病料处理 |
| 1.4 病毒血凝试验 |
| 1.5 病料基因组提取与PCR鉴定 |
| 1.6 PCR产物回收与序列分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 发病情况与临床症状 |
| 2.2 剖检观察 |
| 2.3 病毒血凝试验 |
| 2.4 分子鉴定 |
| 3 讨论与结论 |
（2）鸡传染性支气管炎诊断技术研究进展（论文提纲范文）
| 1 流行病学 |
| 2 临床症状及剖检特征 |
| 3 诊断方法 |
| 3.1 病毒分离鉴定 |
| 3.2 血清学诊断 |
| 3.2.1 酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) |
| 3.2.2 血凝抑制试验（heamagglutination inhibition test,HI) |
| 3.2.3 病毒中和试验（virus neutralization test,VNT) |
| 3.3 免疫组织化学技术（immunohistochemistry,IHC) |
| 3.4 分子生物学诊断 |
| 3.4.1 反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR) |
| 3.4.2 多重PCR(multiplex polymerase chain reaction) |
| 3.4.3 环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification,LAMP) |
| 3.4.4实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR） |
| 3.4.5重组聚合酶等温扩增技术（recombinase polymerase amplification,RPA） |
| 3.5 蛋白芯片技术 |
| 3.6 其他诊断技术 |
| 4 结语 |
（3）重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展（论文提纲范文）
| 1 重组疱疹病毒的构建方法 |
| 1.1 传统同源重组法 |
| 1.2 基于病毒细菌人工染色体(BAC)平台的构建方法 |
| 1.3 基于Fosmid文库的构建方法 |
| 1.4 CRISPR/Cas9系统 |
| 2 外源基因的表达方式及插入位点的筛选 |
| 3 重组疱疹病毒活载体疫苗研究进展 |
| 3.1 以HVT为载体构建的重组病毒活疫苗 |
| 3.2 以PRV为载体构建的重组病毒活疫苗 |
| 3.3 以DEV为载体构建的重组病毒活疫苗 |
| 3.4 以ILTV为载体构建的重组病毒活疫苗 |
| 4 重组活载体疫苗的应用 |
| 5 小结和展望 |
（4）一例由疫苗接种引起的商品肉鸡多病原混合感染（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂、材料和仪器 |
| 1.2 引物的设计与合成 |
| 1.3 病料处理 |
| 1.4 病毒核酸提取 |
| 1.5 IBV、AIV H9、NDV反转录 |
| 1.6 病毒核酸PCR鉴定 |
| 1.7 病毒分离 |
| 1.8 细菌分离与药敏试验 |
| 1.8.1 细菌分离 |
| 1.8.2 16S r DNA分子鉴定 |
| 1.8.3 药敏试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 病毒核酸检测 |
| 2.2 ILTV和IBV序列同源性分析 |
| 2.3 病原分离 |
| 2.4 细菌分离培养与鉴定 |
| 2.5 分离菌耐药性检测 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（6）Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立及应用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 病毒、细胞与病料来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 套式PCR引物的设计与合成 |
| 1.4 病毒基因组DNA的提取 |
| 1.5 外引物单重PCR的扩增及检测 |
| 1.6 内引物单重PCR的扩增及检测 |
| 1.7 套式PCR方法的建立 |
| 1.7.1 套式PCR的预设反应条件 |
| 1.7.2 套式PCR反应条件的优化 |
| 1.8 特异性试验 |
| 1.9 敏感性试验 |
| 1.10 重复性试验 |
| 1.11 符合性试验 |
| 1.12 临床应用 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 PCR的扩增 |
| 2.2 套式PCR反应条件的优化 |
| 2.3 特异性试验 |
| 2.4 敏感性试验 |
| 2.5 重复性试验 |
| 2.6 符合性试验 |
| 2.7 临床应用 |
| 3 讨论 |
（7）鸡传染性喉气管炎病防治（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 病例探讨 |
| 2 临床表现 |
| 3 病理变化 |
| 4 科学防治 |
| 5 结束语 |
（8）鸡传染性喉气管炎病毒流行株生物学特征及影响其复制相关宿主蛋白作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 鸡传染性喉气管炎及鸡传染性喉气管炎病毒概述 |
| 1.1.1 鸡传染性喉气管炎病毒的发现及分类 |
| 1.1.2 鸡传染性喉气管炎流行病学 |
| 1.1.3 鸡传染性喉气管炎病毒的粒子特点及理化特性 |
| 1.1.4 鸡传染性喉气管炎的诊断与防控措施 |
| 1.2 鸡传染性喉气管炎病毒的分子生物学特征及研究进展 |
| 1.2.1 鸡传染性喉气管炎病毒基因组结构及特征 |
| 1.2.2 鸡传染性喉气管炎病毒与致病力及复制相关的主要基因 |
| 1.2.3 鸡传染性喉气管炎病毒的复制机制及细胞间的传播机制 |
| 1.3 CRISPR/Cas9基因编辑技术概述 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9系统介绍 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas9系统的分类及作用机制 |
| 1.3.3 全基因组文库CRISPR/Cas9筛选 |
| 1.4 本研究目的与意义 |
| 2 试验一三株传染性喉气管炎病毒的生长特性及致病性研究 |
| 2.1 主要材料 |
| 2.1.1 毒株、鸡胚、细胞及试验动物来源 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 三株ILTV毒价的测定 |
| 2.2.2 三株ILTV生长趋势的比较 |
| 2.2.3 三株ILTV致病性试验 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 三株ILTV毒价测定 |
| 2.3.2 生长趋势比较 |
| 2.3.3 感染鸡临床症状 |
| 2.3.4 抗体检测 |
| 2.3.5 三株ILTV qPCR组织脏器分布 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 试验二三株传染性喉气管炎病毒基因组序列的测定与分析 |
| 3.1 主要材料 |
| 3.1.1 毒株、鸡胚、细胞及试验动物来源 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 ILTV的扩增 |
| 3.2.2 ILTV的纯化 |
| 3.2.3 ILTV的基因组DNA提取 |
| 3.2.4 ILTV全基因组高通量测序 |
| 3.2.5 基因组结构注释 |
| 3.2.6 三株ILTV全基因组及蛋白的进化与比较分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 三株ILTV病毒纯化后病毒基因组DNA电泳图 |
| 3.3.2 ILTV全基因组高通量测序 |
| 3.3.3 三株ILTV基因组结构注释 |
| 3.3.4 三株ILTV全基因组及相关蛋白系统进化树分析 |
| 3.3.5 三株ILTV重要蛋白的比较分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 试验三利用CRISPR/Cas9敲除技术筛选对ILTV复制相关的宿主因子 |
| 4.1 主要材料 |
| 4.1.1 毒株、菌株及细胞来源 |
| 4.1.2 主要试剂与试剂盒 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 鸡全基因组CRISPR/Cas9敲除文库的构建 |
| 4.2.2 鸡全基因组CRISPR/Cas9敲除文库质粒的提取 |
| 4.2.3 鸡全基因组CRISPR/Cas9慢病毒的包装 |
| 4.2.4 鸡全基因组CRISPR/Cas9LMH细胞文库的构建 |
| 4.2.5 ILTV感染阳性细胞 |
| 4.2.6 LMH细胞基因组DNA的提取 |
| 4.2.7 引物设计 |
| 4.2.8 PCR产物胶回收 |
| 4.2.9 高通量测序 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 鸡全基因组CRISPR/Cas9建库结果 |
| 4.3.2 慢病毒感染效率 |
| 4.3.3 嘌呤霉素筛选靶细胞 |
| 4.3.4 ILTV病毒筛选靶细胞 |
| 4.3.5 sgRNA扩增结果 |
| 4.3.6 高通量测序结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 试验四与宿主蛋白SPCS3相互作用的ILTV相关病毒蛋白的分析 |
| 5.1 主要材料 |
| 5.1.1 主要毒株、菌株及细胞来源 |
| 5.1.2 主要试剂与试剂盒 |
| 5.1.3 主要仪器设备 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 SPCS3多克隆抗体的制备 |
| 5.2.2 ILTV在截短细胞系与正常细胞上生长差异的确定 |
| 5.2.3 ILTV蛋白的构建与表达 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 SPCS3蛋白截短细胞系验证 |
| 5.3.2 ILTV在1-14细胞和LMH细胞生长差异 |
| 5.3.3 LMH与SPCS3蛋白截短细胞系转染效率比较 |
| 5.3.4 ILTV蛋白表达 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 6 试验五SPCS3蛋白截短表达对其它α疱疹病毒复制的影响 |
| 6.1 主要材料 |
| 6.1.1 毒株、菌株及细胞来源 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 主要仪器设备 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 DEV和HSV-1在LMH及1-14细胞上的毒价滴定 |
| 6.2.2 DEV和HSV-1在LMH细胞与1-14细胞上生长差异的确定 |
| 6.2.3 DEV和HSV-1的病毒蛋白gL(UL1)蛋白在LMH细胞与1-14细胞表达差异的确定 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 DEV及HSV-1的毒价结果 |
| 6.3.2 DEV及HSV-1在LMH及1-14细胞上生长差异比较结果 |
| 6.3.3 DEV及HSV-1的gL蛋白在LMH及1-14细胞上表达差异比较 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 7 全文讨论 |
| 8 全文结论 |
| 9 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（9）表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸭肠炎病毒的构建及免疫效力测定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 传染性喉气管炎概述 |
| 1.1.1 传染性喉气管炎病毒病原学特征及其主要结构蛋白 |
| 1.1.2 传染性喉气管炎流行病学 |
| 1.1.3 ILT疫苗研究进展 |
| 1.2 鸭肠炎病毒概述 |
| 1.2.1 鸭肠炎病毒的病原学特征 |
| 1.2.2 鸭病毒性肠炎的流行病学 |
| 1.2.3 鸭肠炎病毒的复制 |
| 1.2.4 鸭肠炎病毒分子生物学研究进展 |
| 1.2.5 鸭肠炎病毒载体研究进展 |
| 1.3 CRISPR/Cas9研究进展 |
| 第二章 表达鸡传染性喉气管病毒gB蛋白的重组鸭肠炎病毒的构建与鉴定 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要菌种、质粒载体、细胞与病毒株 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 生物学软件 |
| 2.1.5 引物设计序列 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 DEV-ΔUS10/EGFP病毒株扩增及滴度测定 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9质粒构建与鉴定 |
| 2.2.3 同源重组片段PCR合成 |
| 2.2.4 重组病毒的拯救 |
| 2.2.5 重组病毒的纯化 |
| 2.2.6 重组病毒的鉴定 |
| 2.2.7 Western Blot鉴定ILTV gB蛋白表达 |
| 2.2.8 重组病毒生长曲线的绘制 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 DEV-ΔUS10/EGFP的扩增及病毒滴度测定 |
| 2.3.2 px330-sgRNA-EGFP质粒构建 |
| 2.3.3 同源重组片段的合成构建 |
| 2.3.4 重组病毒的拯救与鉴定 |
| 2.3.5 Western Blot鉴定外源蛋白的表达 |
| 2.3.6 病毒生长曲线 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 重组病毒对ILT免疫效力的测定 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验鸡和主要毒株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要实验设备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 重组病毒扩增及其滴度测定 |
| 3.2.2 攻毒保护实验 |
| 3.2.3 阻断ELISA检测鸭肠炎抗体水平 |
| 3.2.4 间接ELISA检测ILT抗体水平 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 重组病毒扩增 |
| 3.3.2 重组病毒病毒滴度TCID_(50)测定 |
| 3.3.3 免疫保护实验 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（10）表达IBV纤突蛋白的ILT重组病毒构建及其免疫效果评价（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡传染性支气管炎概述 |
| 1.1.1 鸡传染性支气管炎流行病学特征 |
| 1.1.2 鸡传染性支气管炎病毒生物学特性 |
| 1.1.3 鸡传染性支气管炎病毒结构蛋白概述 |
| 1.1.4 鸡传染性支气管炎疫苗研究进展 |
| 1.2 鸡传染性喉气管炎病毒及其作为疫苗载体的应用 |
| 1.2.1 疱疹病毒作为疫苗载体的优点 |
| 1.2.2 鸡传染性喉气管炎流行病学 |
| 1.2.3 疱疹病毒的US9 基因 |
| 1.2.4 鸡传染性喉气管炎病毒疫苗研究进展 |
| 1.3 研究目的及意义 |
| 第二章 表达IBV纤突蛋白的ILT重组病毒的构建 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 细胞、病毒与鸡胚 |
| 2.1.2 质粒与菌株 |
| 2.1.3 酶及主要试剂 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 |
| 2.1.5 引物 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 转移质粒的构建 |
| 2.2.2 重组病毒的构建及鉴定 |
| 2.2.3 重组病毒的生长特性研究 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 转移质粒p ILTΔUS9-S、p ILTΔUS9-S1 的构建 |
| 2.3.2 重组病毒ILTV-ΔUS9-S株、ILTV-ΔUS9-S1 株的构建及鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 IBV S1 蛋白单克隆抗体的制备 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 细胞、病毒及实验动物 |
| 3.1.2 质粒与菌株 |
| 3.1.3 酶及主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 |
| 3.1.5 引物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 重组蛋白的构建 |
| 3.2.2 杂交瘤细胞的筛选 |
| 3.2.3 单克隆抗体的制备及效价检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 IBV CK/CH/LDL/091022 毒株S1 蛋白的真核表达 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞的制备及单克隆抗体鉴定 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 表达IBV纤突蛋白的ILT重组病毒的免疫效果评价 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 细胞、病毒、鸡与鸡胚 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器和设备 |
| 4.1.4 引物 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 重组病毒对ILTV WG株的免疫保护评价 |
| 4.2.2 重组病毒对IBV CK/CH/LDL/091022 分离株的免疫保护评价 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 重组病毒ILTV-ΔUS9-S株、ILTV-ΔUS9-S1 株对ILTV的免疫保护作用评价 |
| 4.3.2 重组病毒ILTV-ΔUS9-S株、ILTV-ΔUS9-S1 株对IBV的免疫保护作用评价 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
| 致谢 |
| 作者简历 |
四、鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定（论文参考文献）
- [1]鸡传染性喉气管炎实验室诊断与序列分析[J]. 王文彬,伏春燕,阎佩佩,石天虹,李霞,魏祥法,刘瑞亭,董以雷,刘雪兰. 家禽科学, 2022
- [2]鸡传染性支气管炎诊断技术研究进展[J]. 张先东,蒋郁明,费奕强,薛晓阳,侯月娥. 中国动物检疫, 2022(01)
- [3]重组动物疱疹病毒活载体疫苗的构建与应用研究进展[J]. 杨明珠,陈晓春,宋佳诚,侯亚欣,李俊平. 中国畜牧兽医, 2022(01)
- [4]一例由疫苗接种引起的商品肉鸡多病原混合感染[J]. 盛晓丹,郭卉,秦春芝,刘霞,黄迪海,徐怀英,秦卓明. 家禽科学, 2021(11)
- [5]一例鸡细小病毒、鸡传染性贫血病毒及鸡传染性支气管炎病毒共感染病例的检测[J]. 张龙,林裕胜,江锦秀,张靖鹏,黄潇航,胡奇林. 福建农业学报, 2021(09)
- [6]Ⅰ群禽腺病毒套式PCR检测方法的建立及应用[J]. 杨晶晶,金红岩. 畜牧与兽医, 2021(09)
- [7]鸡传染性喉气管炎病防治[J]. 唐建萍. 畜牧兽医科学(电子版), 2021(15)
- [8]鸡传染性喉气管炎病毒流行株生物学特征及影响其复制相关宿主蛋白作用机制的研究[D]. 吴咪. 内蒙古农业大学, 2021(01)
- [9]表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸭肠炎病毒的构建及免疫效力测定[D]. 黄东明. 中国农业科学院, 2021(09)
- [10]表达IBV纤突蛋白的ILT重组病毒构建及其免疫效果评价[D]. 盛洁. 中国农业科学院, 2021