一、内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响（论文文献综述）
李晓文[1]（2021）在《基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制》文中提出研究背景糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是指在高糖状态下出现的以心脏结构和功能异常为主要特征的病理改变,是糖尿病相关心脏并发症之一。糖心平胶囊（tangxinping capsule,TXPC）是用于治疗和改善糖尿病心脏病的中药制剂,但其机制仍不十分明确。本研究基于北京市科委课题“十病十药研发-治疗糖尿病合并冠心病新药糖心平胶囊成药性研究”,整合网络药理学和动物实验验证的研究方法,挖掘和验证TXPC药效及机制。研究目的通过网络药理学分析结合动物实验验证的研究方法挖掘并评价TXPC对DCM的治疗作用及机制探究。研究方法1、方法一:本研究通过TCMSP、ETCM、TCMID、BATMAN中药材化学信息数据库挖掘TXPC组方中的活性成分化合物;通过Pubchem及Swiss Target Prediction平台预测筛选出组方作用靶点;通过Cytoscape软件构建TXPC药物-成分-靶点网络,利用Network Analyze插件分析筛选出TXPC组方中的核心成分;通过OMIM、Disgenet和Genecards疾病靶点数据库构建DCM靶点合集;通过R Studio软件映射出TXPC靶点及DCM靶点交集;利用String在线蛋白功能分析网站构建TXPC-DCM-靶点网络,并导入Cytoscape软件进行可视化,构建PPI网络,通过Network Analyze分析筛选出PPI网络的核心靶点;通过MCODE插件对PPI网络进行模块分析;最后通过Matescape在线富集分析平台对PPI网络进行GO及KEGG分析,得到核心靶点的生物过程（BP）、分子功能（MF）、细胞组成（CC）及富集通路分析结果。2、方法二:本实验采用高脂饮食喂养联合小剂量STZ腹腔注射的方法制备DCM大鼠模型。在高脂饮食喂养4周后一次性予35mg/kg STZ腹腔注射,STZ注射6周后,采用随机数字法将高脂喂养大鼠分为模型组（Model）、糖心平高（TXPG）、中（TXPZ）、低剂量（TXPD）组及二甲双胍组（Met）,正常饮食组为正常对照组（Control）。分组后连续给药6周,正常对照组和模型对照组采用0.9%NaCl溶液1ml/100g灌胃;糖心平低、中、高剂量组分别使用0.21g/kg、0.42g/kg、0.84g/kg TXPC药粉水溶液1ml/100g灌胃;二甲双胍组采用每日0.15g/kg二甲双胍药粉水溶液1ml/100g灌胃。给药时于第2、4、6周测大鼠空腹血糖;给药结束后,生化测大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、INs水平,计算HOMA-IR 值;ELISA 检测大鼠血清 CKMB、CRP、BNP、6-KPG、ET-1、TXB2、MDA水平,并通过心脏病理切片观察心肌组织损伤情况,以明确TXPC对DCM的治疗作用;通过心脏超声检查评估心脏功能,利用舌下注射垂体后叶加压素制备大鼠急性心肌缺血模型,观察TXPC治疗后大鼠心电图ST-T段位移;进一步组织学检测DCM大鼠心肌组织 TNF-α、IL-1β、SOD、ATP、ADP、ATP/ADP 水平,蛋白印迹法检测大鼠心肌 NF-κBp65、GLUT4、TGF-β1、PI3KP85、P-AKT、P-GSK3 β 蛋白及 PI3KP85mRNA、P-AKT mRNA、P-GSK3βmRNA、NF-κBp65 mRNA、GLUT4 mRNA转录水平,以探究TXPC药效机制。研究结果1、方法一结果:糖心平组方中活性有效成分共107个;核心成分包括:槲皮素、山奈酚、木犀草素等;共得到对应靶点192个,关键靶点主要包括:AKT1、EGFR、SRC等;通过模块分析共聚类出4个功能模块,其中模块1和模块2所包含靶点数目较多,对糖心平胶囊对糖尿病心肌病的整体治疗效果具有较强的代表性;共富集到生物过程961个;分子功能75个;细胞组成60个;信号通路218条,能通过PI3K/Akt信号通路、MAPK信号通路、内分泌抵抗等途径发挥对DCM的治疗作用。2、方法二结果:①TXPC能够改善DCM大鼠的FPG,降低大鼠TG、TC、LDL-C水平,同时升高HDL-C水平,减轻心肌组织中的脂质沉积,发挥调节糖脂代谢得作用;②TXPC能够降低心肌损伤指标CRP、BNP、CKMB水平,改善心肌纤维断裂、损伤等,可能通过降低炎症水平,发挥心肌保护效应;③TXPC能够降低血清ET-I及TXB2,同时升高6-KPG水平,调节血管内皮细胞功能,预防心肌微血管病变;④TXPC能够降低血清MDA水平,缓解氧化应激损伤;⑤TXPC能降低DCM大鼠LVIDs水平,升高LVIDD、SV、FS及EF水平,维持心脏结构及形态的稳定,从而发挥心肌保护的作用;⑥TXPC能抵抗加压素所引起的ST-T抬高,提高心肌对急性心肌缺血的抵抗能力,从而发挥心脏保护的作用。⑦TXPC能提高DCM大鼠的ATP及ATP/ADP水平,促进GLUT4蛋白及GLUT4 mRNA转录水平的表达,通过激活PI3K/AKT/GLUT4信号通路,调节DCM大鼠能量代谢;⑧TXPC能降低DCM大鼠TNF-α水平,同时降低促炎因子IL-1β水平,抑制NF-κB蛋白表达及NF-κBmRNA转录,通过激活PI3K/AKT/NF-κB信号通路,发挥抑制炎症的作用;⑨TXPC能降低DCM大鼠GSK3β蛋白表达水平,同时降低大鼠大TGF-β1及SOD水平,通过激活PI3K/AKT/GSK-3β信号途径抑制GSK-3β蛋白及GSK-3βmRNA转录表达,发挥抗心肌细胞损伤的作用;TXPC能促进PI3K/AKT通路上靶蛋白PI3K、AKT的磷酸化及表达,同时能促进PI3KP85mRNA、p-AKT mRNA的转录水平的提高,提示TXPC对DCM治疗效应的发挥,与PI3K/AKT通路有关。研究结论1、网络药理学分析结果显示,TXPC能通过PI3K/AKT信号通路,发挥对DCM的治疗作用;2、TXPC能调节糖脂代谢,改善炎症,降低氧化应激水平,发挥血管内皮细胞保护的作用;保护心功能、抗心肌缺血,具有心脏保护的作用;3、TXPC药效的发挥与PI3K/AKT信号通路有关,通过激活PI3K/AKT信号通路,从PI3K/AKT/GLUT4、PI3K/AKT/GSK-3β及PI3K/AKT/NF-κB途径发挥对DCM的治疗作用。
王耀振[2]（2021）在《基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制》文中研究指明二型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）是全球范围内的主要健康问题,其对血管可产生严重的危害作用,即糖尿病血管病变,这也是导致T2DM患者致残致死的主要原因。胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）作为T2DM的典型特点,不仅是促进其发生发展的关键因素,还是代谢综合征导致内皮功能障碍的重要原因。内皮是血管的第一道屏障,承担多种自分泌、旁分泌和内分泌功能,而内皮功能障碍是血管功能障碍的早期致病事件,其与IR相互促进,共同在糖尿病心血管并发症中发挥了重要作用。肾素血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）是一种具有内分泌特点的肽能系统,主要负责维持血压和水电解质的平衡,其中血管紧张素转化酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）/血管紧张素II（angiotensin II,Ang II）/血管紧张素1型受体（angiotensin type 1 receptor,AT1R）轴在糖尿病及其并发症的发生发展中起到了重要作用,该轴的关键效应分子-Ang II,参与多种病理生理过程,包括氧化应激、炎症反应、纤维化、肥大和内皮功能障碍等。血管紧张素转化酶2（angiotensin-converting enzyme 2,ACE2）/血管紧张素1-7[angiotensin-（1-7）,Ang-（1-7）]/Mas轴拮抗了ACE/Ang II/AT1R轴的功能,其保护作用不仅依赖于对Ang II的降解,还依赖于生成Ang-（1-7）作用于Mas所产生的抗氧化、抗炎、抗肥大、血管舒张及改善内皮功能障碍等作用。尽管有研究表明ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴可改善代谢IR,并且Ang-（1-7）可改善db/db小鼠内皮功能障碍和Ang II诱导的内皮细胞IR,但ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴与内皮IR的相关研究仍鲜有报道,因此进一步研究其与内皮细胞IR的关系有助于深入理解IR的分子机制,从而以新的角度防治糖尿病心血管并发症。人参皂苷Rc是原人参二醇组皂苷的单体成分并且是人参皂苷的主要成分之一,有关人参皂苷Rc药理活性的研究相对较少,仅有少数研究报道了其具有强大的抗炎和抗氧化活性,而人参皂苷Rc对糖尿病心血管并发症是否具有潜在的保护作用尚不清楚。其同分异构体人参皂苷Rb2与人参皂苷Rb3已被证实具有显着的心血管保护作用,并且还有研究表明了人参皂苷与RAS具有密切关系。鉴于炎症和氧化应激是导致IR的关键机制以及ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴在心血管疾病中的重要保护作用,我们推测人参皂苷Rc可能通过激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴改善内皮IR与内皮功能障碍,故开展此研究对其进行初步验证。我们首先应用高糖（high glucose,HG）建立了人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）IR模型（30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h）。实验结果显示,HG对HUVECs的存活率和形态无明显影响;HG可显着降低HUVECs的NO分泌含量并升高ET-1 mRNA水平,提示其破坏了血管舒缩因子的平衡;HG可显着降低HUVECs的p-IRS1Tyr896、p-PI3K p85Tyr607、p-Akt Ser473及p-eNOSSer1177水平并升高p-IRS1Ser307水平,提示其损害了胰岛素信号转导;HG可显着减少HUVECs的ACE2及Mas蛋白表达,提示其可能损害了ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴的保护作用。以上结果表明HG成功诱导HUVECs IR并可减少ACE2及Mas蛋白表达。我们进而加入人参皂苷Rc（25、50 mmol/L）与HG同步处理,观察其对HUVECs IR是否具有改善作用。实验结果显示,人参皂苷Rc可显着升高HUVECs的NO分泌含量并降低ET-1 mRNA水平,提示其纠正了血管舒缩因子的失衡;人参皂苷Rc可减少HUVECs的ROS产生,显着降低培养液上清MDA含量并升高SOD活性,提示其增强了HUVECs的抗氧化应激能力;人参皂苷Rc可显着降低HUVECs的TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA水平,提示其增强了HUVECs的抗炎能力;人参皂苷Rc可显着降低HUVECs培养液上清Ang II含量,进一步升高Ang-（1-7）含量,增加ACE2及Mas蛋白表达,而HG或人参皂苷Rc对ACE2及Mas mRNA水平无明显影响,提示人参皂苷Rc可通过非转录调控方式激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴;人参皂苷Rc可显着升高HUVECs的p-IRS1Tyr896、p-PI3K p85Tyr607、p-AktSer473及p-eNOSSer1177水平并降低p-IRS1Ser307水平,提示其恢复了胰岛素信号转导;人参皂苷Rc可显着减少NOX2蛋白表达,降低p-IKKβSer177/181、p-JNKThr183/Tyr185及p-NF-κB p65Ser536水平,提示其抑制了IR相关的氧化应激和炎症信号。以上结果表明,人参皂苷Rc可能通过抗氧化、抗炎和上调ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴改善内皮IR。为进一步明确人参皂苷Rc改善内皮IR的潜在机制,我们应用ACE2特异性抑制剂MLN-4760（100 nmol/L）与HG及人参皂苷Rc同步处理。实验结果显示,MLN-4760可显着抑制人参皂苷Rc纠正血管舒缩因子失衡、抗炎、激活ACE2/Ang-（1-7）/Mas轴、恢复胰岛素信号转导及抑制IR相关氧化应激和炎症信号的作用;然而,MLN-4760未能抑制人参皂苷Rc减少HUVECs的ROS产生、降低培养液上清MDA含量并升高SOD活性的作用,提示人参皂苷Rc具有独立于ACE2的抗氧化应激能力。以上结果表明,人参皂苷Rc的抗氧化及抗炎作用一定程度上依赖于上调ACE2,并且其通过上调ACE2改善了内皮IR。基于体外实验结果,我们应用T2DM模型的db/db小鼠和MLN-4760,进一步观察人参皂苷Rc是否对在体的内皮功能障碍同样具有改善作用及其机制是否同样依赖于上调ACE2。实验结果显示,人参皂苷Rc对db/db小鼠体重、空腹血糖、血清脂质（TC、TG、LDL-C、HDL-C）及胰岛素含量无明显影响,提示其无降血糖及调血脂的作用;人参皂苷Rc可显着降低db/db小鼠血清TNF-α含量,提示其在体内同样具有抗炎作用,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc对db/db小鼠血清Ang II、Ang-（1-7）及主动脉Ang-（1-7）含量无明显影响,但可显着降低主动脉Ang II含量并增加ACE2及Mas蛋白表达,提示其在体内同样可上调ACE2及Mas,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc可显着改善db/db小鼠胸主动脉内皮依赖性舒张并恢复Akt/eNOS信号转导,提示其在体内可改善内皮功能,而这种作用被MLN-4760显着拮抗;人参皂苷Rc可显着减少db/db小鼠主动脉NOX2及NOX4蛋白表达,提示其在体内同样具有抗氧化作用,而MLN-4760可一定程度拮抗这种作用。以上结果表明,人参皂苷Rc可改善db/db小鼠主动脉内皮功能障碍,其机制可能更依赖于降解Ang II而不是生成Ang-（1-7）,且不依赖于对血糖和血脂的调节。综上所述,本研究从细胞水平和整体动物水平上,证实了人参皂苷Rc可通过上调ACE2蛋白改善HUVECs IR及db/db小鼠内皮功能障碍,不仅发现了人参皂苷Rc的新作用及其潜在机制,还为防治糖尿病心血管并发症提供了新的视角。
孙敬辉[3]（2021）在《miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究》文中指出心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是众多心血管疾病发展至后期常见的病理改变,常常引起心肌收缩和舒张功能障碍,是心室重构不断进展和不可逆的主要原因。MF的发病机制十分复杂,涉及到神经体液、生长因子、促炎性细胞因子和基因转录之间复杂的相互作用。心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）是MF最主要的效应细胞,可在缺血、炎性因子等促纤维化因素的刺激下分化为肌成纤维细胞。激活的肌成纤维细胞会分泌大量的细胞外基质蛋白,导致心室硬度增加,顺应性降低和心肌电信号传导异常,诱发难治性心力衰竭、恶性心律失常,严重影响心血管疾病的预后。目前MF的治疗尚缺乏特效药物,因此探寻MF发病机制的关键因子及安全可靠的治疗药物,对于MF的治疗刻不容缓。MircoRNAs（miRNAs）是一类在真核细胞中广泛表达的短链非编码RNA。它们可以直接与靶基因的3’UTR区域结合,诱导靶基因mRNAs分解或阻碍其翻译,从而调节多种生理功能和病理过程。miR-489在心肌细胞和CFs中广泛表达。在心肌细胞中miR-489过表达能够下调下游髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,myd88）的水平,减轻血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥厚。重要的是,miR-489转基因小鼠体内AngⅡ诱导的MF明显减轻,说明miR-489能够抑制AngⅡ诱导的MF,miR-489可能是治疗MF的一个潜在靶点。然而,miR-489在MF中的调控机制尚不清楚,尤其是在心肌梗死诱导的MF中miR-489是否也具有同样作用值得进一步研究。中医学中没有MF的直接论述,但MF是众多心血管疾病发展至后期的病理改变,是一种相对慢性渐进性病变。中医传统理论认为“久病多虚”、“久病多瘀”,因此治疗当以补气活血为法。人参是传统医学中补气的要药,具有补益元气,健脾补肺,安神益智等功效,以及抗心肌缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等药理作用。人参皂苷Re是人参的主要活性成分之一,课题组前期研究发现,人参皂苷Re具有抗心肌梗死后MF的作用,并且可以调控Smad2/3的表达。既往研究证实,Smad3是miR-489的直接下游靶点,那么人参皂苷Re是否可以通过调节miR-489来发挥抗MF的作用,值得进行深入研究。本研究通过体外构建miR-489过表达和抑制的CFs模型,证实miR-489对MF和myd88/核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路具有调控作用。在此基础上,以人参皂苷Re为干预手段,通过结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死小鼠模型和AngⅡ干预的乳鼠原代CFs模型,观察人参皂苷Re的抗MF作用,并探讨人参皂苷Re对miR-489及其下游myd88/NF-κB通路的调控作用,为中医药抗MF,改善心血管疾病患者的预后提供科学依据。研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究目的:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic和inhibitor观察miR-489模拟物和抑制物对CFs表型分化、迁移和分泌等细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:提取乳鼠原代CFs,经波形蛋白免疫荧光鉴定纯度后,按照如下分组:（1）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs分为3组:正常组（Normal）、miR-489过表达组（mimic）、miR-489阴性对照组（mimic-NC）。（2）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 过表达组（AngⅡ+mimic）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+mimic-NC）。（3）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:正常组（Normal）、miR-489 抑制组（inhibitor）、miR-489阴性对照组（inhibitor-NC）。（4）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 抑制组（AngⅡ+inhibitor）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+inhibitor-NC）。采用qPCR技术检测miR-489 mimic转染的CFs中miR-489的表达水平,验证转染效果。采用Western blot技术检测各组中α-SMA的表达情况,观察CFs的分化情况;检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达,观察CFs胶原蛋白的分泌情况;检测CFs中myd88、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况,观察miR-489的调控作用。结果:（1）经波形蛋白免疫荧光检测证实提取的CFs纯度在95%以上,符合实验要求。（2）与Normal组和mimic-NC组比较,mimic组miR-489的表达水平显着升高（P<0.01）,Normal组和mimic-NC组之间无显着性差异（P>0.05）,说明 miR-489 mimic 转染成功。与 Normal 组和 inhibitor-NC 组相比,inhibitor 组myd88表达显着上调（P<0.01）,Normal组和inhibitor-NC组之间无统计学差异（P>0.05）,说明miR-489 inhibitor转染成功。（3）在正常条件下培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中,miR-489过表达均能够显着抑制myd88、α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达,降低p-NF-κB p65/p65的比值;抑制miR-489能够促进myd88、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的表达,上调 p-NF-κBp65/p65 的比值。结论:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中miR-489过表达均能够抑制下游myd88/NF-κB通路的活化,减轻CFs的纤维化反应;抑制miR-489能够激活下游myd88/NF-κB信号通路,促进CFs的纤维化反应。这表明在生理和病理情况下CFs中miR-489均可调节myd88/NF-κB信号通路,改善心肌纤维化反应。研究二人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究目的:观察人参皂苷Re对急性心肌梗死后小鼠心功能、血清学标志物、组织病理学改变和相关基因蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Re改善梗死后MF的分子机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死后MF模型。小鼠被随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量人参皂苷Re组（L,19.5mg/kg/d）和高剂量人参皂苷Re组（H,39mg/kg/d）,每组10只。术后第二天开始灌胃给药,1次/天,连续灌胃四周。心脏超声检测各组小鼠左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,观察心功能情况;通过心重指数（HWI）、心胫比（HW/TL）以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达,观察心梗后心肌代偿性肥厚情况;通过ELISA方法检测血清中心肌损伤（CK-MB）、心力衰竭（BNP）、肝肾功能（ALT、S-Cr）和 RAAS（AngⅡ）等标记物的含量;通过HE和Masson染色,观察心梗后心肌组织及纤维化的病变情况;Western blot 检测 myd88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等相关蛋白表达;qPCR技术检测miR-489和myd88的表达形况。结果:（1）与Sham组相比,Model组LVEF和LVFS显着减低（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组LVEF和LVFS明显升高（P<0.01）。（2）与Sham组比较,Model组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着升高（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着下降（P<0.05）,ALT 和 S-Cr 无明显变化（P>0.05）。（3）与 Sham 组比较,Model组HWI、HW/TL以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达显着升高（P<0.01）,给以低高剂量人参皂苷Re干预后,这些指标明显下降（P<0.05）。（4）与Sham组比较,Model组心肌结构排列紊乱,肌丝较粗,呈波状变化,伴有大量炎症细胞浸润和胶原蛋白沉积。给予人参皂苷Re干预后组织病理改变明显减轻。（5）与 Sham 组比较,Model 组 myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的表达明显升高,miR-489的表达显着下调（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达明显降低,miR-489的表达显着上调（P<0.05）。以上检测中低高剂量人参皂苷Re组之间无统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够改善心肌梗死后小鼠的心脏功能,抑制心肌代偿性肥厚,减轻心肌缺血损伤和胶原蛋白沉积,改善组织病理学病变,且未发现明显肝肾毒性。其机制可能与调节心肌梗死后小鼠心肌中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究目的:采用AngⅡ诱导C57BL/6乳鼠原代CFs,观察人参皂苷Re对CFs分化、迁移和分泌等生物学行为的影响,并探讨其相关机制。方法:提取乳鼠原代CFs后,通过CCK-8法筛选人参皂苷Re的安全浓度范围。CFs被随机分为5组:正常组（Normal）、模型组（Model）和人参皂苷Re低、中、高剂量组。给以相应药物处理后,收集细胞进行相关检测。采用Transwell实验和划痕实验检测各组CFs的迁移情况;采用免疫荧光和Western blot技术检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达情况,观察CFs分化为肌成纤维细胞和胶原蛋白的分泌情况;通过qPCR技术和Western blot技术检测miR-489、myd88、NF-κB p65 和 p-NF-κBp65 的表达情况。结果:（1）经 CCK-8 法选定 50μmol/L、100μmol/L 和 200μmol/L 为人参皂苷Re的干预浓度。（2）与Normal组比较,Model组穿过Transwell小室的CFs数量显着增多,迁移距离明显增长（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能减少穿过Transwell小室的CFs数量,缩短迁移距离（P<0.01）。（3）与 Normal 组比较,Model 组α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量均明显升高（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能降低α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量（P<0.01）。（4）与Normal组比较,Model组miR-489水平显着降低,myd88的表达和p-NF-κB p65/p65比值显着升高（P<0.01）,低中高剂量人参皂苷Re均能抑制这种趋势（P<0.05）。以上检测中低中高剂量人参皂苷Re组之间未发现统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够抑制AngⅡ诱导的CFs迁移、表型分化和分泌等生物学行为的改变;其机制可能与调节AngⅡ诱导的CFs中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。
于天宇[4]（2021）在《糖尿病肾病肾脏病理改变与预后关系的研究》文中提出背景:全球约10%的医药卫生方面的支出用于负担糖尿病（diabetes mellitus,DM）,而糖尿病肾病（diabeticnephropathy,DN）作为DM的一种严重和危险的微血管并发症,在全球范围内已成为导致终末期肾脏病（end stage renal disease,ESRD）的主要病因。在我国,DN患者数量迅猛增加,已成为肾病科常见住院病因,同时也是维持性血液透析替代治疗的第二大病因。目前常规治疗为使用血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI）或者血管紧张素受体阻断剂（angiotensin Ⅱ receptor blocker ARB）,通过抑制肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）的过度激活,来延缓DN的进展。这其中包括血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）、血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）及Mas受体（MasR）是最为普遍且公认的三个受体,还有近几年逐渐被人们关注的MrgD受体,其作为RAS系统的新成员,在DN中的表达和对预后的影响目前我们知之甚少。此外,钠-葡萄糖协同转运蛋白2（sodium-glucosecotransporter 2,SGLT2）抑制剂是一类新型降糖药物,也是目前研究热点。它可以通过抑制上述转运体,抑制尿液中大部分葡萄糖和钠的重新吸收,从而起到控制高血糖的目的。而这一过程是否会对DN患者的肾脏局部RAS系统有所影响?这些都是目前临床中亟待回答的问题。目的:（1）探讨肾小球基底膜（glomerular basementmembrane,GBM）增厚与DN的关系。（2）探究慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）4期DN病理改变、血管紧张素受体表达与预后关系。（3）SGLT2抑制剂对肾脏局部AT1R、AT2R、MasR和MrgD受体表达的影响,以及对肾脏纤维化的影响和机制的初步探索。方法:（1）研究对象为2017年1月1日至2020年12月30日在中日友好医院接受治疗且经肾活检穿刺的患者,结合临床病史和病理诊断分为四组:对照组、高血压组、糖尿病组、DN组,通过电子显微镜测量各组的GBM厚度。同时对61例单纯DN患者的GBM厚度与肾脏病理、及预后的关系进行分析。（2）选取2006年1月1日至2020年5月31日在中日友好医院接受肾穿刺活检病理诊断为单纯DN的患者,入院后检测肾功能 15 mL/（min·1.73m2）<eGFR<30mL/（min·1.73m2）,共 46例。收集临床及病理数据,用药治疗史等,同时通过免疫组织化学方法检测AT1R、AT2R、MasR和MrgD表达情况,并比较其在肾功能进展组与稳定组中表达的差异。（3）利用自发糖尿病模型db/db小鼠确定DN模型成立的周龄,并将db/db小鼠分为:模型对照组（n=15）和达格列净组（n=15）,与m/m正常对照组（n=15）分为3组。在12周龄、16周龄、20周龄时分别取材5只,收集血、尿样本进行检测,利用免疫组织化学方法,检测小鼠石蜡肾组织中RAS系统受体:AT1R、AT2R、MasR 和 MrgD 的表达,同时检测 fibronectin、laminin、Collagen Ⅳ 和 α-SMA 的表达。结果:（1）122例患者中,对照组23例,高血压组18例,糖尿病组20例,单纯DN组61例,GBM平均厚度在基线时分别为367.9±46.2nm,458.1±82.1nm,427.7±50.2nm,684.5±158.1nm。高血压组和糖尿病组中分别有8例和7例GBM厚度超出正常范围。61例单纯DN患者中,肾小球病理分型Ⅲ+Ⅳ型组患者的GBM厚度大于Ⅰ+Ⅱa型组患者的GBM厚度,存在明显统计学差异,整体中位随访期为16.7个月（5-43个月）。尿蛋白定量、糖尿病病程等临床参数与GBM厚度无相关性和统计学意义。（2）稳定组17例,进展组29例。其中使用ARB组的中位生存期为25.3个月,不使用ARB组则为12.7个月。整体肾脏中位生存期为17.3个月,29例发生主要终点事件。CKD4期DN患者的肾小球、肾小管和肾血管中AT1R、AT2R、MasR和MrgD受体的表达水平在稳定组和进展组中无明显统计学差异。（3）db/db模型组小鼠12周龄时,出现高血糖、尿微量白蛋白增加、GBM增厚表现,证实糖尿病肾损伤出现,DN模型成立。SGLT2抑制剂干预12周（20周龄）后,不仅可以降糖、降低血压和尿微量白蛋白,还可降低肾脏组织中AT1R的表达,刺激MasR表达增加,使肾小球laminin和collagen Ⅳ等细胞外基质的表达的下降。结论:（1）电镜下DN患者的肾小球基底膜（GBM）表现增厚,而部分高血压和糖尿病患者的GBM也出现不同程增厚。故单一 GBM增厚并非DN早期特异的病理表现。高血压和糖尿病也可导致GBM增厚。DN患者肾小球基底膜厚度与肾脏病理改变的严重程度密切相关。（2）糖尿病肾病CKD4期患者中,有63.0%的人群在中位生存时间17.3个月内发展成ESRD或死亡,不同肾活检病理分型的患者进入ESRD的时间无明显差别。使用ARB药物,大黄或目标血压<130/80mmHg、以及控制糖化血红蛋白达标等,均不能有效的延缓糖尿病肾病CKD4期向终末期肾脏病的进展,肾活检病理分型与治疗疗效已无密切关联。对于糖尿病肾病CKD4期的患者,治疗的重点在于减少心血管并发症的发生、降低死亡率。（3）db/db小鼠在12周龄出现DN早期病理改变。SGLT2抑制剂治疗db/db小鼠12周后,能有效降低血糖、收缩压和尿微量白蛋白,减少肾小球laminin和collagen Ⅳ等细胞外基质产生,有效地延缓了糖尿病肾病早期肾小球系膜病变的进展。同时降低了肾小球、肾小管间质和小动脉AT1R表达、上调了 MasR表达。
张春伶,宁思思,杨绍政,李林,马家怡,孙玉霞,王嘉琳,金佳慧,李屹[5]（2021）在《电针对自发性高血压大鼠Klotho蛋白及肾间质纤维化的影响》文中认为目的观察针刺对自发性高血压大鼠（SHR）血清Klotho蛋白、肾组织血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）、内皮素-1（ET-1）、血小板凝集素-1（TSP-1）、CD47、Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅢ）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的影响。方法 15周龄雄性SHR大鼠随机分成模型组、氯沙坦组、肾俞组、膈俞组、肾俞+膈俞组,每组10只;另设同周龄雄性Wistar-Kyoto大鼠（WKY）10只作为正常组,适应性喂养1周。氯沙坦组予氯沙坦钾溶液（30 mg/kg）灌胃,每日1次;肾俞组、膈俞组、肾俞+膈俞组分别电针干预肾俞穴（双侧）、膈俞穴（双侧）、肾俞+膈俞穴（双侧）,每次15 min,隔日1次。干预12周后用酶联免疫吸附试验（ELLSA）法检测血清Klotho,免疫组化法测定各组大鼠肾组织AngⅡ、AT1R、ET-1、TSP-1、CD47、CollagenⅢ、TGF-β1的蛋白表达。结果干预12周后,与正常组比较,模型组大鼠血清Klotho含量明显降低（P<0.01）;肾组织AngⅡ、AT1R、ET-1、TSP-1、CD47、CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达明显升高（P<0.01）。与模型组比较,氯沙坦组、肾俞组、膈俞组、肾俞+膈俞组大鼠血清Klotho蛋白水平升高（P<0.05或P<0.01）,肾组织AngⅡ、AT1R、ET-1、TSP-1、CD47、CollagenⅢ蛋白表达均下降（P<0.05或P<0.01）;氯沙坦组、肾俞组大鼠肾组织TGF-β1蛋白表达明显降低（P<0.01）。与氯沙坦组比较,膈俞组、肾俞+膈俞组大鼠血清Klotho含量明显降低（P<0.01）,肾组织AT1R、TSP-1、CD47、CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）;肾俞组大鼠血清Klotho含量及肾组织AngⅡ、AT1R、ET-1、TSP-1、CD47、CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达与氯沙坦组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论电针可在一定程度上改善SHR大鼠肾间质纤维化,保护肾脏,其机制可能与Klotho介导有关。
张学敏[6]（2021）在《瑞舒伐他汀对老年高血压患者血管紧张素（1-7）及血压变异性的影响》文中认为目的通过检测老年高血压患者与老年非高血压人群血浆血管紧张素（1-7）[Ang（1-7）]的水平,同时监测24小时动态血压,探讨两组人群血浆Ang（1-7）与血压变异性的变化及相关性,并观察瑞舒伐他汀对老年高血压患者血浆Ang（1-7）水平及BPV的影响。为进一步优化老年高血压的降压治疗提供新的依据。方法选取2017年6月-2019年6月在安徽医科大学第三附属医院老年病科门诊就诊的2、3级老年高血压患者103例,高血压患者统一给予苯磺酸氨氯地平联合缬沙坦降压治疗,血压达标（标准:<150/90mm Hg）后入组,根据给予或不给予瑞舒伐他汀（10mg）联合治疗分为他汀组（51例）与非他汀组（52例）。选择同期年龄、性别等与老年高血压患者相匹配的体检血压正常的老年人50例为对照组,入组时分别记录三组人群的一般资料,包括:性别、年龄、吸烟史、高血压病程和诊室血压等,所有入组患者分别检测血脂、空腹血糖、尿酸、血浆Ang（1-7）水平,监测24小时动态血压,并计算BPV。他汀组与非他汀组在瑞舒伐他汀干预第8周、第16周随访检测Ang（1-7）的水平、监测24小时动态血压并计算BPV。结果1.三组患者入选时性别、年龄、吸烟史、高血压病程、血脂、空腹血糖、尿酸、诊室血压比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;2.三组患者入选时夜间收缩压（n SBP）、夜间舒张压（n DBP）比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;24小时收缩压（24h SBP）、24小时舒张压（24h DBP）、白昼收缩压（d SBP）、白昼舒张压（d DBP）比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;他汀组和非他汀组治疗前后24h SBP、d SBP、n SBP在两组间、三个时间点上差异无统计学意义;24h DBP、d DBP、n DBP在两组间、三个时间点上差异有统计学意义（P<0.05）;3.三组患者入选时24小时收缩压变异性（24h SBPV）、24小时舒张压变异性（24h DBPV）、白昼收缩压变异性（d SBPV）、白昼舒张压变异性（d DBPV）、夜间收缩压变异性（n SBPV）、夜间舒张压变异性（n DBPV）比较,差异均有统计学意义（P<0.01～0.05）。非他汀组或他汀组与对照组24h SBPV、24h DBPV、d SBPV、d DBPV、n SBPV、n DBPV比,差异均有统计学意义（P<0.01～0.05）;他汀组和非他汀组治疗前后24h SBPV、24h DBPV、d SBPV、d DBPV、n SBPV、n DBPV在两组间、三个时间点上差异有统计学意义（P<0.05）;4.三组患者入选时Ang（1-7）差异有统计学意义（P<0.01）;他汀组和非他汀组治疗前后Ang（1-7）在两组间、三个时间点上差异有统计学意义（P<0.05）;5.对照组、他汀组24h SBPV与Ang（1-7）有相关性（r=-0.333,P=0.018;r=-0.502,P<0.01）。结论1)老年高血压患者BPV增高,Ang（1-7）水平减低;2)瑞舒伐他汀可改善老年高血压患者的BPV,升高Ang（1-7）水平,瑞舒伐他汀对老年高血压患者24h SBPV的改善可能与Ang（1-7）的升高有关。
王瑶瑶[7]（2020）在《双清平化方对MS大鼠血压及IR、ACE、AngⅡ的影响》文中指出目的通过双清平化方对代谢综合征（MS）模型大鼠的干预,观察其对血压、血清NO、ET-1、AngⅡ及胰岛素抵抗的影响,明确其降压作用,探讨该方药降压的分子机制,为代谢综合征临床治疗提供实验依据。方法1 60只4周龄、体重140～160g的雄性SD大鼠,随机选取6只作为正常组,普通饲料及纯水喂养,其它54只由高脂饲料+10%果糖水喂饲,实验11周时予L-NAME 20mg/kg/d灌胃2周,实验第13周予STZ 25mg/kg一次性腹腔注射诱导MS模型,至14周末造模结束,评估造模情况。2造模结束将符合成模标准的30只MS大鼠随机分为模型组（MSD组）、缬沙坦组（VC组）、双清平化方高（SPHD-H组）、中（SPHD-M组）、低剂量组（SPHD-L组）各6只。各治疗组分别予缬沙坦（7.2mg/kg/d）、双清平化方高（13.38g/kg/d）、中（6.93g/kg/d）、低剂量（3.47g/kg/d）的含药饲料。给药8周后处死大鼠,评估血压等基础指标治疗期间的变化情况;检测血清FBG、FINS以及NO、ET-1、AngⅡ观察治疗后各项指标的变化;HE及Masson染色观察主动脉的病理变化;Weston blot检测肾脏组织ACE、AT1R、AT2R蛋白的表达。采用SPSS 26.0统计软件进行数据的统计分析。结果1造模第14周时,造模组血压、体重、腹围、Lee’s指数、血糖较正常组明显升高,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）。2药物干预8周后结果显示:在肥胖相关指标方面,与模型组相比,双清平化方高、中剂量组体重、腹围、Lee’s指数均明显降低,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）;在血压方面,与模型组比较,双清平化方高剂量组SBP、DBP明显降低,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,且各中药组血压水平与剂量呈反比;在糖代谢方面,与模型组相比,双清平化方高剂量组FBG、FINS、HOMA-IR明显减低,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,且各中药组FBG、FINS、HOMA-IR的水平与剂量呈反比;在血管内皮功能方面,与模型组比较,双清平化方高剂量组NO含量明显升高,ET-1、AngⅡ含量明显降低,差异显着,具有统计学意义（P<0.05）,并且各剂量组呈量效关系。3 HE染色镜下显示:与正常组比较,模型组大鼠的主动脉内膜与中膜明显增厚形成斑块,部分细胞肿胀结构破裂,可见散在分布的胆固醇结晶;与模型组比较,各治疗组内皮细胞、平滑肌细胞的形态结构以及血管内膜与中膜的病理改变均有明显改善,以SPHD-H组及VC组改善最为显着。Masson染色镜下显示:与正常组比较,模型组大鼠发现血管壁全层均有明显胶原沉积,血管细胞和弹力纤维排列紊乱;与模型组比较,各治疗组胸主动脉中胶原沉积均有所改善,以SPHD-H组及VC组改善最显着。4 Western Blot法结果显示:与正常组比较,模型组肾脏组织ACE、AT1R蛋白表达水平显着增加（P<0.05）,AT2R蛋白表达水平显着降低（P<0.05）;与模型组比较,双清平化方各剂量组及缬沙坦组肾脏组织ACE、AT1R蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,AT2R蛋白表达水平显着增加（P<0.05）;其中双清平化方高剂量组肾脏组织中ACE、AT1R、AT2R的蛋白表达水平与缬沙坦相似。结论1双清平化方可降低MS大鼠的血压、血糖,改善中心性肥胖及胰岛素抵抗。2双清平化方可以恢复ET-1/NO的平衡状态,改善血管内皮功能,对血管具有一定的保护作用。3双清平化方可下调肾脏ACE、AT1R蛋白的表达,上调肾脏AT2R蛋白的表达,降低血清AngⅡ的含量,推测其降压机制可能与调控RAS系统有关。图11幅;表10个;参125篇。
吴济强[8]（2020）在《氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究》文中提出背景:阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）是最常见的睡眠呼吸紊乱类型,慢性间断性缺氧（CIH）是OSA的主要病理生理特征。近年来研究发现,单纯的OSA是慢性肾脏病（CKD）的独立危险因素。肾小管周毛细血管（PTC）丧失和肾脏纤维化是CKD的主要特征。大量的研究表明,血管紧张素II受体阻滞剂（ARBs）除了降低血压外,还具有减少PTC丧失,减轻肾脏细胞凋亡、抑制肾纤维化,延缓CKD进展的作用。但CIH诱导PTC丧失和肾脏纤维化的分子机制及氯沙坦（losartan）的肾脏保护作用尚不完全清楚。目的:本课题通过OSA动物模型研究CIH诱导PTC丧失和肾脏纤维化的病理机制,并了解氯沙坦干预对CIH肾脏损害的保护作用。进一步通过间断性缺氧（IH）细胞实验,初步探讨IH对肾小管上皮细胞（TEC）的损害及氯沙坦的干预作用。本研究内容分为三部分,第一部分探讨CIH诱导大鼠PTC丧失的机制及氯沙坦的保护作用。第二部分研究氯沙坦对CIH诱导的大鼠TEC凋亡、肾小管上皮细胞-间充质转分化（EMT）、肾脏纤维化的干预作用;第三部分为IH对人近端肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡和损伤的影响及氯沙坦干预的体外研究。方法:第一部分:40只健康雄性Wistar大鼠,分为4组:对照组（Control）,CIH组,CIH+氯沙坦组（CIH+Losartan）、CIH+生理盐水组（CIH+NS）。大鼠在CIH环境下暴露6周后,腹主动脉内采血,检测肾功能;肾脏标本行HE染色观察TEC损害,透射电镜（TEM）检查TEC和PTC的超微结构改变;CD34免疫组化染色检测PTC密度;ELISA法检测肾脏血管紧张素II（Ang II）水平;分别用免疫组化、RT-qPCR、Western blotting检测肾脏缺氧诱导因子1-α（HIF-1α）、血管紧张素II 1型受体（AT1R）、血管内皮生长因子（VEGF）、血小板反应蛋白-1（TSP-1）的表达。第二部分:在上述实验的基础上,Masson染色和天狼猩红染色评价肾脏纤维化程度;TUNEL染色评价TEC凋亡;通过免疫组化、RT-qPCR、Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达了解凋亡机制;免疫组化半定量检测转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、E-钙黏蛋白（E-cad）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,评价肾脏促纤维化因子的表达和肾小管上皮细胞EMT。RT-qPCR和Western blotting进一步检测肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA水平。第三部分:体外实验分为5组:对照组、IH组、IH+10-7mol/L Losartan组,IH+10-6mol/L Losartan组,IH+10-55 mol/L Losartan组。除对照组外,其余四组的HK-2细胞在IH环境下培养15小时。MTT法评价HK-2细胞活力;流式细胞术检测HK-2细胞凋亡水平;RT-qPCR、Western blotting检测HK-2细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3基因和蛋白的表达。结果:第一部分:与对照组比较,CIH引起大鼠血清胱抑素C水平增高,TEC呈空泡样变性,细胞明显增大;TEC核固缩、染色质边缘化、线粒体肿胀。CD34免疫组化和TEM检查显示,CIH促进PTC丧失、管腔狭窄。CIH增加大鼠肾皮质HIF-1α、Ang II、AT1R、VEGF、TSP-1的表达。氯沙坦预处理降低大鼠血清胱抑素C水平,减轻TEC损伤;增加PTC密度,减轻PTC管腔狭窄;降低肾皮质Ang II、AT1R、HIF-1α、VEGF、TSP-1表达水平。第二部分:与对照组相比,CIH引起大鼠肾脏TEC凋亡数明显增加,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值显着降低,Bax、Caspase-3表达显着增高;TGF-β1、CTGF、α-SMA表达增高,E-cad表达降低,肾小管上皮细胞EMT和肾脏纤维化程度增加。氯沙坦预处理后TEC凋亡数降低,肾脏Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值增加,Bax、Caspase-3表达降低;TGF-β1、CTGF、α-SMA表达降低,E-cad表达增加,肾小管上皮细胞EMT和肾脏纤维化明显减轻。第三部分:与对照组相比,IH组的HK-2细胞活力降低,细胞凋亡比例明显增加。与IH组相比,氯沙坦呈剂量依赖性减轻HK-2细胞凋亡。与对照组相比,IH组Bcl-2的表达和Bcl-2/Bax比值降低,Bax和Caspase-3表达升高。与IH组相比,氯沙坦预处理后Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值增加,Bax和Caspase-3表达降低,且呈剂量依赖性。结论:1.CIH激活大鼠肾内RAS,损害TEC,引起肾脏血管生成因子失衡,导致PTC丧失。氯沙坦通过下调肾脏RAS,改善PTC与TEC的相互影响,进而调节血管生成因子的平衡,减轻CIH诱导的大鼠PTC丧失。2.CIH诱导大鼠TEC凋亡,促进肾小管上皮细胞EMT和肾脏纤维化。氯沙坦通过抑制TEC凋亡和肾小管上皮细胞EMT,继而减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化。3.IH诱导HK-2细胞凋亡增加,氯沙坦通过调节Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路,呈剂量依赖性抑制IH诱导的HK-2细胞凋亡。
刘晖[9]（2019）在《基于血管紧张素转化酶2的人参皂苷Rg3肾脏保护作用研究》文中认为人参皂苷Rg3（Rg3）是人参在高温炮制过程中生成的稀有皂苷,具有优良的抗肿瘤活性。目前国内已有制药企业对Rg3进行工业化生产,开发为辅助抗肿瘤的中药一类新药,在临床上广泛应用并取得了良好的效果。此外,多项研究显示Rg3还具有良好的心血管保护作用,其机制包括抗炎、抗氧化、抗纤维化、调节肾素-血管紧张素系统（RAS）活性等。高血压常常导致肾脏损伤,而肾脏疾病也是高血压发展的重要原因之一。高血压和肾脏疾病互为因果,常常造成恶性循环,最终发展为重度高血压和慢性终末期肾病,是人类健康的重大威胁之一。在肾病和高血压互相促进对方进展的过程中,RAS扮演了关键性的角色。血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素1型受体拮抗剂（ARB）是临床上预防、治疗肾性高血压和高血压肾病的一线药物。本课题组在之前的研究中发现,在自发性高血压大鼠（SHR）模型中,Rg3能通过减轻心肌组织中的血管紧张素II（Ang II）和炎症反应,抑制心肌纤维化,减缓高血压导致的大鼠心室重构,改善其心功能。高血压同样可导致SHR的肾脏损伤,如前所述,RAS功能失调是SHR损伤的重要机制。鉴于Rg3在预防SHR心脏损伤中展现的调控RAS、抑制炎症和纤维化的作用,我们开展了Rg3预防SHR肾脏损伤的研究。实验结果显示,Rg3虽然不能显着降低SHR的血压,但通过降低肾脏组织中的Ang II,抑制Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化,Rg3能有效地缓解SHR的肾脏损伤和病理改变。其机制可能是Rg3上调了肾脏组织中能够降解Ang II的血管紧张素转化酶2（ACE2）的表达。为进一步确认Rg3对Ang II参与介导的高血压肾脏损伤的缓解作用及其机制,我们利用微型胶囊渗透泵给小鼠皮下缓释Ang II,造成小鼠的肾脏损伤,同时用Rg3进行治疗,观察其效果并分析其作用机制。实验结果显示,对于外源性Ang II造成的小鼠肾脏损伤,Rg3同样具有缓解作用,其机制仍然是通过上调肾脏组织中的ACE2表达,增加了Ang II的降解,抑制了Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化。为了证实ACE2上调是Rg3发挥肾脏保护作用的关键机制,我们构建了ACE2基因敲除小鼠（KO）。继续使用微型胶囊渗透泵给小鼠皮下缓释Ang II造成小鼠的肾脏损伤,对比Rg3在野生型（WT）小鼠和KO小鼠上的肾脏保护作用有何不同。实验结果显示,由于KO小鼠的肾脏组织中不表达ACE2,Rg3无法通过上调ACE2的表达来增加Ang II的降解,对Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化没有明显的抑制作用。因此,对外源性Ang II造成的KO小鼠肾脏损伤,Rg3没有明显的缓解作用。据文献报道,自发性高血糖小鼠（db/db）在血糖升高的早期,其肾脏组织中的ACE2表达会代偿性上调,发挥一定的肾脏保护作用,减缓糖尿病肾病的进展。但随着小鼠年龄增大,这种ACE2的代偿性上调会逐渐失效,小鼠的肾脏损伤进入失代偿期,发展为糖尿病肾病。鉴于Rg3在预防高血压肾病进展时同样上调了肾脏组织中的ACE2,我们使用Rg3对db/db小鼠进行治疗,观察Rg3的肾脏保护作用,分析Rg3对肾脏组织中ACE2表达水平的影响。实验结果显示,Rg3不能显着降低db/db小鼠的血糖,但能延长db/db小鼠肾脏组织中ACE2的代偿性上调,从而降低其肾脏组织中的Ang II水平,抑制Ang II介导的炎症、氧化应激和纤维化,发挥肾脏保护作用,进一步减缓糖尿病肾病的进展。综上所述,Rg3能通过上调肾脏组织中的ACE2,分别减缓SHR的高血压肾病和db/db小鼠的糖尿病肾病的进展。Rg3除了具有良好的抗肿瘤作用,作为辅助治疗肿瘤的药物在临床上广泛使用,也有作为辅助治疗高血压、糖尿病,预防其肾脏并发症的药物的潜力。此外,最新的研究显示,上调肿瘤微环境中的ACE2,可能有助于抑制肿瘤的侵袭转移。因此,上调组织中的ACE2表达,可能是Rg3发挥抗肿瘤作用和心血管保护作用、肾脏保护作用的共同机制之一,这有待于更多实验的开展进行验证。
徐楠[10]（2020）在《非诺贝特对糖尿病小鼠的血管功能保护作用及机制研究》文中指出背景:随着人类饮食和生活方式的改变,糖尿病等代谢性疾病的患病率急剧增加,严重威胁着人类的身心健康。糖尿病所导致的微血管和大血管并发症是糖尿病发病率和死亡率居高的主要原因。研究发现血管内皮功能障碍是导致糖尿病血管病变的启动因素并与糖尿病血管并发症的发病机制密切相关。非诺贝特,是一种经典的降低甘油三酯的药物。近年来,大规模的临床试验发现非诺贝特能够减少糖尿病患者的血管并发症的发生,研究发现非诺贝特的这种糖尿病的血管保护作用可能是独立于本身的降脂作用,但是它的具体的作用机制目前还不完全清楚。目的:研究非诺贝特是否能够改善糖尿病小鼠的血管功能,以及研究非诺贝特对糖尿病小鼠血管功能保护的潜在作用机制。方法:1.本实验通过给C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ,50 mg/kg/d）连续五天,构建糖尿病小鼠模型,对照组注射等体积枸橼酸-枸橼酸钠溶液;通过给小鼠灌胃非诺贝特溶液（100mg/kg/d）连续八周,进行治疗。对照组给予灌胃等体积的羧甲基纤维素钠溶液。把小鼠随机分成四组小鼠,分别为对照组小鼠、非诺贝特处理的对照组、糖尿病小鼠、非诺贝特处理的糖尿病小鼠。2.分离四组小鼠的肾脏入球小动脉,采用显微微灌注技术,研究入球小动脉对乙酰胆碱的反应和张力变化,比较四组小鼠的血管功能的差异。3.分离四组小鼠的主动脉,采用多通道血管张力测定系统（DMT）检测主动脉血管张力,研究主动脉对乙酰胆碱等血管活性药物的反应和张力变化,比较四组小鼠的血管功能的差异。4.通过酶联免疫吸附测定（ELISA）检测四组小鼠血清尿素氮、肌酐、肾损伤因子-1、血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白,比较四组小鼠的肾功能指标的差异。5.通过一氧化氮水平检测试剂盒检测四组小鼠的主动脉和血清中总一氧化氮（NO）水平。6.通过试剂盒检测四组小鼠主动脉组织的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化氢的水平,比较四组小鼠的氧化应激水平的差异。7.通过ELISA试剂盒检测四组小鼠血清的前列腺素E2和血栓素A2的水平。8.用含蛋白酶抑制剂的RIPA蛋白裂解液提取主动脉组织的蛋白质,采用BCA法进行蛋白浓度测定,Western blot技术检测四组小鼠主动脉的PPARα、p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK、p-e NOS/e NOS、NF-κB、COX-2等蛋白质的相对表达量。9.分离四组小鼠的主动脉,预孵育e NOS抑制剂、PPARα激动剂或抑制剂、AMPK激动剂或抑制剂、过氧化物歧化酶类似物、COX-2抑制剂等,采用多通道血管张力测定系统（DMT）检测主动脉血管张力,研究主动脉对乙酰胆碱和去甲肾上腺素等血管活性药物的反应和张力变化,比较小鼠预孵育药物前后以及不同小鼠组间的血管功能的差异。10.用含有正常浓度糖（11.5 mmol/L）和高浓度糖（44 mmol/L）的生理盐溶液孵育正常小鼠的主动脉,用或不用非诺贝特预孵育,然后采用多通道血管张力测定系统（DMT）检测主动脉血管张力,比较不同主动脉处理组间的血管功能的差异。结果:1.与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠表现出血糖的明显升高和体重的显着下降。而使用非诺贝特治疗,对小鼠的血糖和体重没有明显影响。2.与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠的主动脉血管表现为内皮依赖性舒张障碍和收缩增强。而使用非诺贝特治疗后,可以显着的逆转上述异常的血管张力改变。3.四组小鼠主动脉的非内皮依赖性舒张功能没有明显差异。4.与对照组小鼠相比,糖尿病小鼠的肾脏入球小动脉表现出明显的舒张功能障碍,而使用非诺贝特可以改善这种障碍。5.糖尿病小鼠的血清和主动脉中的NO水平都比对照组小鼠显着减少了,使用非诺贝特处理后阻止了这种改变。6.非诺贝特抑制了糖尿病状态下小鼠主动脉中的氧化应激水平的增加和肾功能的损伤。7.与对照组相比,糖尿病小鼠血清中的前列腺素类缩血管物质,即前列腺素E2和血栓素A2的水平显着上调了。而使用非诺贝特抑制了这种上调。8.与对照组相比,糖尿病小鼠主动脉组织的PPARα、p-AMPK、p-LKBI、p-e NOS蛋白水平下调了。使用非诺贝特处理逆转了上述现象。9.与对照组相比,糖尿病小鼠主动脉组织的NF-κB和COX-2水平增加了。使用非诺贝特处理抑制了上述现象。10.对非诺贝特处理的糖尿病小鼠的主动脉进行预孵育e NOS抑制剂或PPARα抑制剂或AMPK抑制剂,均可以逆转非诺贝特对血管舒张功能的保护作用。11.对安慰剂处理的糖尿病小鼠的主动脉进行预孵育PPARα激动剂或AMPK激动剂或超氧化物歧化酶类似物,都可以改善主动脉舒张功能。12.对安慰剂处理的糖尿病小鼠的主动脉进行预孵育COX-2抑制剂或超氧化物歧化酶类似物,都可以改善主动脉收缩功能。13.在体外高糖孵育正常小鼠的主动脉能够减弱血管的内皮依赖性舒张功能和增强血管的收缩功能,而使用非诺贝特预孵育可以改善这种血管张力障碍。结论:1.非诺贝特能够改善糖尿病小鼠的血管功能,主要是通过平衡糖尿病小鼠血管的舒张和收缩功能起到了血管的保护作用。2.非诺贝特通过PPARα/LKB1/AMPK/e NOS途径增加糖尿病小鼠血管的一氧化氮水平和抑制氧化应激来改善糖尿病小鼠的血管舒张功能障碍。3.非诺贝特通过NF-κB/COX途径减少糖尿病小鼠的前列腺素类的缩血管物质和抑制氧化应激来改善糖尿病小鼠的血管收缩功能异常
二、内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响（论文提纲范文）
（1）基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 糖尿病心肌病的中医认识 |
| 1 糖尿病心肌病中医病名 |
| 2 糖尿病心肌病中医病因 |
| 3 糖尿病心肌病中医病机 |
| 4 糖尿病心肌病治则 |
| 5 糖尿病心肌病论治 |
| 6 小结与展望 |
| 综述二 糖尿病心肌病现代研究进展 |
| 1 糖尿病心肌病流行现状 |
| 2 糖尿病心肌病病程特征 |
| 3 糖尿病心肌病病理机制 |
| 4 糖尿病心肌病诊断策略 |
| 5 糖尿病性心肌病的干预策略 |
| 6 小结和展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖心平胶囊网络药理学研究 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 糖心平胶囊对DCM的保护作用探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 糖心平干预后大鼠心功能及对抗急性心肌缺血能力评价 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 实验三 基于PI3K/AKT信号通路糖心平胶囊药效机制探究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 创新点与不足之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（2）基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩写表 |
| 第1章 绪论 |
| 综述1 胰岛素抵抗与内皮功能障碍 |
| 1.1 胰岛素信号通路 |
| 1.2 炎症与IR |
| 1.2.1 炎症信号 |
| 1.2.2 炎症介导IR的机制 |
| 1.3 内皮功能障碍 |
| 1.3.1 内皮分泌的主要血管活性物质 |
| 1.3.2 内皮功能障碍的发生机制 |
| 1.3.3 血管内皮的胰岛素信号通路 |
| 1.3.4 IR与内皮功能障碍的相互关系 |
| 1.4 结语 |
| 综述2 经典RAS在糖尿病及其并发症中的作用与ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的生物学功能 |
| 1.1 经典RAS在糖尿病及其并发症中的作用 |
| 1.1.1 经典RAS的构成 |
| 1.1.2 经典RAS与糖尿病及其并发症 |
| 1.2 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的构成 |
| 1.2.1 ACE2 的生物学特性及其激动剂和抑制剂 |
| 1.2.2 Ang-(1-7)的生物学特性 |
| 1.2.3 Mas的生物学特性及其激动剂和拮抗剂 |
| 1.3 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴在几种常见疾病中的作用 |
| 1.3.1 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与高血压 |
| 1.3.2 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与动脉粥样硬化 |
| 1.3.3 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与心衰 |
| 1.3.4 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与中风 |
| 1.3.5 ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴与糖尿病 |
| 1.4 结语 |
| 第2章 ACE2 在高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗中的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 HG对HUVECs存活率的影响 |
| 2.3.2 HG对HUVECs形态的影响 |
| 2.3.3 HG对HUVECs NO分泌含量及ET-1 mRNA水平的影响 |
| 2.3.4 HG对HUVECs胰岛素信号通路IRS1 蛋白表达的影响 |
| 2.3.5 HG对HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 2.3.6 HG对HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 人参皂苷RC改善高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 主要试剂与仪器 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 人参皂苷Rc对HUVECs细胞存活率的影响 |
| 3.3.2 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs NO分泌含量及ET-1mRNA水平的影响 |
| 3.3.3 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ROS产生的影响 |
| 3.3.4 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs培养液上清MDA含量及SOD活性的影响 |
| 3.3.5 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs促炎因子mRNA水平的影响 |
| 3.3.6 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs培养液上清Ang Ⅱ及Ang-(1-7)含量的影响 |
| 3.3.7 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 3.3.8 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs ACE2及Mas mRNA水平的影响 |
| 3.3.9 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs胰岛素信号通路IRS1蛋白表达的影响 |
| 3.3.10 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 3.3.11 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs NADPH氧化酶蛋白表达的影响 |
| 3.3.12 人参皂苷Rc对HG处理HUVECs IR相关炎症信号通路的影响 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 基于ACE2 探究人参皂苷RC改善高糖诱导HUVECS胰岛素抵抗的作用机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 主要试剂与仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs NO分泌含量及ET-1 mRNA水平的影响 |
| 4.3.2 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ROS产生的影响 |
| 4.3.3 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs培养液上清MDA含量及SOD活性的影响 |
| 4.3.4 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs促炎因子mRNA水平的影响 |
| 4.3.5 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs培养液上清Ang Ⅱ及 Ang-(1-7)含量的影响 |
| 4.3.6 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 4.3.7 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs ACE2及Mas mRNA水平的影响 |
| 4.3.8 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs胰岛素信号通路IRS1 蛋白表达的影响 |
| 4.3.9 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs胰岛素信号通路PI3K/Akt/eNOS蛋白表达的影响 |
| 4.3.10 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs NOX2蛋白表达的影响 |
| 4.3.11 人参皂苷Rc和MLN-4760对HG处理HUVECs IR相关炎症信号通路的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 基于ACE2 探究人参皂苷RC改善DB/DB小鼠内皮功能障碍的作用及机制 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 主要试剂与仪器 |
| 5.2.3 实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠体重和空腹血糖的影响 |
| 5.3.2 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清脂质及胰岛素含量的影响 |
| 5.3.3 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清促炎因子含量的影响 |
| 5.3.4 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠血清和主动脉Ang Ⅱ及 Ang-(1-7)含量的影响 |
| 5.3.5 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠主动脉ACE2及Mas蛋白表达的影响 |
| 5.3.6 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠胸主动脉内皮和非内皮依赖性舒张的影响 |
| 5.3.7 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠Akt/eNOS信号通路的影响 |
| 5.3.8 人参皂苷Rc和MLN-4760对db/db小鼠主动脉NADPH氧化酶蛋白表达的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 讨论 |
| 第7章 结论及展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 本论文创新性 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人参皂苷Re药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 CFs形态学观察与纯度检测 |
| 2 过表达miR-489抑制CFs分化和分泌 |
| 3 过表达miR-489抑制myd88/NF-κB通路的活化 |
| 4 抑制miR-489促进CFs分化和分泌 |
| 5 抑制miR-489促进myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re改善AMI后心脏功能 |
| 2 人参皂苷Re抑制AMI后心肌代偿性肥厚 |
| 3 人参皂苷Re减轻AMI后心肌损伤 |
| 4 人参皂苷Re改善AMI后心脏组织病理学改变 |
| 5 人参皂苷Re抑制AMI后纤维化相关蛋白的表达 |
| 6 人参皂苷R调控AMI后miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 7 人参皂苷Re抑制AMI诱导的myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re干预CFs的浓度筛选 |
| 2 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs分化 |
| 3 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs迁移 |
| 4 人参皂苷R抑制AngⅡ诱导的CFs中胶原蛋白的表达 |
| 5 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs中myd88/NF-κB通路活化 |
| 6 人参皂苷Re调节CFs中miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 主要仪器设备 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（4）糖尿病肾病肾脏病理改变与预后关系的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 肾小球基底膜增厚与糖尿病肾病的关系 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 糖尿病肾病CKD 4期肾脏病理改变、血管紧张素受体表达与预后的关系 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 SGLT2抑制剂延缓2型糖尿病肾病小鼠肾脏病理早期病变进展的机制研究 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 Alamandine及其受体MrgD的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的文章及参加科研情况 |
| 致谢 |
（5）电针对自发性高血压大鼠Klotho蛋白及肾间质纤维化的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 药物、试剂及仪器 |
| 1.3 分组及干预方法 |
| 1.4 标本处理及检测方法 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 各组大鼠血清Klotho含量比较 |
| 2.3 各组大鼠肾组织AngⅡ、AT1R、ET-1蛋白表达比较 |
| 2.4 各组大鼠肾组织TSP-1、CD47蛋白表达比较 |
| 2.5 各组大鼠肾组织CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达比较 |
| 3 讨 论 |
（6）瑞舒伐他汀对老年高血压患者血管紧张素（1-7）及血压变异性的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 主要试验材料 |
| 2.3 试验方法 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 三组患者基本情况比较 |
| 3.2 三组患者入选时血压的比较 |
| 3.3 三组患者入选时血压变异性的比较 |
| 3.4 非他汀组与他汀组治疗前后血压的比较 |
| 3.5 非他汀组与他汀组治疗前后血压变异性的比较 |
| 3.6 三组患者血管紧张素(1-7)的比较 |
| 3.7 血压、血压变异性与血管紧张素(1-7)的相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 老年高血压患者血压变异性、血管紧张素(1-7)的变化 |
| 4.2 老年非高血压患者24h收缩压变异性与血管紧张素(1-7)水平的相关性 |
| 4.3 瑞舒伐他汀对老年高血压患者平均血压的影响 |
| 4.4 瑞舒伐他汀对老年高血压患者血压变异性、血管紧张素(1-7)的影响及相关性 |
| 4.5 研究不足与展望 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 ACE2/Ang(1-7)/Mas 轴在心血管系统作用的研究进展 |
| 参考文献 |
（7）双清平化方对MS大鼠血压及IR、ACE、AngⅡ的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验资料 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 MS模型成模率情况 |
| 1.2.2 造模阶段大鼠肥胖相关指标变化情况 |
| 1.2.3 造模阶段大鼠血压的变化情况 |
| 1.2.4 造模阶段大鼠血糖的变化情况 |
| 1.2.5 给药前后各组大鼠的一般情况 |
| 1.2.6 给药后各组大鼠肥胖相关指标变化情况 |
| 1.2.7 给药后各组大鼠血压的变化情况 |
| 1.2.8 给药8 周各组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR的比较 |
| 1.2.9 给药8 周各组大鼠NO、ET-1、AngⅡ的比较 |
| 1.2.10 HE染色结果 |
| 1.2.11 Masson染色结果 |
| 1.2.12 各组大鼠肾脏组织ACE、AT1R、AT2R蛋白的表达 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 MS大鼠模型的构建 |
| 1.3.2 双清平化方组方分析 |
| 1.3.3 双清平化方对MS大鼠的干预作用及其降压机制 |
| 1.4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第2章 综述 代谢综合征高血压的中西医研究进展 |
| 2.1 代谢综合征的现代医学研究进展 |
| 2.1.1 代谢综合征的命名 |
| 2.1.2 代谢综合征的诊断标准 |
| 2.1.3 MS各组分与高血压的关系 |
| 2.2 中医认识及治疗进展 |
| 2.2.1 病因病机的认识 |
| 2.2.2 中医药治疗进展 |
| 2.3 问题与对策 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（8）氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩略词中引文对照表 |
| 第一部分 前言 |
| 1.阻塞性睡眠呼吸暂停和慢性肾脏疾病概述 |
| 2.OSA和 CKD的发病情况 |
| 3.OSA与 CKD的临床特点 |
| 4.OSA导致CKD的病理机制 |
| 4.1 直接途径-缺氧 |
| 4.2 间接途径 |
| 4.2.1 RAAS激活 |
| 4.2.2 交感神经兴奋性增强 |
| 4.2.3 氧化应激 |
| 4.2.4 高血压 |
| 4.2.5 内皮功能紊乱和动脉粥样硬化 |
| 5.CKD导致OSA的病理机制 |
| 5.1 上气道狭窄 |
| 5.2 化学感受性反射改变 |
| 第二部分 氯沙坦通过调节肾脏肾素-血管紧张素系统和血管生成因子减轻慢性间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要实验仪器 |
| 2.2 主要试剂与耗材 |
| 2.3 主要实验试剂配制 |
| 2.4 动物分组及间断性缺氧设备 |
| 2.4.1 动物来源 |
| 2.4.2 动物分组 |
| 2.4.3 间断性缺氧设备 |
| 2.5 慢性间断性缺氧实验 |
| 2.6 实验标本采集 |
| 2.7 肾脏功能检测 |
| 2.8 肾脏病理学检查 |
| 2.8.1 苏木精-伊红(HE)染色 |
| 2.8.2 免疫组化检测大鼠肾脏CD34、HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-表达 |
| 2.8.3 透射电镜检查 |
| 2.9 酶联免疫吸附测定法检测大鼠肾脏AngII的水平 |
| 2.10 RT-qPCR检测大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表达 |
| 2.10.1 TRIzol法提取RNA |
| 2.10.2 检测RNA浓度 |
| 2.10.3 RNA反转录成c DNA |
| 2.10.4 RT-qPCR反应 |
| 2.10.5 结果分析 |
| 2.11 免疫印迹试验检测大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表达 |
| 2.11.1 肾脏蛋白提取 |
| 2.11.2 BCA法检测蛋白质浓度 |
| 2.11.3 SDD-PAGE电泳 |
| 2.11.4 转模 |
| 2.11.5 封闭 |
| 2.11.6 一抗孵育 |
| 2.11.7 二抗孵育 |
| 2.11.8 曝光 |
| 2.11.9 蛋白表达检测 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 CIH和氯沙坦对大鼠体重和肾脏功能的影响 |
| 4.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠TEC损伤 |
| 4.3 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠TEC超微结构损伤 |
| 4.4 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠PTC超微结构损害 |
| 4.5 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠PTC丧失 |
| 4.6 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α表达 |
| 4.7 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏RAS激活 |
| 4.7.1 氯沙坦降低CIH诱导的大鼠肾脏Ang II水平 |
| 4.7.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏AT1R表达 |
| 4.8 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏血管生成因子失衡 |
| 4.9 氯沙坦下调CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1mRNA表达 |
| 4.10 免疫印迹试验证实氯沙坦下调CIH诱导的大鼠肾脏HIF-1α、AT1R、VEGF和 TSP-1 蛋白表达 |
| 5.讨论 |
| 第三部分 氯沙坦通过抑制肾小管上皮细胞凋亡和上皮细胞-间充质转化减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 大鼠肾脏Masson染色 |
| 2.2 大鼠肾脏天狼猩红染色 |
| 2.3 TUNEL法检测大鼠肾小管上皮细胞凋亡 |
| 2.4 免疫组化检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA表达 |
| 2.5 RT-qPCR检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA mRNA表达 |
| 2.6 免疫印迹试验检测大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3、TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表达 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏纤维化 |
| 4.2 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾脏肾小管上皮细胞凋亡 |
| 4.3 氯沙坦调节大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 表达 |
| 4.4 氯沙坦降低CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF表达 |
| 4.5 氯沙坦减轻CIH诱导的大鼠肾小管上皮细胞EMT |
| 4.6 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达 |
| 4.7 氯沙坦调节CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMAmRNA表达 |
| 4.8 免疫印迹试验检测氯沙坦对CIH诱导的大鼠肾脏Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达的影响 |
| 4.9 免疫印迹试验检测氯沙坦对CIH诱导的大鼠肾脏TGF-β1、CTGF、E-cad和α-SMA蛋白表达的影响 |
| 5.讨论 |
| 第四部分 :氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡的体外实验研究 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 细胞 |
| 2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 主要试剂与耗材 |
| 2.4 主要试剂的配制 |
| 2.5 细胞复苏 |
| 2.6 细胞传代 |
| 2.7 细胞计数 |
| 2.8 细胞冻存 |
| 2.9 实验分组及IH模型暴露细胞 |
| 2.10 倒置显微镜观察HK-2细胞形态 |
| 2.11 MTT法检测细胞存活 |
| 2.12 流式细胞术定量检测细胞凋亡 |
| 2.13 RT-qPCR检测HK-2 细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达 |
| 2.14 免疫印迹试验检测HK-2 细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达 |
| 3.统计学分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 各组HK-2细胞形态学改变 |
| 4.2 氯沙坦减轻IH诱导的HK-2细胞活性降低 |
| 4.3 氯沙坦抑制IH诱导的HK-2细胞凋亡 |
| 4.4 氯沙坦调节IH诱导的HK-2 细胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 mRNA表达 |
| 4.5 氯沙坦调节IH诱导的HK-2 细胞Bcl-2、Bax和 Caspase-3 蛋白表达 |
| 5.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（9）基于血管紧张素转化酶2的人参皂苷Rg3肾脏保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 文献综述1人参皂苷Rg3 的药理作用和临床应用 |
| 1.1 人参皂苷Rg3 的来源和结构 |
| 1.2 人参皂苷Rg3 的开发和商业化 |
| 1.3 人参皂苷Rg3 的抗肿瘤作用和临床应用 |
| 1.4 人参皂苷Rg3 的其它药理作用 |
| 1.5 用中医理论解读人参皂苷Rg3 的多重药理作用 |
| 第2章 文献综述2肾素血管紧张素系统研究进展及其对肾病的影响 |
| 2.1 肾素血管紧张素系统概述 |
| 2.2 ACE/Ang Ⅱ/AT1 轴的激活及其功能 |
| 2.3 ACE2/Ang1-7/Mas轴的发现及其功能 |
| 2.4 肾素血管紧张素系统和肾脏疾病 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 Rg3 通过上调ACE2 表达减轻SHR的肾脏损伤 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 第4章 Rg3 通过上调ACE2 表达改善Ang Ⅱ介导的高血压小鼠肾脏损伤 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 第5章 ACE2 基因敲除阻断Rg3 的肾脏保护作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 ACE2 基因敲除小鼠的构建、繁殖和鉴定 |
| 5.3 实验材料 |
| 5.4 实验方法 |
| 5.5 实验结果 |
| 5.6 讨论 |
| 第6章 Rg3 通过上调ACE2 表达改善db/db小鼠的糖尿病肾病 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.5 讨论 |
| 第7章 结论和展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在校期间科研成果 |
| 致谢 |
（10）非诺贝特对糖尿病小鼠的血管功能保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 综述 关于糖尿病血管病变的研究进展 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在读期间所取得成果 |
四、内皮素阻断对糖尿病高血压大鼠肾脏AT1受体表达的影响（论文参考文献）
- [1]基于PI3K/AKT信号通路探讨糖心平胶囊治疗糖尿病心肌病药效及机制[D]. 李晓文. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]基于血管紧张素转化酶2探究人参皂苷Rc改善内皮细胞胰岛素抵抗与血管内皮功能障碍的作用及机制[D]. 王耀振. 吉林大学, 2021(01)
- [3]miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究[D]. 孙敬辉. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]糖尿病肾病肾脏病理改变与预后关系的研究[D]. 于天宇. 北京协和医学院, 2021(02)
- [5]电针对自发性高血压大鼠Klotho蛋白及肾间质纤维化的影响[J]. 张春伶,宁思思,杨绍政,李林,马家怡,孙玉霞,王嘉琳,金佳慧,李屹. 中西医结合心脑血管病杂志, 2021(05)
- [6]瑞舒伐他汀对老年高血压患者血管紧张素（1-7）及血压变异性的影响[D]. 张学敏. 安徽医科大学, 2021(01)
- [7]双清平化方对MS大鼠血压及IR、ACE、AngⅡ的影响[D]. 王瑶瑶. 华北理工大学, 2020(02)
- [8]氯沙坦减轻间断性缺氧诱导的大鼠肾小管周毛细血管丧失和肾脏纤维化机制的研究[D]. 吴济强. 兰州大学, 2020(01)
- [9]基于血管紧张素转化酶2的人参皂苷Rg3肾脏保护作用研究[D]. 刘晖. 吉林大学, 2019(02)
- [10]非诺贝特对糖尿病小鼠的血管功能保护作用及机制研究[D]. 徐楠. 浙江大学, 2020(01)