一、Acute lung injury in 2003（论文文献综述）
杨璐,屈萌艰,刘静,王婷,刘丹妮,黄夏荣,王金玲,周君[1]（2021）在《超短波调控NF-κB/TLR4信号通路抑制大鼠急性肺损伤炎症反应的研究》文中指出目的:观察超短波对大鼠急性肺损伤炎症反应的作用及核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）、Toll样受体4（Tolllike receptors 4,TLR4）表达的影响。方法:将24只雄性SD大鼠随机分成3组:对照组,急性肺损伤组,超短波组,每组8只。气管内滴注脂多糖建立急性肺损伤模型。造模后的即刻、4h、8h分别给予干预组大鼠超短波治疗,电极板胸背对置,间距11cm,每次干预15min。采用HE染色观察肺组织病理学表现,肺损伤评分评估损伤程度,湿/干重比值（W/D）评估肺水肿,ELISA检测血清炎症因子白介素-6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）的水平,RTPCR及Western-blot分别检测NF-κB、TLR4 m RNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,HE染色见急性肺损伤组大鼠肺组织结构受损,肺损伤评分及肺组织湿/干重比值（W/D）增高（P<0.01）;血清炎症因子IL-6、TNF-α的水平上升（P<0.01）;NF-κB、TLR4 m RNA表达及蛋白相对表达量明显升高（P<0.01）。与急性肺损伤组比较,超短波组大鼠肺组织结构受损程度明显减轻,肺损伤评分降低（P<0.01）;肺组织湿/干重比值（W/D）下降,但尚不具备显着性意义（P>0.05）;血清炎症因子IL-6、TNF-α水平下降（P<0.05,P<0.01）;NF-κB、TLR4 m RNA表达及蛋白相对表达量降低（P<0.01,P<0.01）。结论:超短波通过抑制NF-κB/TLR4信号通路,降低炎症因子IL-6、TNF-α的水平,抑制急性肺损伤炎症反应。
兰天,李亚平[2]（2021）在《呼吸机辅助通气治疗急性肺损伤的临床效果观察》文中指出目的探讨呼吸机辅助通气治疗急性肺损伤的临床效果。方法 86例急性肺损伤患者,按治疗方法不同分为对照组和研究组,各43例。对照组接受高流量氧疗治疗,研究组接受呼吸机辅助通气治疗。比较两组患者治疗后动脉血气分析、呼吸动力学指标及并发症发生情况、预后情况。结果治疗后,两组的pH比较,差异无统计学意义（P>0.05）;研究组动脉血氧分压（PaO2）（75.72±6.15）mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）（36.53±2.66）mm Hg、氧和指数（PaO2/FiO2）（275.38±12.01）mm Hg均优于对照组的（70.24±7.09）、（38.52±2.30）、（224.30±16.66）mm Hg,差异均具有统计学意义（P<0.05）。治疗后,研究组患者气道平均压（11.25±2.30）cm H2O（1 cm H2O=0.098 kPa）、气道峰压（21.82±3.14）cm H2O、气道阻力（10.92±1.48）cm H2O/（L·s）均低于对照组的（15.32±2.09）cm H2O、（25.42±2.65）cm H2O、（15.42±2.17）cm H2O/（L·s）,肺脏顺应性（59.83±6.47）ml/cm H2O高于对照组的（48.32±5.31）ml/cm H2O,差异均具有统计学意义（P>0.05）。研究组发生呼吸机相关性肺炎2例（4.7%）,急性呼吸窘迫综合征1例（2.3%）,死亡0例;对照组发生急性呼吸窘迫综合征7例（16.3%）,死亡2例（4.7%）。研究组急性呼吸窘迫综合征发生率低于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论急性肺损伤患者采取呼吸机辅助通气,可有效改善血气分析与呼吸动力学,降低急性呼吸窘迫综合征发生率。
冷晓亮[3]（2021）在《食管癌术后急性肺损伤及急性肾损伤的临床研究》文中进行了进一步梳理目的:提出一种在外科病房识别急性肺损伤（ALI）方法,以评估食管切除术后ALI的发生率、临床后果和危险因素。并比较手术侧与非手术侧的肺损伤程度。方法:纳入青岛大学附属医院2012.12-2018.11间连续行食管切除术的1022例食管癌患者进行分析。提出了一种识别ALI的方法,即整合肺水肿放射学评估（RALE）评分来量化肺水肿程度。逐步logistic回归确定了术后ALI发生的危险因素。采用RALE评分比较了双侧肺损伤程度。结果:外科病房中识别ALI的诊断标准为:急性起病、氧合指数≤300mm Hg、床旁胸片示双侧浑浊（RALE评分≥16）且排除心源性肺水肿。术后ALI的发病率约为9.7%。ALI的发生与多种临床并发症、较长的住院时间、较高的医疗费用和较高的围手术期死亡率相关。确定了9个危险因素,包括BMI、ASA分级、DLCO%、手术时间、中性粒细胞百分比、高密度脂蛋白和几种电解质紊乱。手术侧肺叶RALE评分高于非手术侧。结论:我们提出了一种新方法,用于在行食管切除术的患者术后及时发现ALI病例。术后ALI很常见并且后果严重。确定了ALI发生的几个危险因素。严格的术前准备,熟练的术中手术以及精心的术后管理可以减少ALI的发生。食管切除术后患者手术侧的肺叶比非手术侧更容易受到损伤。目的:探究食管切除术后急性肾损伤（AKI）的发病率,危险因素及临床结果。方法:回顾性分析了青岛大学附属医院2012年12月至2018年11月行食管切除术且有术前、术后肾功能检查的患者947例,其中男性896例,女性51例,中位年龄61（55,66）岁。通过单因素及多因素logistic回归分析,探讨术后AKI发生的相关危险因素,并探究其对术后的影响。结果:术后患者AKI发生率为4.01%（38/947）。多因素logistic回归分析结果显示,年龄≥55岁（OR=3.604,95%CI 1.04612.416,P=0.042）、高血压（OR=2.59,95%CI1.1084.609,P=0.025）、血脂异常（脂蛋白a/per SD）（OR=1.492,95%CI 1.1951.862,P=0.001）、手术时间（per 1h）（OR=1.348,95%CI 1.0971.655,P=0.004）和肿瘤T分期（≥T3）（OR=2.68,95%CI 1.0177.065,P=0.046）是术后AKI的独立危险因素。AKI的发生与术后吻合口瘘,术后住院时间和住院总费用的增加有关（P<0.05）。结论:高龄、高血压、血脂异常、手术时间长和肿瘤T分期高的患者是术后AKI发生的高危人群。尽管术后AKI的发生率低,多为轻度且自限性,但会导致术后吻合口瘘、住院时间、住院费用的增加,严重者将危及生命。在围手术期应对高危人群进行严密监测,预防AKI的发生以及早发现、早处理。
郑璐[4]（2021）在《扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究》文中认为研究背景:本课题组前期对扶芳藤进行粗提并对其抗炎能力进行初步筛选,结果显示,在体外LPS诱导的RAW264.7细胞实验中,粗提的扶芳藤能够抑制各种炎性因子,具有明显的抗炎活性;在体内二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀实验中,粗提的扶芳藤对小鼠耳肿胀也有一定的抑制作用,表明扶芳藤粗提物体内体外有一定的抗炎作用。本文在前期实验结论的基础上进一步研究扶芳藤粗提物对抗LPS诱导的急性肺损伤活性,并对扶芳藤进行不同极性萃取,深入探寻其抗急性肺损伤的活性成分和作用机制。目的:本课题旨在从体内和体外评价扶芳藤提取物的主要抗炎活性成分对巨噬细胞和A549细胞的影响,并初步探讨扶芳藤主要有效活性单体调控巨噬细胞和A549细胞的潜在作用机制。方法:第一部分中药扶芳藤提取物、主要活性成分以及各萃取物对炎症反应的影响1.建立小鼠急性肺损伤模型测定扶芳藤乙醇提取物高、中、低剂量组对LPS所致小鼠急性肺损伤的影响。2.MTT法检测扶芳藤乙醇提取物以及乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对RAW264.7细胞活力的影响。3.Griess法检测扶芳藤乙醇提取物以及乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO产量的影响。4.ELISA法测定扶芳藤乙醇提取物以及正丁醇提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌IL-6和TNF-α的影响。5.高效液相色谱法检测正丁醇提取物所含的主要活性成分,以及所含主要活性成分的含量。第二部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞的影响及机制探究1.MTT法检测甜醇对RAW264.7细胞活力的影响。2.Griess法检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO的影响。3.ELISA法测定甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌IL-6和TNF-α的影响4.RT-PCR检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞Myd88、TLR4、TRIF、NF-κB p65、iNOS、COX-2、IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。5.Western-blot检测甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。6.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转位的影响。第三部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的A549细胞的影响及机制探究1.MTT法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞活力的影响。2.Griess法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞分泌NO产量的影响。3.RT-PCR检测甜醇对LPS诱导的A549细胞Myd88、TLR4、TRIF、NF-κB p65、iNOS、COX-2、IL-6、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。4.Western-blot检测甜醇对LPS诱导的A549细胞分泌TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。5.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的A549细胞NF-κB p65核转位的影响。第四部分中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤中的抗炎作用及其作用机制研究1.ELISA法检测甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤分泌IL-1β、IL-6和TNF-α的影响。2.肺湿质量/干质量（W/D）比值检测甜醇对LPS诱导的小鼠急性肺损伤肺组织干湿比的影响。3.BCA及细胞计数法检测甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤BALF中总蛋白浓度和细胞渗出数的影响。4.HE染色检测甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠的肺部组织炎症反应影响。5.Western-blot法检测甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠肺组织细胞中TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白表达的影响。6.免疫荧光法检测甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠NF-κB p65核转位的影响。结果:1.中药扶芳藤提取物可显着降低LPS诱导小鼠急性肺损伤肺组织匀浆中TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;可显着降低LPS诱导RAW264.7细胞NO及IL-6的分泌。2.中药扶芳藤中单体甜醇、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物在0～50μmol·L-1浓度下对RAW264.7细胞无明显毒性（P﹤0.05）;甜醇在1～25μmol·L-1时,对A549细胞无明显毒性（P﹤0.05）。因此,RAW264.7细胞选用的浓度为10μmol·L-1、25μmol·L-1和50μmol·L-1;A549细胞选用的浓度为1μmol·L-1、10μmol·L-1和25μmol·L-1。3.扶芳藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌的NO、IL-6和TNF-α有显着的抑制作用。4.HPLC表明扶芳藤中甜醇的含量为2.915%,甜醇在乙酸乙酯提取物含量为2.6%,在正丁醇提取物含量为4.6%。在正丁醇提取物中含量最高,与正丁醇提取物抗LPS诱导的急性肺损伤效果最显着相呼应,推测甜醇是主要活性的成分之一。5.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7和A549细胞分泌NO。6.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白的表达。7.甜醇抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、TRIF、TLR4、Myd88和NF-κB p65的mRNA的表达。8.甜醇抑制LPS诱导的A549细胞iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6、IL-1β、TRIF、TLR4、Myd88和NF-κB p65 mRNA的表达;同时,甜醇抑制细胞对TLR4、Myd88、TRIF和NF-κB p65蛋白的表达。9.扶芳藤中主要活性成分甜醇从病理学角度上明显改善LPS诱导的急性肺损伤小鼠的肺组织的炎性浸润,显着减轻了小鼠肺组织病理状态,改善组织充血的现象,还可以减轻小鼠肺组织渗出物的分泌,肺泡中出血状态减轻,红色变异区域也随之减少,表明小鼠的急性肺损伤状况得到改善,炎症区域普遍缩小,抑制炎症的发生发展,甜醇起到了明显改善小鼠急性肺损伤的作用。结论:1.扶芳藤粗提物高中低剂量在体外实验中,对炎症反应有显着的抑制作用;扶芳藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和石油醚提取物均对炎症反应有显着的抑制作用,且正丁醇提取物活性最高。2.扶芳藤不同提取物均含有甜醇,且正丁醇提取物中甜醇含量最高,证明甜醇是扶芳藤中主要抗炎活性成分之一。3.甜醇对LPS诱导的RAW264.7和A549细胞的炎症反应有显着的抑制作用。4.甜醇抑制RAW264.7和A549细胞的TLR4-NF-κB p65信号通路。5.扶芳藤中主要活性成分甜醇通过抑制TLR4-NF-κB p65通路发挥抗炎作用,从而对LPS诱导的急性肺损伤小鼠具有保护作用。
高晓慧[5]（2021）在《苯并恶唑酮类抗炎化合物W3D对MD2和TLR4蛋白调控作用的研究》文中进行了进一步梳理目的:课题组前期以苯并恶唑酮为母环设计合成了系列4位取代衍生物,并发现4-5’-二甲氨基萘-1’-磺酰氧基-苯并恶唑酮（W3D）具有较好的抗炎活性,且对TLR4/My D88/NF-κB信号通路具有调控作用,但其作用靶点尚不明确。本论文旨在以MD2和TLR4为候选靶蛋白,利用体外、体内及化学生物学等多种方法,研究W3D对上述蛋白的调控机制,为合理设计苯并恶唑酮类抗炎小分子化合物提供靶点依据。方法:第一部分化合物W3D对MD2、TLR4蛋白表达调控的作用研究1.Western Blot法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、MD2、p-IRAK4蛋白表达的影响。2.ELISA法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中TLR4、MD2蛋白表达的影响。3.细胞免疫荧光法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转移的影响。第二部分MD2抑制剂MD2-IN-1对化合物W3D抗炎活性的影响MD2抑制剂MD2-IN-1阻断MD2蛋白后,LPS与化合物W3D共同处理细胞:1.Griess法测定LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中NO释放量。2.ELISA法测定LPS诱导的RAW264.7细胞上清液中IL-6、TNF-α释放量。3.Western Blot法测定化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞MD2、TLR4蛋白表达的影响。4.细胞免疫荧光法检测化合物W3D对LPS诱导的RAW264.7细胞NF-κB p65核转移的影响。第三部分化合物W3D与MD2、TLR4蛋白相互作用研究1.流式细胞术检测化合物W3D对FITC-LPS结合细胞膜表面受体的竞争性抑制作用。2.DARTS和CETSA技术检测化合物W3D对MD2、TLR4蛋白稳定性的影响。3.荧光光谱技术检测化合物W3D与bis-ANS竞争性结合MD2蛋白的作用。4.BLI生物层干涉技术检测化合物W3D与MD2、TLR4蛋白的平衡解离常数KD。5.分子对接法模拟化合物W3D与MD2蛋白的结合。第四部分化合物W3D对LPS诱导的急性肺损伤的药效学研究气道滴注1 g·L-1LPS造成小鼠肺损伤,采用灌胃方式给予药物,并在12 h后处死小鼠:1.HE染色法观察小鼠肺组织损伤程度并计算肺组织湿干比。2.ELISA法检测小鼠肺组织中MPO活性和血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的释放量。3.Western Blot法检测小鼠肺组织TLR4信号通路相关蛋白的表达水平。结果:1.化合物W3D可显着抑制LPS诱导的RAW264.7细胞MD2、TLR4蛋白的表达,抑制IRAK4磷酸化和NF-κB p65的入核,减少细胞上清液中MD2、TLR4蛋白的表达,且呈现一定的剂量依赖性。2.流式细胞术荧光值表明化合物W3D可抑制LPS与RAW264.7细胞膜受体的结合。3.MD2抑制剂MD2-IN-1的加入,在一定程度上减弱了化合物W3D对NO、IL-6、TNF-α释放的抑制活性,降低了其对MD2、TLR4蛋白表达以及NF-κB p65入核的抑制作用。4.DARTS实验和CETSA实验表明化合物W3D可显着增强MD2、TLR4蛋白的酶稳定性和热稳定性。5.荧光光谱实验分析发现化合物W3D可以竞争性抑制bis-ANS与MD2蛋白结合,而使荧光强度减弱。6.BLI实验表明化合物W3D可与MD2蛋白发生直接作用,平衡解离常数KD值为5.875×10-6mol·L-1,而与TLR4蛋白无直接作用。7.计算机Docking结果显示化合物W3D与MD2蛋白疏水囊中的SER-120、SER118残基形成氢键。8.体内药效学研究显示化合物W3D可减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,降低肺湿干重比、MPO酶活性以及血清中iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,同时可显着减轻肺组织中MD2、TLR4、NF-κB p65蛋白的表达,抑制IRAK4磷的酸化,呈现一定的剂量依赖性。结论:1.化合物W3D可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞MD2、TLR4蛋白的表达。2.化合物W3D可通过氢键作用直接与MD2蛋白结合,竞争性抑制LPS与膜表面受体的结合,与bis-ANS竞争性结合MD2蛋白,与MD2蛋白的平衡解离常数为5.875×10-6mol·L-1,该结合作用使得MD2、TLR4蛋白酶稳定和热稳定性有所增强,为新型的MD2抑制剂。3.化合物W3D可通过调控TLR4/MD2/p IRAK4/NF-κB p65信号通路发挥治疗小鼠急性肺损伤的作用。
张瑞华[6]（2021）在《细胞自噬在H9N2流感病毒致肺损伤中的作用及其机制研究》文中进行了进一步梳理A型流感病毒经常给养殖业带来严重经济损失,同时影响人类健康。研究报道H9N2流感病毒可以感染禽、猪和人,其研究具有重要的公共卫生学意义。流感病毒的致病机制目前普遍认为由于病毒的有效复制带来的直接损伤、病毒所致炎性因子的大量释放和氧化应激损伤造成的,但其详细机制仍需进一步研究。研究证实流感病毒可以诱导细胞自噬,但其在流感病毒致病机制中的作用尚不明确。因此本研究探讨了细胞自噬在流感病毒致病机制中的作用。主要研究结果如下:1.H9N2流感病毒诱导A549发生细胞自噬的研究H9N2流感病毒感染A549细胞,透射电镜观察到了单层膜的自噬溶酶体,western blot结果显示LC3-II的表达水平显着增加。本研究建立了稳定表达GFP-LC3的A549细胞系。激光共聚焦结果显示感染H9N2流感病毒的细胞中呈现了绿色荧光的点状聚集,说明H9N2流感病毒诱导A549发生细胞自噬。2.细胞自噬与H9N2流感病毒复制关系的研究本研究利用3-MA、LY294002以及Atg5 siRNA抑制细胞自噬或者利用rapamycin诱导细胞自噬,检测NP mRNA水平和表达水平以及病毒滴度。结果显示LY294002和Atg5 siRNA可以显着降低NP mRNA水平和表达水平,同时降低病毒滴度。3-MA也可以降低NP mRNA水平和病毒滴度。Rapamycin显着增加NP mRNA水平和病毒滴度。说明抑制细胞自噬降低病毒复制。3.细胞自噬参与H9N2流感病毒所致A549细胞炎性因子释放的研究利用3-MA和Atg5siRNA抑制细胞自噬,实时定量PCR检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-8和CCL5的mRNA水平。结果显示抑制细胞自噬降低由H9N2流感病毒引发的炎性因子mRNA水平的升高。同时抑制细胞自噬可以将接种不同MOI H9N2流感病毒引起的炎性因子升高的显着差异降低到同一水平,因此抑制细胞自噬导致的炎性因子mRNA水平的降低并非由于抑制细胞自噬导致的病毒滴度的降低引起。此外,Akt-mTOR信号调节H9N2流感病毒诱导的细胞自噬,细胞自噬通过调节p38MAPK、JNK、ERK1/2和NF-κB信号参与H9N2流感病毒诱导的炎性因子的释放。4.细胞自噬与H9N2流感病毒诱导A549细胞氧化应激作用关系的研究抑制细胞自噬或者诱导细胞自噬,检测SOD1、ROS和MDA的水平以确定细胞自噬与氧化应激的关系。结果显示3-MA、LY294002以及Atg5 siRNA抑制细胞自噬显着降低由H9N2引起的氧化应激作用的升高。抑制细胞自噬可以将因接种不同MOI H9N2引起的氧化应激作用增加的显着差异降低到同一水平。Rapamycin诱导细胞自噬可以增强A549的氧化应激作用。因此,抑制细胞自噬导致的氧化应激作用的降低并非由抑制细胞自噬导致的病毒滴度的降低引起。此外,NAC和Atg5siRNA同时处理进一步降低氧化应激水平、NP mRNA水平和病毒滴度,而H2O2起到相反作用,说明细胞自噬通过调节H9N2诱导的氧化应激作用而影响病毒的复制,这一作用受到信号AKT/TSC2/mTOR的调节。5.细胞自噬参与H9N2流感病毒诱导小鼠急性肺损伤的研究在小鼠体内验证细胞自噬是否通过参与病毒复制,病毒引起的炎性因子的释放以及氧化应激损伤参与H9N2流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤。结果显示3-MA或者体内转染Atg5siRNA抑制细胞自噬可以降低急性肺损伤小鼠死亡率、缓减肺水肿、减轻病理变化。抑制细胞自噬降低流感病毒的复制、降低急性肺损伤小鼠炎性因子的释放和缓减氧化应激作用。此外,Akt-mTOR信号调节H9N2流感病毒诱导的细胞自噬,而细胞自噬通过调节p38 MAPK、JNK、ERK1/2和NF-κB信号参与急性肺损伤小鼠炎性因子的释放。结论:（1）抑制细胞自噬可以抑制H9N2流感病毒复制。（2）抑制细胞自噬降低由病毒所致A549细胞炎性因子的释放。信号AKT-mTOR调节细胞自噬,细胞自噬通过p38MAPK、JNK、ERK1/2以及NF-κB通路介导炎性因子的释放。（3）抑制细胞自噬能降低H9N2流感病毒所致A549细胞的氧化应激作用。细胞自噬通过调节氧化应激作用影响病毒复制,这一作用受到信号AKT/TSC2/mTOR的调节。（4）细胞自噬通过调节病毒复制,炎性因子的释放以及氧化应激作用参与H9N2流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤。抑制细胞细胞自噬可以缓减H9N2流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤。因此,细胞自噬是H9N2流感病毒致病的重要机理之一。
张雨茜[7]（2021）在《清热解毒类代表性方剂抗流感药效作用及机制研究》文中研究表明目的:为了探讨清热解毒类中成药抗流感作用及其潜在的共性机理,本论文首先采用H1N1甲流感病毒感染小鼠模型对不同类型清热解毒类方剂抗甲型流感病毒的药效作用及其方剂组成特点进行了分析;然后选取以银翘散为主方的代表性方剂复方银花解毒方（FFYH）,采用体内外药效评价模型深入探讨其抗流感病毒的药效作用及机制,并在此基础上探讨其协同增强抗病毒药磷酸奥司他韦抗甲型流感病毒的药效作用及其潜在机理,以期为探讨清热解毒类方剂临床治疗流感的共性机制及指导抗流感创新中药方剂的研发提供理论依据。方法:本论文以H1N1甲型流感病毒感染ICR小鼠为模型,以死亡保护率与生存期为评价指标对比分析了 40种上市清热解毒类中成药体内抗甲流感病毒的药效作用及其方剂组成特点;然后以H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒感染MDCK细胞为模型,采用CPE抑制试验和HA试验方法对上述筛选的清热解毒类代表性方剂复方银花解毒方（FFYH）体外抗流感病毒的广谱性及其药效作用进行了评价,并通过采用饮食量变化、体重变化、生存期、死亡保护率、肺病理组织变化以及血细胞变化等指标综合考察FFYH体内抗流感病毒的药效作用;采用ELISA法检测小鼠血清炎症因子表达水平,采用RT-PCR方法及Western blot法综合评价其抗流感病毒性肺炎的作用及机制;最后采用上述类似的方法探讨了 FFYH和磷酸奥司他韦体内协同增强抗流感病毒的药效作用及机制。结果:（1）体内药效评价研究结果表明40余种清热解毒类方剂中具有抗流感病毒药效作用的方剂主要由以连翘散为主方加减而来,其中具有明显抗流感病毒的方剂有19种,其余无明显抗流感疗效。（2）清热解毒类代表性方剂FFYH不仅体外对H1N1、H3N2、H5N1、H7N9和H9N2亚型流感病毒的复制有很好的抑制作用,而且体内能显着延长小鼠的生存期,显着降低小鼠的死亡率、改善血液参数与肺组织损伤;机制研究显示FFYH体内抗流感病毒药效与其抑制TLR7、MyD88、IRAK4、IRF7、TRAF3和TRAF6的mRNA的表达而有效抑制血清及肺组织炎症因子TNF-α IL-6、IFN-γ、IL-1β和IP10的产生而降低病毒性急性肺损伤有关;此机制在人肺腺癌A549细胞模型中也得到了验证,即FFYH体内抗流感病毒药效可能与其具有靶向TLR7/MyD88信号通路抑制IAV感染所引起的过激炎症反应有关。（3）体内药效研究结果表明FFYH与磷酸奥司他韦（Ose）联合给药比FFYH或Ose单独给药在延长致死性流感病毒感染引起的急性呼吸衰竭小鼠的生存期方面存在显着优势,两者联合给药比单独给药的生存期明显延长,分别为13.7±2.1 天（联合）,12.6±2.6 天（Ose）和 10.6±3.1 天（FFYH）;两者联合给药的死亡保护率显着提高,分别为70%（联合）,50%（Ose）和30%（FFYH）。此外,两者在改善血液学参数和肺组织损伤等多方面均具有显着优势,提示两者联合具有协同增效作用。体内药效作用机制研究表明FFYH与Ose联合给药不仅可协同增强抑制病毒的复制,而可显着抑制TLR7/MyD88炎症信号通路降低肺组织或肺细胞中应过激炎症引起的急性肺损伤。结论:清热解毒类方剂中具有抗流感病毒药效作用的方剂主要由清热解毒类经典方银翘散加减而来,其代表性方剂FFYH不仅体外能有效抑制多种亚型流感病毒的复制,而且体内能显着降低致死性流感病毒感染引起的死亡;FFYH与抗流感病毒药物Ose联合给药对甲流感具有协同增效作用,其机制与其能显着抑制病毒复制以及抑制TLR7/MyD88信号通路降低肺部病毒感染引起的过激炎症反应密切相关,提示靶向抑制TLR7/MyD88信号通路可能是清热解毒类中药临床抗流感的共性机制。
张勇[8]（2021）在《紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用》文中研究说明急性肺损伤（ALI）是动物饲养过程中严重的呼吸道疾病,严重威胁着畜禽的生命安全。越来越多的研究表明ALI的发生发展过程与炎症和氧化应激反应密不可分。因此,减轻炎症和氧化应激反应对于改善ALI具有重要意义。紫檀芪是一种具有生物活性的纯天然物质,多存在于常见的蓝莓、葡萄等植物中,有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗真菌等药理活性,同时越来越多的研究表明紫檀芪能够显着改善多种组织器官的损伤。本论文以紫檀芪为研究对象,建立LPS诱导的ALI小鼠模型,初步研究紫檀芪对其保护作用及其潜在机制。而后应用紫檀芪防治ALI雏鸡,观察紫檀芪对雏鸡的保护效果。首先,构建LPS诱导的ALI小鼠模型,分别用10、20和40 mg/kg紫檀芪对该模型进行预处理。其次,检测小鼠肺脏湿干重比值（W/D）的变化,并对其HE染色进行病理组织学观察;对支气管肺泡灌洗液（BALF）中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞进行计数,以及测定总蛋白浓度;测定肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性;然后,测定肺组织抗氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,以及氧化应激指标丙二醛（MDA）含量;qRT-PCR测定肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化;最后,Western blotting检测NF-κB信号转导通路中p-IκB和p-p65蛋白以及Nrf2/HO-1信号转导通路中Nrf2和HO-1蛋白水平。结果显示,LPS诱导的ALI小鼠模型构建成功;紫檀芪降低了ALI小鼠肺脏的W/D值,改善了肺组织损伤程度,如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等;减少BALF中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数目,以及总蛋白浓度;降低肺组织MPO活性;提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性,并降低MDA含量;降低肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达;降低肺组织中p-IκB和p-p65蛋白水平,升高肺组织中Nrf2和HO-1蛋白水平。提示紫檀芪对ALI的保护作用机制主要是通过抑制NF-κB和激活Nrf2/HO-1信号转导通路,即抑制炎症反应和氧化应激反应。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型具有保护作用,可作为治疗或保护LPS诱导的ALI雏鸡的候选药物。构建LPS诱导的ALI雏鸡模型,分别饲喂50、100和200 mg/kg紫檀芪对该模型进行处理。每日对雏鸡进行称重,并观察其采食量以及精神和体征状态;眼观肺脏形状、颜色、充血和坏死情况等组织病理学变化;检测雏鸡肺脏W/D的变化,并对其HE染色进行病理组织学观察;测定肺组织MPO活性;测定肺组织抗氧化应激指标SOD、CAT、GSH-Px活性,以及氧化应激指标MDA含量;qRT-PCR测定肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA表达变化。结果显示,LPS诱导的ALI雏鸡模型构建成功,但其每日采食量以及精神和体征状态并无明显异常;紫檀芪提升了ALI雏鸡的体重日增长率;雏鸡肺组织随着紫檀芪剂量的增加,形状和颜色逐渐趋于正常,充血和坏死情况有所改善;降低了ALI雏鸡肺脏的W/D值,改善了肺组织损伤程度,如维持肺组织结构完整性、减轻肺间质水肿和肺泡壁增厚、减少浸润性炎性细胞等;降低肺组织MPO活性;提高肺组织SOD、CAT和GSH-Px活性,并降低MDA含量;降低肺组织中COX-2、i NOS、TNF-α、IL-6、IL-1β细胞因子mRNA的表达。结果证实紫檀芪对LPS诱导的ALI雏鸡模型具有保护作用。综上所述,本论文证实紫檀芪对LPS诱导的ALI小鼠模型发挥保护作用,并初步揭示其作用机制是通过抑制炎症和氧化应激反应来实现的,而应用紫檀芪防治雏鸡ALI也证实了良好的保护效果。以上结果不仅为生产实践中有效防治ALI提供借鉴和参考,而且也可为雏鸡功能性饲料添加剂的研发提供实验依据。
石小云[9]（2021）在《M2巨噬细胞在脂多糖诱导肺纤维化中的作用及机制》文中研究指明急性肺损伤（Acute lung injury,ALI）和急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）,是重症监护病房常见的发病和死亡原因。ALI/ARDS多数由病毒、细菌等微生物引起严重的肺部甚至全身炎症反应。ALI/ARDS的预后通常取决于肺损伤后的结构重塑和纤维化程度,当严重的肺纤维化发生发展时,患者肺功能减退,甚至呼吸衰竭,危及生命。研究认为,在ALI/ARDS炎症消退后肌成纤维细胞的分化是肺纤维化发生的重要环节。肺间质内的Axin2+肌成纤维祖细胞具有分化为肌成纤维细胞的潜能,可能参与肺纤维化的发生发展。外泌体作为细胞间信号传递的重要载体,参与了许多的病理生理过程,还可以作为疾病治疗的靶点,近年来受到非常多的关注。ALI发生后,肺泡灌洗液里发现许多外泌体,特别是巨噬细胞来源的,参与了炎症反应,组织损伤和修复过程。因此,研究M2巨噬细胞外泌体和Axin2+肌成纤维祖细胞之间的关系可能为ALI后肺纤维化的研究和治疗提供新方向和思路。第一部分M2型巨噬细胞在急性肺损伤后的激活以及对AMP增殖活化的影响目的:通过建立急性肺损伤小鼠模型,给予氯膦酸二钠脂质体（Clodronate Liposomes,CL）药物处理消除巨噬细胞后,检测巨噬细胞对急性肺损伤后肺纤维发生的影响,探讨M2巨噬细胞在肺纤维化（Pulmonary fibrosis,PF）中的作用。方法:1.选用无特定病原体（Specific Pathogen Free,SPF）C57BL/6小鼠36只,6-8周龄,体重20-22 g,随机分成2组,实验组腹腔内注射脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）。对照组在腹腔内注射同量的生理盐水。分别于1、3、7天随机处死6只小鼠,PBS灌洗肺泡3次,收集支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar larage fluid,BALF）。流式细胞分析仪检测M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的比例。2.建立ALI小鼠模型30只,随机分为2组,ALI+CL组给予氯膦酸二钠脂质体处理,连续给药一周,ALI组给予生理盐水处理。于1周处死小鼠,解剖取下肺脏标本,Western blot检测α-SMA、CollagenⅠ蛋白的表达水平。3.分别加入转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）,血小板衍生生长因子（Platelet derived factor,PDGF）,胰岛素促生长因子（Insulin-like growth factors,IGF-1）连续培养AMP细胞4天,CCK-8检测AMP细胞的增殖。ALI-MΦ组建立ALI小鼠模型,N-MΦ组给予生理盐水处理,于一周处死小鼠,收集BALF。流式分选获得实验组小鼠CD206+/CD163+M2巨噬细胞（ALI-MΦ）及对照组小鼠肺泡CD68+巨噬细胞（N-MΦ）,Axin2阳性肌成纤维祖细胞（Axin2+Myofibrogenic Progenitor cell,AMP）细胞共培养。流式分析检测AMP细胞增殖,Western blot检测血管平滑肌蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（CollagenⅠ）的表达水平。结果:1.与ALI后第1天和第3天相比,ALI后第7天CD68+/i NOS+M1巨噬细胞数量降低,而CD206+/CD163+M2型巨噬细胞数量增加,且均存在显着性差异（P<0.001）。2.与ALI组相比,ALI+CL组给予氯膦酸二钠脂质体后,Masson染色及α-SMA、CollagenⅠ免疫组化阳性水平降低,Western Blot结果显示α-SMA蛋白水平明显降低（p<0.05）,CollagenⅠ蛋白水平明显降低（P<0.01）。3.加入细胞因子TGF-β1,PDGF,IGF-1连续培养AMP细胞4天,AMP细胞增殖水平无明显变化。与N-MΦ组相比,ALI-MΦ组中AMP细胞的增殖水平升高,α-SMA蛋白表达上调。ALI-MΦ组细胞培养液上清中的CollagenⅠ含量也显着高于N-MΦ组（P<0.01）。结论:结论1在ALI后期即纤维化阶段,M1巨噬细胞向M2巨噬细胞转化。结论2在ALI小鼠模型中,通过CL处理消除体内巨噬细胞后,显着减轻了小鼠PF程度。结论3 M2型巨噬细胞可显着促进AMP的增殖、分化及胶原分泌。第二部分M2型巨噬细胞通过外泌体调控急性肺损伤后PF的机制探讨目的:建立ALI小鼠模型,探讨M2巨噬细胞外泌体调控PF的具体机制。方法:1.选用SPF级C57BL/6小鼠12只,6-8周龄,体重20-22 g,随机分为2组,实验组（ALI-MΦ-Exo组）腹腔内注射LPS,注射量:15 mg/kg。N-MΦ-Exo组注射等量生理盐水。于1周处死小鼠,PBS灌洗肺泡3次,取肺脏标本用于ALI和PF评估;PBS灌洗肺泡3次,收集BALF,ALI-MΦ-Exo组流式分选获得CD206+/CD163+M2型巨噬细胞,N-MΦ-Exo组流式分选获得CD68+。分别分离获得ALI小鼠肺泡M2巨噬细胞外泌体（ALI-MΦ-Exo）和正常小鼠肺泡巨噬细胞分泌外泌体（N-MΦ-Exo）,与AMP共培养。Cell Counting Kit-8（CCK-8）检测AMP增殖水平,Western blot检测CollagenⅠ的表达水平,免疫荧光染色观察AMP形态及α-SMA的表达水平。2.比色法检测AMP总RNA中的N6-甲基腺嘌呤（N6-methyl-adenosine,m6A）的甲基化程度;Western blot检测AMP中METTL3蛋白的表达水平;q PCR检测AMP中METTL3 m RNA水平。3.收集ALI小鼠肺泡巨噬细胞外泌体（ALI-MΦ-Exo）及对照组小鼠肺泡巨噬细胞分泌外泌体（N-MΦ-Exo）,透射电镜观察外泌体大小形态。Western blot检测两种外泌体中METTL3蛋白的表达水平。结果:1.与ALI-MΦ相比,ALI-MΦ-Exo组AMP增殖水平显着升高,AMP细胞形态变成梭状,同时α-SMA表达上调;AMP培养基上清液CollagenⅠ含量显着上升（P<0.01）。2.ALI-MΦ-Exo组中AMP细胞中总RNA的m6A水平及METTL3蛋白表达水平显着高于ALI-MΦ-Exo组,而AMP细胞中METTL3 m RNA水平无显着差异。3.电镜观察N-MΦ-Exo组与ALI-MΦ-Exo组外泌体形态大小一致,CD63蛋白表达量一致。与N-MΦ-Exo组相比,ALI-MΦ-Exo组中M2巨噬细胞外泌体中METTL3蛋白水平显着升高（P<0.01）。结论:结论1在ALI小鼠模型中,M2型巨噬细胞外泌体可显着促进AMP增殖、肌成纤维细胞分化、胶原蛋白分泌。结论2经ALI后M2型巨噬细胞外泌体刺激AMP细胞,细胞中的m6A水平和METTL3蛋白水平升高。结论3在ALI小鼠中,M2巨噬细胞分泌的外泌体中携带的METTL3蛋白,通过m6A的修饰作用,促进AMP活化和纤维增生。
赵晓虹[10]（2021）在《肽酰基精氨酸脱亚氨酶4在脂多糖诱导急性肺损伤中的作用和机制研究》文中研究指明研究背景急性肺损伤（acute lung injury,ALI）/急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory dysfunction syndrome,ARDS）是临床上尤其是重症监护病房常见的危急重症,其常见病因为创伤、败血症、肺炎、休克等多种因素导致的肺组织“气血屏障”破坏,临床上表现为顽固性低氧血症和急性非心源性肺水肿。多种炎症细胞介导的肺脏炎症反应和炎症反应失控所致的肺微血管通透性增高,导致肺间质和肺泡水肿,是ALI/ARDS的共同病理生理基础。即使使用机械通气等先进治疗手段,预后效果仍不佳,死亡率高达40%以上。因此,对ALI/ARDS的病理生理学做进一步的研究将会提供新的治疗靶点和治疗方法。肽酰基精氨酸脱亚氨酶4（peptidyl arginine deiminases 4,PAD4）主要通过瓜氨酸化参与蛋白翻译后修饰的关键酶之一。PAD4已成为治疗自身免疫疾病、肿瘤等疾病的潜在靶点,既往研究证实抑制PAD4表达可以改善器官功能障碍,进而提高失血性休克和脓毒症小鼠的存活率。阻滞PAD4可以降低腹腔内注射脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的内皮细胞通透性增加。研究表明PAD4参与中性粒细胞胞外捕获网（neutrophil extracellular traps,NETs）形成,从而调控ALI/ARDS发展中所涉及的病理生理过程。虽然PAD4已被证实参与多种疾病的发展进程,然而,PAD4在LPS直接诱导急性肺损伤中的作用和机制还未被详细阐明。明确其作用机制有利于急性肺损伤的治疗。研究目的本研究首先观察PAD4在LPS诱导急性肺损伤中的表达变化。其次明确PAD4抑制剂TDFA（Thr-Asp-F-amidine）对LPS诱导急性肺损伤的保护作用。最后进一步探索抑制PAD4减轻LPS诱导急性肺损伤的作用机制。研究方法第一部分:观察在脂多糖诱导急性肺损伤时肺组织中PAD4的表达变化本实验选择成年（6-8周）SPF级C57BL/6小鼠24只,体重约为20-25 g,随机分入Control组、Sham组、LPS 6 h组和LPS 24 h组,每组6只,分别进行不同实验处理。Control组:不给予干预措施;Sham组:小鼠气管内注射50 μl生理盐水;LPS 6 h组:小鼠气管内注射50μl LPS（1μg/g）构建急性肺损伤模型,建模6 h后进行相关检测;LPS 24 h组:小鼠气管内注射50μl LPS（1 μg/g）,建模24h后进行相关检测。Sham组在气管内注射6 h后进行相关检测,Control组与其同时检测。利用qRT-PCR和Western blot技术检测并比较四组小鼠肺组织PAD4的mRNA水平和蛋白水平变化;利用免疫组化染色技术检测并比较四组小鼠肺组织PAD4的免疫荧光强度的变化。第二部分:探索PAD4抑制剂TDFA对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用小鼠体内实验:选择成年（6-8周）SPF级C57BL/6小鼠54只,体重约为20-25 g,随机分入Sham组、LPS组和PAD4抑制剂TDFA组,每组18只,分别进行实验处理。Sham组:建模前1 h腹腔注射100 μl生理盐水,而后小鼠气管内注射50μl生理盐水;LPS组:建模前1 h于腹腔注射100 μl生理盐水,而后小鼠气管内注射50 μl LPS（1μg/g）;TDFA组:建模前1h通过腹腔注射100μl TDFA（20 mg/Kg）,随后通过小鼠气管内注射50 μ1 LPS（1μg/g）。气管注射后6 h检测并比较三组小鼠肺组织下列指标:肺组织PAD4蛋白表达水平及瓜氨酸化组蛋白H3（citrullined-histone 3,Cit-H3）表达水平;肺组织损伤情况及肺组织损伤病理评分;肺组织湿干比;肺组织中Ly6G+中性粒细胞数目及肺泡灌洗液中总活化细胞数目和中性粒细胞数目;肺组织氧化应激指标水平:包括超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）,丙二醛（malondialdehyde,MDA）和谷胱甘肽（glutathione,GSH）;肺组织中连接蛋白mRNA水平和蛋白表达水平:包括闭锁小带蛋白1（zonula occludens 1,ZO-1）、紧密结合蛋白（Claudin-4）和闭合蛋白（Occludin）。此外,根据实验设计将30只SPF级C57BL/6小鼠随机分为Sham组、LPS组和TDFA治疗组,每组10只,分别进行以下实验处理。Sham组:小鼠腹腔内注射100 μl生理盐水,1 h后气管内注射50 μl生理盐水;LPS组:小鼠腹腔内注射100 μl生理盐水,1 h后小鼠气管内注射致死剂量的LPS（40μg/g）50 μl;TDFA治疗组:小鼠腹腔注射100 μl TDFA（20 mg/Kg）,1 h后小鼠气管内注射致死剂量的LPS（40μg/g）50μl。三组小鼠建立模型后72 h内每12 h记录一次生存率。体外实验:将小鼠肺上皮细胞系（mouse lung epithelial 12,MLE-12）分为Sham组、LPS组和TDFA处理组。据上述分组,给予等量生理盐水或者利用100 nM TDFA预刺激MLE-12细胞,1 h后根据分组给予等量生理盐水或LPS（100 ng/ml）刺激MLE-12细胞。LPS刺激3h后检测并比较三组MLE-12细胞下列指标:氧化应激指标MDA、GSH和SOD的水平;连接蛋白ZO-1、Claudin-4和Occludin的mRNA水平和蛋白表达水平;利用跨细胞电阻仪检测并比较三组MLE-12细胞不同时间点（0 h,1 h,3 h）跨细胞电阻值（transepithelial electrical resistance,TEER）。第三部分:探索抑制PAD4减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用机制小鼠体内实验:将27只SPF级C57BL/6小鼠随机分为Sham组、LPS组和PAD4抑制剂TDFA组,每组9只动物。三组小鼠的实验处理同第二部分的小鼠体内实验。气管注射后6 h检测并比较:三组小鼠肺泡灌洗液中促炎细胞因子肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和白细胞介素1 β（interleukin 1β,IL-1 β）的含量;三组小鼠肺组织中细胞核内的P65（n-P65）,总P65（P65）以及磷酸化P65（p-P65）的表达水平。体外实验:将MLE-12细胞分为Sham组、LPS组和TDFA处理组,据上述分组,给予等量生理盐水或者利用100 nM TDFA预刺激MLE-12细胞,1 h后根据分组给予等量生理盐水或LPS（100 ng/ml）刺激MLE-12细胞,并于LPS刺激后3 h收集各组样本进行后续检测。qRT-PCR检测并比较三组MLE-12细胞促炎细胞因子 TNF-α、IL-6 和 IL-1 β 的 mRNA 水平;Western blot 检测并比较三组 MLE-12细胞Cit-H3的表达水平;检测并比较三组MLE-12细胞n-P65,P65及p-P65的表达水平。此外,利用激光共聚焦显微镜明确P65的核转位水平。研究结果第一部分:观察在脂多糖诱导急性肺损伤时肺组织中PAD4的表达变化Sham组小鼠肺组织中PAD4 mRNA表达水平和蛋白水平与Control组相比未见显着差异;LPS 6 h组和LPS 24 h组小鼠肺组织PAD4 mRNA水平及其蛋白水平较Sham组均显着增加;LPS 6 h组与LPS 24 h组相比,小鼠肺组织PAD4 mRNA水平及其蛋白水平均未见显着差异。免疫组化染色和平均光密度分析显示:与Control组相比,Sham组小鼠肺组织中PAD4的表达水平和平均光密度未见显着增加;与Sham组相比,LPS 6 h组、LPS 24 h组小鼠的肺组织内PAD4的表达水平和平均光密度均显着增高;LPS 6 h组与LPS 24 h组相比,小鼠肺组织PAD4的表达水平和平均光密度未见显着差异。第二部分:探索PAD4抑制剂TDFA对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用体内实验发现:与LPS组相比,TDFA组能够使PAD4蛋白表达及Cit-H3蛋白表达明显下降;TDFA组LPS诱导急性肺损伤小鼠肺组织病理损伤的严重程度及肺组织损伤病理评分均得到显着改善;TDFA组显着降低肺组织湿干比,减轻肺组织水肿程度;TDFA组显着减少小鼠肺组织中Ly6G+中性粒细胞数目及肺泡灌洗液中总活化细胞和中性粒细胞的数目;TDFA组显着改善肺组织内氧化应激指标MDA、GSH和SOD的水平;TDFA组显着逆转肺组织内连接蛋白ZO-1、Claudin-4和Occludin mRNA水平和蛋白水平表达下降;TDFA组显着改善致死剂量LPS诱导肺损伤小鼠的生存率。体外实验发现:与LPS组相比,TDFA组显着改善MLE-12细胞氧化应激指标MDA、GSH和SOD的水平;TDFA组显着改善细胞内连接蛋白ZO-1、Claudin-4和Occludin mRNA和蛋白水平表达下降;TDFA组显着逆转MLE-12细胞TEER值下降趋势。第三部分:探索抑制PAD4减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用机制体内实验表明:相比于LPS组,TDFA组显着减少肺泡灌洗液中促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1 β的含量;TDFA组显着抑制肺组织n-P65的高表达水平;TDFA组能够显着抑制LPS引起的p-P65的高水平表达;P65的表达水平在上述三组小鼠肺组织内未见显着差异。体外实验表明:相比于LPS组,TDFA组显着抑制MLE-12促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1 β的mRNA水平;TDFA组显着抑制MLE-12细胞Cit-H3蛋白水平;TDFA组显着抑制MLE-12细胞n-P65的高表达水平;与Sham组相比,LPS组体外刺激显着上调p-P65的表达水平,TDFA组体外预处理对p-P65的表达未见显着影响;P65表达水平在三组MLE-12细胞内未见显着差异。此外,激光共聚焦显微镜检测证实:Sham组P65分布在细胞质内;LPS组P65主要分布在细胞核内;而TDFA组P65部分分布在细胞核内,部分分布在细胞质内。结论小鼠体内实验发现:LPS诱导急性肺损伤模型动物肺组织PAD4的mRNA和蛋白水平显着增加。体内实验使用TDFA预处理:1、改善小鼠肺组织病理损伤严重程度及小鼠肺组织水肿程度;2、减少小鼠肺组织中性粒细胞和肺泡灌洗液炎症细胞浸润;3、改善致死剂量LPS诱导肺损伤小鼠的生存率。体内和体外实验使用TDFA预处理:1、降低小鼠肺组织和MLE-12细胞Cit-H3蛋白水平;2、改善肺组织和MLE-12细胞氧化应激指标MDA、GSH和SOD的水平;3、逆转肺组织和MLE-12细胞连接蛋白ZO-1、Claudin-4和Occludin mRNA水平和蛋白水平的表达下降;4、减少小鼠肺泡灌洗液促炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1 β的含量及MLE-12细胞上述促炎细胞因子mRNA水平;5、抑制小鼠肺组织和MLE-12细胞n-P65的高表达水平;6、体内实验TDFA抑制LPS引起的小鼠肺组织p-P65的高水平表达,体外实验TDFA对LPS引起的MLE-12细胞中p-P65的高表达未见显着影响。体外实验使用TDFA预处理:1、逆转了 LPS诱导的MLE-12细胞TEER下调;2、激光共聚焦显微镜检测证实:TDFA显着抑制MLE-12细胞内P65的核转位水平。研究提示:给予TDFA能够通过影响组蛋白H3的瓜氨酸化水平调控P65的核转位进而影响肺泡上皮细胞炎症因子的释放,改善了气管内注射LPS诱导的ALI的预后。PAD4对NF-κB-P65的瓜氨酸化可能是LPS诱导的肺损伤的潜在原因。本研究表明:TDFA是一种治疗ALI有效的方法,抑制PAD4可能成为治疗LPS诱导ALI的重要靶点。
二、Acute lung injury in 2003（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Acute lung injury in 2003（论文提纲范文）
（1）超短波调控NF-κB/TLR4信号通路抑制大鼠急性肺损伤炎症反应的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验场地、实验动物及分组 |
| 1.2 主要试剂与设备 |
| 1.3 建立急性肺损伤模型 |
| 1.4 超短波治疗方法 |
| 1.5 检测方法及指标 |
| 1.5.1 ELISA检测： |
| 1.5.2 HE染色： |
| 1.5.3 RT-PCR: |
| 1.5.4 Western Blot: |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 超短波治疗对肺组织病理学表现及肺损伤评分的影响 |
| 2.2 肺组织湿/干重比值测定 |
| 2.3 ELISA法测定血清炎症因子IL-6、TNF-α水平 |
| 2.4 RT-PCR检测NF-κB、TLR4的m RNA表达水平 |
| 2.5 Western Blot法测定NF-κB、TLR4的蛋白表达水平 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（2）呼吸机辅助通气治疗急性肺损伤的临床效果观察（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组患者治疗后动脉血气分析指标比较 |
| 2.2 两组患者治疗后的呼吸动力学指标比较 |
| 2.3 两组并发症发生情况及预后情况比较 |
| 3 讨论 |
（3）食管癌术后急性肺损伤及急性肾损伤的临床研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 食管癌术后急性肺损伤的风险 |
| 资料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 RALE评分 |
| 2.2 急性肺损伤 |
| 2.3 统计分析 |
| 结果 |
| 1 辅助诊断ALI的 RALE评分最佳截断值 |
| 2 识别ALI的新方法及其发生率 |
| 3 ALI发生的临床结果 |
| 4 术后ALI发生的围术期危险因素的单因素分析 |
| 5 术后ALI发生的围术期危险因素的多因素分析 |
| 6 肺塌陷侧和OLV侧 RALE评分的比较 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 食管癌术后急性肾损伤的危险因素分析 |
| 资料与方法 |
| 1 临床资料 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 术后AKI诊断标准 |
| 2.2 统计学分析 |
| 2.3 伦理审查和知情同意 |
| 结果 |
| 1 患者一般临床资料 |
| 2 术后AKI的单因素分析 |
| 3 术后AKI的多因素分析 |
| 4 术后AKI发生的临床结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述:胸外科术后急性肺损伤与急性肾损伤及其交互作用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 致谢 |
（4）扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 中药扶芳藤提取物、主要活性成分以及各萃取部位对炎症反应的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 扶芳藤提取物对LPS所致小鼠急性肺损伤的影响 |
| 2.2 MTT法测定扶芳藤提取物对RAW264.7细胞活力的影响 |
| 2.3 Griess法检测扶芳藤提取物对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
| 2.4 ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-6炎性因子分泌的影响 |
| 2.5 HPLC法测定正丁醇提取物的主要活性成分及含量 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞的影响及机制探究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 甜醇对RAW264.7细胞活力的影响 |
| 2.2 醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
| 2.3 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6的影响 |
| 2.4 醇对LPS诱导的RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、COX-2、iNOs、IL-6、IL-1β和TNF-α RNA表达的影响 |
| 2.5 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、蛋白表达的影响 |
| 2.6 甜醇对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的A549细胞的影响及机制的探究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 甜醇对A549 细胞活力的影响 |
| 2.2 醇对LPS诱导A549细胞分泌NO的影响 |
| 2.3 甜醇对LPS诱导A549细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65、COX-2、iNOs、IL-6、IL-1β和TNF-α RNA表达的影响 |
| 2.4 甜醇对LPS诱导A549细胞TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65蛋白表达的影响 |
| 2.5 甜醇对LPS诱导A549 细胞NF-κBp65核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 中药扶芳藤主要活性成分甜醇对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎作用及其作用机制探究 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺湿质量/干质量比值的影响 |
| 2.2 甜醇对LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺匀浆中IL-1β、TNF-α和IL-6含量的影响 |
| 2.3 甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠的肺组织病理学影响的影响 |
| 2.4 甜醇对LPS诱导急性肺损伤小鼠BALF中总蛋白浓度和细胞渗出数的影响 |
| 2.5 甜醇对肺组织细胞中的TLR4、Myd88、TRIF、NF-κB p65蛋白表达的影响 |
| 2.6 甜醇对肺组织细胞NF-κB p65核转位的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 炎症及其机制与急性肺损伤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）苯并恶唑酮类抗炎化合物W3D对MD2和TLR4蛋白调控作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 化合物W3D对 TLR4、MD2 蛋白表达调控的作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 化合物与细胞来源 |
| 1.1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 细胞培养的技术和方法 |
| 1.2.2 Western Blot法检测RAW264.7 细胞中TLR4、MD2、p-IRAK4 蛋白的表达 |
| 1.2.3 ELISA法检测RAW264.7 细胞上清液TLR4、MD2 蛋白的表达 |
| 1.2.4 细胞免疫荧光法检测RAW264.7 细胞中NF-κB p65 的核转移 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物W3D对 LPS诱导的RAW264.7 细胞TLR4、MD2、p-IRAK4 蛋白表达的影响 |
| 2.2 化合物W3D对 LPS诱导的RAW264.7 细胞NF-κB p65 核转移的影响 |
| 2.3 化合物W3D对 LPS诱导的RAW264.7 细胞上清液中TLR4、MD2 蛋白表达的影响 |
| 2.4 4-取代苯并恶唑酮类衍生物对LPS诱导的RAW264.7 细胞MD2 蛋白表达的构效关系分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 MD2抑制剂MD2-IN-1对化合物W3D抗炎活性的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞与化合物来源 |
| 1.1.2 仪器及试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 Griess法检测RAW264.7 细胞上清液中NO的含量 |
| 1.2.2 ELISA法检测细胞上清液中IL-6、TNF-α的释放量 |
| 1.2.3 Western Blot法测定RAW264.7 细胞中TLR4、MD2 蛋白的表达 |
| 1.2.4 免疫荧光法检测RAW264.7 细胞中NF-κB p65 的核转移 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后LPS诱导的RAW264.7 细胞上清液NO抑制活性的影响 |
| 2.2 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后LPS诱导的RAW264.7 细胞上清液IL-6、TNF-α抑制活性的影响 |
| 2.3 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后对 LPS诱导的RAW264.7 细胞中MD2、TLR4 蛋白表达的影响 |
| 2.4 化合物W3D对 MD2-IN-1 阻断后对 LPS诱导的RAW264.细胞中NF-κB p65核转移的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 化合物W3D与 MD2、TLR4 蛋白的相互作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 细胞与化合物来源 |
| 1.1.2 仪器及试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 流式细胞术检测FITC-LPS结合细胞膜表面受体的强度 |
| 1.2.2 DARTS技术与Western Blot联用检测MD2、TLR4 蛋白的酶解稳定性 |
| 1.2.3 CETSA技术与Western Blot联用检测MD2、TLR4 蛋白的热稳定性.. |
| 1.2.4 荧光光谱实验检测化合物与MD2 蛋白的结合 |
| 1.2.5 BLI生物层干涉技术检测化合物与MD2、TLR4 蛋白平衡解离平衡常数 |
| 1.2.6 分子对接法模拟化合物与MD2、TLR4 蛋白的相互作用 |
| 1.2.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物可以抑制FITC-LPS与 RAW264.7 细胞膜上LPS受体的结合 |
| 2.2 化合物W3D可增强MD2、TLR4 蛋白酶稳定性 |
| 2.3 化合物W3D可增强MD2、TLR4 蛋白热稳定性 |
| 2.4 化合物W3D可竞争性抑制bis-ANS与 rh MD2 蛋白结合 |
| 2.5 BLI技术检测化合物W3D与 MD2、TLR4 蛋白解离结合常数 |
| 2.6 化合物与MD2 蛋白分子对接结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第四部分 化合物W3D对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的药效学研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物及来源 |
| 1.1.2 仪器和试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 HE染色行肺组织病理学检查 |
| 1.2.2 肺组织湿干重比 |
| 1.2.3 小鼠肺组织中MPO(髓过氧化物酶)活性检测 |
| 1.2.4 ELISA法测定小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS的释放量 |
| 1.2.5 Western Blot法检测小鼠肺组织中TLR4、MD-2、p-IRAK4、NF-κB p65蛋白的表达水平 |
| 1.2.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 化合物W3D对LPS诱导的小鼠肺组织病理学的影响 |
| 2.2 化合物W3D对小鼠肺组织湿干重比的影响 |
| 2.3 化合物W3D对小鼠肺组织MPO活性的影响 |
| 2.4 化合物W3D对小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS含量的影响 |
| 2.5 化合物W3D对 TLR4、MD2、p-IRAK4、p65 蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文结论 |
| 结果展望 |
| 参考文献 |
| 综述 MD2抑制剂的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）细胞自噬在H9N2流感病毒致肺损伤中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 细胞自噬概述 |
| 1.1.1 细胞自噬分类 |
| 1.1.2 细胞自噬的过程 |
| 1.1.3 调节细胞自噬的信号通路 |
| 1.2 细胞自噬与病毒感染 |
| 1.2.1 病毒感染诱导细胞自噬的发生 |
| 1.2.2 病毒感染抑制细胞自噬 |
| 1.3 流感病毒 |
| 1.3.1 流感病毒概述 |
| 1.3.2 H9N2亚型流感及其公共卫生学意义 |
| 1.3.3 流感病毒的致病机制 |
| 1.4 流感病毒与细胞自噬 |
| 1.4.1 A型流感病毒感染促进自噬体的形成 |
| 1.4.2 A型流感病毒的M2、HA和 NS1 蛋白参与了自噬的诱导 |
| 1.4.3 自噬与流感病毒复制的关系 |
| 1.4.4 A型流感病毒与自噬体和溶酶体的融合 |
| 1.4.5 参与流感病毒诱导自噬的信号通路 |
| 1.5 细胞自噬和炎症反应 |
| 1.5.1 细胞因子对于自噬的调节 |
| 1.5.2 自噬调节炎症小体 |
| 1.5.3 自噬通过调节巨噬细胞的极化调节炎症反应 |
| 1.5.4 流感诱导的细胞自噬与炎症 |
| 1.6 细胞自噬和氧化应激作用 |
| 1.6.1 氧化应激作用刺激自噬的发生 |
| 1.6.2 自噬调节ROS |
| 1.6.3 流感诱导的细胞自噬与氧化应激 |
| 1.7 研究目的和意义 |
| 1.8 技术路线 |
| 2 H9N2流感病毒诱导A549细胞发生自噬的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 细胞与毒株 |
| 2.1.2 试剂与抗体 |
| 2.1.3 主要缓冲液的配制 |
| 2.1.4 主要实验仪器 |
| 2.1.5 细胞的培养与传代 |
| 2.1.6 稳定表达GFP-LC3细胞系的构建 |
| 2.1.7 激光共聚焦 |
| 2.1.8 病毒感染与药物处理 |
| 2.1.9 MTT分析 |
| 2.1.10 透射电子显微镜 |
| 2.1.11 Western blot |
| 2.2 数据统计 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 稳定表达GFP-LC3的A549细胞系的鉴定 |
| 2.3.2 MTT检测3-MA和CQ对A549细胞的影响 |
| 2.3.3 透射电镜观察H9N2流感病毒感染A549细胞引发细胞自噬 |
| 2.3.4 激光共聚焦观察H9N2流感病毒感染A549/GFP-LC3后GFP-LC3的点状聚集 |
| 2.3.5 Western blot检测H9N2流感病毒感染A549细胞后自噬相关蛋白的表达变化 |
| 2.3.6 H9N2流感病毒触发A549细胞发生完整的自噬反应 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 细胞自噬与H9N2流感病毒复制关系的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 细胞与毒株 |
| 3.1.2 试剂与抗体 |
| 3.1.3 siRNA合成 |
| 3.1.4 主要缓冲液的配制 |
| 3.1.5 主要实验仪器 |
| 3.1.6 细胞的培养与传代 |
| 3.1.7 病毒感染与药物处理 |
| 3.1.8 瞬时转染 |
| 3.1.9 MTT分析 |
| 3.1.10 TCID_(50)的测定 |
| 3.1.11 提取细胞总RNA |
| 3.1.12 反转录PCR(RT-PCR) |
| 3.1.13 Real-time PCR |
| 3.1.14 Western blot |
| 3.1.15 激光共聚焦 |
| 3.2 数据统计 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 MTT检测LY294002、rapamycin和Atg5siRNA对A549细胞活性的影响 |
| 3.3.2 自噬抑制剂对细胞自噬的影响 |
| 3.3.3 自噬抑制剂降低H9N2流感病毒的增殖 |
| 3.3.4 干扰自噬基因Atg5的效果鉴定 |
| 3.3.5 Atg5siRNA抑制H9N2流感病毒病毒的增殖 |
| 3.3.6 诱导自噬促进H9N2流感病毒的增殖 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 细胞自噬参与H9N2流感病毒所致A549细胞炎性因子释放的研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 细胞与毒株 |
| 4.1.2 试剂与抗体 |
| 4.1.3 引物合成 |
| 4.1.4 病毒感染与药物处理 |
| 4.1.5 瞬时转染 |
| 4.1.6 反转录PCR |
| 4.1.7 Real-time PCR |
| 4.1.8 Western blot |
| 4.2 数据统计 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 细胞自噬参与H9N2流感病毒所致A549细胞的炎症反应 |
| 4.3.2 自噬抑制剂减轻H9N2流感病毒所致A549细胞的炎症反应 |
| 4.3.3 Atg5 siRNA降低H9N2流感病毒所致A549细胞的炎症反应 |
| 4.3.4 自噬通过信号通路MAPK和NF-κB调节H9N2流感病毒所致A549细胞的炎症反应 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 细胞自噬参与H9N2流感病毒诱导A549细胞氧化应激作用的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 细胞与毒株 |
| 5.1.2 试剂与抗体 |
| 5.1.3 siRNA合成 |
| 5.1.4 病毒感染与药物处理 |
| 5.1.5 瞬时转染 |
| 5.1.6 TCID_(50)的检测 |
| 5.1.7 SOD1、ROS和MDA的检测 |
| 5.1.8 Real-time PCR |
| 5.1.9 Western blot |
| 5.2 数据统计 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 细胞自噬参与H9N2流感病毒所致A549细胞的氧化应激 |
| 5.3.2 自噬抑制剂降低了H9N2流感病毒所致A549细胞的氧化应激作用 |
| 5.3.3 Atg5 siRNA降低了H9N2流感病毒所致A549细胞的氧化应激作用 |
| 5.3.4 自噬通过调节氧化应激作用影响病毒的复制 |
| 5.3.5 信号通路Akt/TSC2/mTOR调节自噬介导的氧化应激从而参与H9N2流感病毒的复制 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 6 细胞自噬参与H9N2流感病毒诱导小鼠急性肺损伤的研究 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 毒株与动物 |
| 6.1.2 试剂与抗体 |
| 6.1.3 引物和siRNA的合成 |
| 6.1.4 实验动物分组与感染 |
| 6.1.5 siRNA的转染 |
| 6.1.6 临床症状和肺脏解剖病理变化的观察以及体重的称量 |
| 6.1.7 存活时间的测定 |
| 6.1.8 HE染色 |
| 6.1.9 小鼠W/D的检测 |
| 6.1.10 BALF内炎性细胞的测定 |
| 6.1.11 MPO的测定 |
| 6.1.12 SOD1、ROS和MDA的测定 |
| 6.1.13 荧光定量PCR |
| 6.1.14 Western blot |
| 6.2 数据统计 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 H9N2流感病毒诱导的急性肺损伤小鼠发生细胞自噬 |
| 6.3.2 H9N2流感病毒感染小鼠诱导完整的自噬反应 |
| 6.3.3 细胞自噬对小鼠临床症状、肺部解剖病理变化以及体重的影响 |
| 6.3.4 抑制自噬降低H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠死亡率 |
| 6.3.5 抑制自噬降低H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠肺水肿 |
| 6.3.6 抑制自噬降低H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠病理损伤 |
| 6.3.7 抑制自噬降低H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠BALF中炎性细胞数量 |
| 6.3.8 抑制自噬降低H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠肺脏MPO活性 |
| 6.3.9 细胞自噬参与H9N2流感病毒所致急性肺损伤小鼠肺脏炎性因子的释放 |
| 6.3.10 抑制自噬降低H9N2流感病毒感染小鼠炎性因子的释放 |
| 6.3.11 细胞自噬参与H9N2流感病毒所致的急性肺损伤小鼠氧化应激作用 |
| 6.3.12 3-MA抑制自噬降低了H9N2流感病毒感染小鼠的氧化应激作用 |
| 6.3.13 Atg5 siRNA降低了H9N2流感病毒感染小鼠的氧化应激作用 |
| 6.3.14 抑制自噬降低H9N2流感病毒感染小鼠肺脏的病毒滴度 |
| 6.3.15 自噬通过信号通路MAPK和NF-κB参与H9N2流感病毒所致小鼠的急性肺损伤 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 7 总体讨论 |
| 7.1 H9N2流感病毒在体内外均能诱导细胞自噬 |
| 7.2 细胞自噬与H9N2流感病毒的复制 |
| 7.3 细胞自噬介导H9N2流感病毒所致的炎性细胞因子和趋化因子的释放 |
| 7.4 细胞自噬参与H9N2流感病毒诱导的氧化应激作用的关系 |
| 7.5 细胞自噬参与H9N2流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤 |
| 8 结论 |
| 9 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（7）清热解毒类代表性方剂抗流感药效作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语（Abbreviation) |
| 前言 |
| 第一章 清热解毒类中药体内抗甲型流感病毒药效作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物与毒株 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 对致死性甲型流感病毒感染小鼠的体内抗流感作用 |
| 4.2 组方拆解与分析 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 第二章 复方银花解毒颗粒抗甲型流感病毒作用及机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物与毒株 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 药品配置 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 病毒滴度和感染剂量计算 |
| 2.2 细胞活力测定 |
| 2.3 FFYH有效成分指纹图谱分析 |
| 2.4 FFYH体外抗甲型流感病毒作用 |
| 2.5 FFYH对甲型流感病毒致死性小鼠的保护效应 |
| 2.6 FFYH对甲型流感病毒所致病毒性肺炎的保护作用 |
| 2.7 血常规检测 |
| 2.8 血清ELISA检测 |
| 2.9 小鼠肺组织细胞因子RT-PCR检测 |
| 2.10 Western blot 检测 |
| 3 数据处理 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 FFYH有效成分指纹图片分析 |
| 4.2 FFYH体外抗甲型流感病毒作用 |
| 4.3 FFYH对致死性甲型流感病毒感染小鼠的死亡保护效应 |
| 4.4 FFYH对甲型流感病毒诱导急性肺损伤的保护作用 |
| 4.5 FFYH对甲型流感感染小鼠血液指标的改善作用 |
| 4.6 FFYH对甲型流感病毒感染小鼠血清内炎症因子的抑制作用 |
| 4.7 FFYH对甲型流感病毒感染小鼠体内细胞因子表达的抑制作用 |
| 4.8 FFYH体内对TLR7/MyD88信号通路的抑制作用 |
| 4.9 FFYH体外对TLR7/MyD88信号通路的抑制作用 |
| 4.10 FFYH抑制TLR7/MyD88通路抗流感病毒性肺炎的作用机制 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 第三章 FFYH联合奥司他韦对高致死性流感病毒感染的保护作用及机制 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物与毒株 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 药品配置 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 FFYH与Ose联用对髙致死剂量甲型流感病毒感染小鼠的保护效应 |
| 2.2 FFYH与Ose联用对甲型流感病毒所致病毒性肺炎的保护作用 |
| 2.3 血常规检测 |
| 2.4 Western blot检测 |
| 3 数据处理 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 FFYH与Ose联用对致死性甲型流感病毒感染小鼠的死亡保护效应 |
| 4.2 FFTH与Ose联用对甲型流感病毒诱导急性肺损伤的保护作用 |
| 4.3 FFYH与Ose联用对甲型流感病毒感染小鼠血液指标的改善作用 |
| 4.4 FFYH与Ose联用对TLR7/MyD88信号通路的抑制作用 |
| 5 小结 |
| 6 讨论 |
| 总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| TLR4信号通路介导病毒性急性肺损伤与ARDS的研究进展 (综述） |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（8）紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 急性肺损伤研究进展 |
| 1 急性肺损伤概述 |
| 2 急性肺损伤发病机制 |
| 2.1 炎症反应 |
| 2.2 细胞凋亡 |
| 2.3 凝血/纤溶系统失衡 |
| 2.4 氧化应激 |
| 3 急性肺损伤治疗研究 |
| 3.1 机械通气治疗 |
| 3.2 药物治疗 |
| 4 常见急性肺损伤模型 |
| 4.1 机械通气法 |
| 4.2 LPS肺部或全身给药法 |
| 4.3 滴注活菌法 |
| 第二章 紫檀芪研究进展 |
| 1 紫檀芪理化性质 |
| 2 紫檀芪药理活性 |
| 2.1 紫檀芪的抗炎作用 |
| 2.2 紫檀芪的抗氧化作用 |
| 2.3 紫檀芪的抗肿瘤作用 |
| 2.4 紫檀芪的降血脂作用 |
| 2.5 紫檀芪的抑制真菌作用 |
| 3 紫檀芪检测方法 |
| 4 紫檀芪代谢研究 |
| 5 紫檀芪合成研究 |
| 第二篇 实验部分 |
| 第一章 紫檀芪对LPS致小鼠急性肺损伤保护效果的初步研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器及设备 |
| 1.4 所需试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及处理 |
| 2.2 小鼠急性肺损伤模型构建 |
| 2.3 实验样本采集 |
| 2.4 小鼠肺组织湿干重比值(W/D)的测定 |
| 2.5 小鼠肺组织病理学评估 |
| 2.6 小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数及蛋白浓度测定 |
| 2.7 小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的测定 |
| 2.8 小鼠肺组织氧化应激指标变化的测定 |
| 2.9 qRT-PCR检测小鼠肺组织中促炎性细胞因子mRNA的表达 |
| 2.10 Western blotting实验检测NF-κB和 Nrf2/HO-1 信号通路蛋白的表达 |
| 2.11 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠肺组织湿干重比值(W/D) |
| 3.2 紫檀芪减轻LPS诱导的ALI小鼠肺组织病理学变化 |
| 3.3 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数目与蛋白浓度 |
| 3.4 紫檀芪降低LPS诱导的ALI小鼠肺组织MPO活性 |
| 3.5 紫檀芪提升LPS诱导的ALI小鼠肺组织抗氧化能力 |
| 3.6 紫檀芪抑制LPS诱导ALI小鼠肺组织中促炎性细胞因子mRNA表达 |
| 3.7 紫檀芪抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织中NF-κB信号转导通路 |
| 3.8 紫檀芪激活LPS诱导的ALI小鼠肺组织中Nrf2/HO-1信号转导通路 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 紫檀芪对LPS致雏鸡肺损伤保护效果的观察 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验药品及试剂 |
| 1.3 主要仪器及设备 |
| 1.4 所需试剂配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组及给药操作方法 |
| 2.2 实验样本采集 |
| 2.3 雏鸡肺组织眼观病变及湿干重比值(W/D)的测定 |
| 2.4 雏鸡肺组织病理学评估 |
| 2.5 雏鸡肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的测定 |
| 2.6 雏鸡肺组织氧化应激指标变化的测定 |
| 2.7 qRT-PCR检测雏鸡肺组织中促炎性细胞因子mRNA的表达 |
| 2.8 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 紫檀芪提升LPS致 ALI雏鸡体重增长率 |
| 3.2 紫檀芪减轻LPS致 ALI雏鸡肺脏眼观病变 |
| 3.3 紫檀芪降低LPS致 ALI雏鸡肺组织湿干重比值(W/D) |
| 3.4 紫檀芪减轻LPS致 ALI雏鸡肺组织病理学变化 |
| 3.5 紫檀芪降低LPS致 ALI雏鸡肺组织MPO活性 |
| 3.6 紫檀芪提升LPS致 ALI雏鸡肺组织抗氧化能力 |
| 3.7 紫檀芪抑制LPS致 ALI雏鸡肺组织中促炎性细胞因子mRNA表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（9）M2巨噬细胞在脂多糖诱导肺纤维化中的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 M2型巨噬细胞对急性肺损伤炎症反应的影响 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 仪器设备及耗材 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 操作及指标测定操作流程 |
| 2.5 统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 LPS诱发ALI1 周后,BALF中存在大量的M2 型巨噬细胞 |
| 3.2 LPS诱发ALI1 周后使用氯膦酸二钠脂质体,显着减轻小鼠PF |
| 3.3 ALI1 周小鼠BALF中分离获得的M2 型巨噬细胞,明显促进AMP增殖、肌成纤维细胞分化、胶原分泌 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 M2 巨噬细胞外泌体对急性肺损伤后调控PF的机制研究 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 仪器设备及耗材 |
| 2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 操作及指标测定操流程 |
| 2.5 统计分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 ALI1 周小鼠BALF中 M2 型巨噬细胞分泌的外泌体,明显促进AMP增殖、肌成纤维细胞分化、胶原分泌 |
| 3.2 经M2 型巨噬细胞外泌体刺激,AMP中总RNA的 m6A和 METTL3蛋白水平显着升高,METTL3 m RNA水平无明显改变。 |
| 3.3 M2 型巨噬细胞外泌体中存在较高丰度的METTL3 蛋白 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 总结和展望 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 巨噬细胞在急性肺损伤/ARDS中的作用 |
| 参考文献 |
（10）肽酰基精氨酸脱亚氨酶4在脂多糖诱导急性肺损伤中的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ENGLISH ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分 观察在脂多糖诱导急性肺损伤时肺组织中PAD4的表达变化 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 附录、附图表 |
| 第二部分 探索PAD4抑制剂TDFA对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 附录、附图表 |
| 第三部分 探索抑制PAD4减轻脂多糖诱导急性肺损伤的作用机制 |
| 一、材料与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 附录、附图表 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 肽酰基精氨酸脱亚氨酶4临床疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
四、Acute lung injury in 2003（论文参考文献）
- [1]超短波调控NF-κB/TLR4信号通路抑制大鼠急性肺损伤炎症反应的研究[J]. 杨璐,屈萌艰,刘静,王婷,刘丹妮,黄夏荣,王金玲,周君. 中国康复医学杂志, 2021(10)
- [2]呼吸机辅助通气治疗急性肺损伤的临床效果观察[J]. 兰天,李亚平. 中国现代药物应用, 2021(16)
- [3]食管癌术后急性肺损伤及急性肾损伤的临床研究[D]. 冷晓亮. 青岛大学, 2021
- [4]扶芳藤提取物及主要活性成分甜醇对LPS诱导小鼠急性肺损伤的作用及机制研究[D]. 郑璐. 山西医科大学, 2021(01)
- [5]苯并恶唑酮类抗炎化合物W3D对MD2和TLR4蛋白调控作用的研究[D]. 高晓慧. 山西医科大学, 2021
- [6]细胞自噬在H9N2流感病毒致肺损伤中的作用及其机制研究[D]. 张瑞华. 内蒙古农业大学, 2021(01)
- [7]清热解毒类代表性方剂抗流感药效作用及机制研究[D]. 张雨茜. 扬州大学, 2021(08)
- [8]紫檀芪对LPS致肺损伤保护效果的初步研究与应用[D]. 张勇. 吉林大学, 2021(01)
- [9]M2巨噬细胞在脂多糖诱导肺纤维化中的作用及机制[D]. 石小云. 南昌大学, 2021(01)
- [10]肽酰基精氨酸脱亚氨酶4在脂多糖诱导急性肺损伤中的作用和机制研究[D]. 赵晓虹. 山东大学, 2021(12)