贵州省家猪亚洲亚种带绦虫的实验感染研究

一、贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究（论文文献综述）

许士刚^[1]（2017）在《亚洲带绦虫实验感染乳猪肝脏的蛋白质组研究》文中指出目的:采用蛋白质组学技术和方法研究亚洲带绦虫实验感染乳猪后15 d、75 d幼虫寄生处肝脏组织与对照组肝组织的蛋白质表达差异,为进一步研究亚洲带绦虫感染致乳猪肝损伤的分子机制提供基础资料。方法:1.绦虫标本采集及虫卵收集:将采自贵州省都匀市良亩乡的亚洲带绦虫孕节解剖后,以生理盐水反复清洗并离心收集虫卵。2.乳猪实验动物模型的建立及肝脏样本采集:20日龄约克施格杂交乳猪12头随机分为实验组和对照组各6头,实验组以定量虫卵15万个/头灌胃感染。于感染后第15 d和第75 d解剖乳猪,取实验组囊尾蚴寄生处肝组织和对照组对应部位肝组织。3.iTRAQ技术检测分析实验组和对照组乳猪肝脏的差异蛋白表达:主要步骤:蛋白质制备、酶解和肽段定量、肽段标记、液相色谱-串联质谱分析、Mascot软件查库鉴定及定量分析和生物信息学分析。4.部分差异蛋白的验证:运用实时荧光定量PCR、免疫印迹方法和免疫组织化学技术对部分差异蛋白进行进一步验证。结果:1.根据一般形态学特征和分子生物学鉴定结果,证实2条都匀采集的带绦虫为亚洲带绦虫。2.实验组6头乳猪均感染了亚洲带绦虫囊尾蚴,感染率为100%。囊尾蚴只存在于乳猪肝脏,其它组织未检获。3.iTRAQ分析结果显示感染后第15 d实验组与对照组比较共有187个蛋白质（92个未知）有显着差异;感染后第75 d实验组与对照组比较共有158个蛋白质（72个未知）有显着差异。4.验证结果显示感染后第15 d,实验组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine aspartyl proteinase 3,Caspase-3）mRNA和蛋白表达水平均低于对照组（P<0.05,P<0.01）,感染后第75 d,实验组Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平较对照组无明显变化（P>0.05）;感染后第15 d和75 d,实验组膜联蛋白A5（Annexin A5,Anxa5）和甲硫氨酰氨肽酶2（Methionine aminopeptidase 2,Metap2）mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（P<0.05,P<0.01）,而实验组细胞色素P4501A1（CytochromeP450 1A1,Cyp1a1）mRNA和蛋白表达水平均低于对照组（P<0.05,P<0.01）;免疫组化结果显示Caspase-3、Anxa5阳性染色主要定位在肝细胞胞质中,呈黄色或棕黄色。结论:1.iTRAQ技术检测到了亚洲带绦虫实验感染乳猪肝脏的大量差异蛋白表达,为进一步研究亚洲带绦虫致中间宿主乳猪肝损伤的分子机制提供了基础资料。2.目标蛋白的验证结果提示Caspase-3可能参与了亚洲带绦虫感染乳猪15 d肝损伤的调节,而Cyp1a1、Anxa5和Metap2可能参与了亚洲带绦虫感染乳猪15 d和75 d肝损伤的调节。

刘晓焱,郭光武,陈利红,莫兴泽,余跃生^[2]（2015）在《免疫机能正常小鼠感染亚洲带绦虫的实验研究》文中研究表明亚洲带绦虫卵经次氯酸钠孵育4、6和8 min后,分别经皮下注射感染免疫机能正常小鼠（A组,60只）和免疫抑制小鼠（B组,60只）,A、B组小鼠根据虫卵孵化时间的不同均分为3组,每组20只。各组小鼠均于感染后第5天开始出现不适,15 d左右背部出现包块,A组715 d均有小鼠死亡,B组750 d均有小鼠死亡。60 d后剖杀,A1、A2和A3组存活率均为95.0%（19/20）,感染率分别为89.4%（17/19）、73.6%（14/19）和47.3%（9/19）。B1、B2和B3组存活率分别为60%（13/20）、55%（11/20）和55%（11/20）,感染率为76.9%（10/13）、54.5%（6/11）、45.4%（5/11）。囊尾蚴用15%猪胆汁进行头节翻出,可见囊尾蚴四个吸盘和明显顶突及两圈点状小钩结构。表明免疫机能正常小鼠可代替免疫抑制小鼠用来构建亚洲带绦虫六钩蚴感染模型,次氯酸钠溶液孵化4 min亚洲带绦虫卵感染性最强。

陈利红,包怀恩^[3]（2012）在《亚洲牛带绦虫与传统牛带绦虫实验动物感染研究》文中进行了进一步梳理在生物医学的科学研究中实验动物感染并建立相应的动物模型被广泛运用。它无论在疾病的发生、发展机制的探讨或预防与治疗上都非常重要。是促进医学科学发展的重要途径之一。传统牛带绦虫是种较古老的虫种,多年来,人们对它的认识已比较成熟。由Goeze于1782年鉴定为独立的种。近三十年来,在我国台湾和东南亚的

李彦^[4]（2012）在《云南亚洲带绦虫MPCR鉴定及遗传多态性比较性分析研究》文中进行了进一步梳理目的：1.运用多重聚合酶链式反应（MPCR）技术对云南保山、怒江、大理、迪庆四地区亚洲带绦虫标本单链结合蛋白（HDP2）基因进行鉴定，排除未用统一方法鉴定的亚洲带绦虫标本的假阳性。2.对云南四地区带绦虫不同的基因片段聚合酶链式反应（PCR）测序方法进行比较性分析，探索带绦虫遗传多态性研究中快速可靠的基因序列。3.为亚洲带绦虫的分类定位提供依据，明确亚洲带绦虫在云南的分布区域与流行现状。方法：1.采用MPCR技术统一对亚洲带绦虫HDP2基因序列进行鉴定研究，结合云南大理、怒江、普洱三种标准株电泳图，MPCR扩增带绦虫HDP2部分基因序列，绘制电泳图。2.收集整理本课题组对各地带绦虫基因序列线粒体DNA（mtDNA）中的12S rRNA、ND1、COX1、Cytb和核糖体DNA（rDNA）中的（ITS1、ITS2）的研究结果；比较分析碱基序列中的碱基变异率、A+T含量，PCR扩增时间，SPSS13.0软件分析，绘制图谱，进一步分析六组基因片段变异率是否相同。结果：1.云南保山、怒江、大理、迪庆地区14株带绦虫HDP2基因鉴定结果显示：1—14号标本与YZ的电泳图在同一条带处出现。2. mtDNA-12S rRNA、mtDNA-ND1、mtDNA-COX1、mt-DNA Cytb、rDNA-ITS1、rDNA-ITS2基因序列在带绦虫遗传多态性研究中的比较分析显示：mtDNA-ND1基因的碱基变异率高于mtDNA-12S rRNA基因的碱基变异率；mtDNA-ND1基因的A+T平均含量高于mtDNA-12S rRNA基因的A+T平均含量；mtDNA-ND1基因之间的同源性差异高于mtDNA-12S rRNA基因之间的同源性差异。rDNA-ITS1基因的碱基变异率高于rDNA-ITS2基因的碱基变异率；rDNA-ITS1基因的A+T平均含量高于rDNA-ITS2基因的A+T平均含量； rDNA-ITS1基因之间的同源性差异高于rDNA-ITS2基因之间的同源性差异。3.楚雄、普洱、西双版纳存在牛带绦虫；保山存在亚洲带绦虫与牛带绦虫；大理存在猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫。结论：1.云南保山、怒江、大理、迪庆地区存在亚洲带绦虫；普洱、西双版纳、楚雄存在牛带绦虫；保山存在亚洲带绦虫与牛带绦虫；大理存在猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫。2. MPCR技术在带绦虫分类学研究中可作为一种可靠、有效、方便快捷的方法加以应用。3.mtDNA-ND1基因序列和rDNA-ITS1基因序列在带绦虫遗传多态性研究中显出优越性。

令狐艳,朱武军,包怀恩,陈艳,李建华^[5]（2011）在《两种带绦虫感染家猪的病理学比较研究》文中认为为了探明亚洲带绦虫和牛带绦虫在家猪体内的发育规律及致病性,试验用两种带绦虫卵分别灌胃感染家猪,于不同时间剖检,观察两种带绦虫在家猪体内的发育情况,并取肝组织进行病理检查。结果表明:家猪对两种带绦虫卵均易感,是亚洲带绦虫的适宜中间宿主,牛带绦虫的非适宜中间宿主;亚洲带绦虫囊尾蚴寄生数量多,各期发育良好;而牛带绦虫囊尾蚴寄生数量少,囊尾蚴发育及存活时间短,体积小。两种带绦虫均可造成家猪不同程度的病理损害,以亚洲带绦虫造成的损害更严重。

杨鹏,党荣敏,谢洪书,刘元忠^[6]（2010）在《亚洲牛带绦虫感染家猪后血清IL-4和IL-10含量检测》文中提出

罗浪^[7]（2010）在《云南大理6地域带绦虫的分类研究》文中提出目的：对采自云南大理3县市6地域的人体带绦虫标本,运用形态学及分子生物学方法,鉴定该地区的带绦虫种类,为亚洲带绦虫具体的分类定位提供参考依据,并为云南省带绦虫病和囊虫病的防治提供科学依据。方法：（1）形态学鉴定：选取云南大理3县市6地域带绦虫成虫的头节、成节和孕节节片,采用盐酸卡红和孔雀绿溶液进行染色,与猪带绦虫和传统牛带绦虫比较,对云南大理带绦虫的种类进行初步的形态学鉴定。（2）分子生物学鉴定：从云南大理3县市6地域采集人体带绦虫标本株成虫节片,抽提虫体基因组DNA, PCR扩增线粒体DNA细胞色素B （mtDNA-Cytb）的部分序列,并测序；结合GenBank中已知的猪带绦虫、牛带绦虫和亚洲带绦虫mtDNA-Cytb序列,应用DNAMAN （Version 5.2.2）软件对各标本测序结果进行同源性分析,计算遗传距离并构建系统发育树状图。结果：（1）由形态学分析结果显示,云南大理洱源、大理市双廊和挖色地区带绦虫标本的头节均略呈方形,具有四个吸盘,未见顶突和小钩；成节卵巢分两叶,即左右两叶；孕节的子宫分支大致对称,每侧约13～20支。与报道的亚洲带绦虫相似。（2）根据PCR扩增后mtDNA-Cytb序列测序结果,大理洱源、大理市双廊和挖色地区的带绦虫标本与GenBank中的亚洲带绦虫序列基本一致,同源性分别为99%和100%；大理鹤庆地区带绦虫标本与猪带绦虫同源性为99%。构建的系统发育树显示：EY2、WS及EY1、SL、DY共5个标本株与YZ聚为一支,属于亚洲带绦虫；DL与ND聚为一支,属于牛带绦虫；HQ1-3与ZD聚为一支,属于猪带绦虫；亚洲带绦虫和牛带绦虫两支交汇后再与猪带绦虫汇合。结论：（1）云南大理洱源、云南大理市存在亚洲带绦虫,云南大理鹤庆存在猪带绦虫。猪带绦虫和亚洲带绦虫在云南大理地区有分布区域上的重叠性。（2）mtDNA-Cytb序列分析在鉴定不同种类的带绦虫标本中显示出了有效性。

张辉^[8]（2010）在《云南省6地域带绦虫形态学及分子鉴定分析研究》文中认为目的：运用形态学和分子生物学方法,鉴定云南省怒江、迪庆、大理、临沧、楚雄和西双版纳6地域带绦虫的种类,计算遗传距离并构建系统发育树；了解三种带（?）虫在云南省的分布情况；为亚洲带绦虫具体的分类定位提供参考依据；为带绦虫病和囊虫病的防治提供科学依据。方法：（1）形态学鉴定：对采自云南省6地域的14株带绦虫的头节和成节进行盐酸卡红染色,孕节进行孔雀绿染色,进行形态学鉴定,与猪带绦虫和传统牛带绦虫比较,初步判断带绦虫的种类；并结合亚洲带绦虫标准株（大理株）的头节电镜图,探讨亚洲带绦虫头节形态。（2）带绦虫基因组DNA PCR-RAPD分析：在形态学鉴定的基础上取14株带绦虫标本株,2株亚洲带绦虫标准株（大理株和都匀株）和1株牛带绦虫标准株的成节或孕节节片,提取总DNA,随机选择12条引物进行PCR-RAPD分析,SPSS软件计算不同地理株的遗传距离,并构建系统发育树状图。（3）带绦虫mtDNA COXI基因序列测定分析：以14株带绦虫标本株总DNA为模板,分别PCR扩增mtDNA COXI区段,并做序列测定,结合GenBank中已知的猪带绦虫、牛带绦虫、亚洲带绦虫mtDNA COXI序列,经DNA MAN软件处理后计算遗传距离,并构建系统发育树状图。结果：（1）形态学鉴定显示：DL1头节呈球形,具有顶突和2圈小钩,成节卵巢分为3叶,孕节分支不整齐,每侧分支约为7～13支,多基部分叉,属猪带绦虫；NJ1～NJ4及DQ1～DQ3共7株标本头节方形,有微小突起,无小钩,成节卵巢分2叶,孕节分支整齐,每侧分支约15～25支,属亚洲带绦虫；DL2～DL4、LC1、CX1和BN1头节呈方形,无顶突和小钩,成节卵巢分2叶,孕节分支整齐,每侧分支约15～28支,不能断定为传统牛带绦虫或亚洲带绦虫。（2）带绦虫基因组DNA PCR-RAPD分析显示：12条随机引物共扩增片段134个（以相同bp数为依据）,单条引物扩增片段范围为3～22个,平均扩增片段在11.17个。P1～9和P11可扩增出特异条带。亲缘关系树状图显示：NJ1～4、DQ1～3、DL2～4与BZl和BZ3汇为一支,属于亚洲带绦虫；LC1、BN1、CX1和BZ2汇为一支,属于传统牛带绦虫；两支结合后与DL1结合。（3）带绦虫mtDNA COXI基因序列测定分析显示：NJ4、NJ1和DQ2的遗传距离为0.002,DL4和NJ3的遗传距离为0.005,NJ2和DQ3的遗传距离为0.012,DL2与GB3的遗传距离为0.017,而与GB2的遗传距离较远,为0.037；NJ1～4、DL2～3及DQ1～3共10株标本株与GB3聚为一支,属于亚洲带绦虫；BN1、CX1、LC1与GB2聚为一支,属于传统牛带绦虫：两支交汇后再与由DL1和GB1聚合的一支汇合。结论：（1）云南省存在三种带绦虫的流行,其中怒江和迪庆为亚洲带绦虫,西双版纳,楚雄和临沧为牛带绦虫,大理存在三种带绦虫的重复流行；（2）云南亚洲带绦虫头节存在有顶突和无顶突两种形态,传统形态学方法很难将无顶突的亚洲带绦虫和传统牛带绦虫区分。（3）PCR-RAPD技术和mtDNA COXI片段序列的测定分析均可以弥补形态学鉴定的不足,为三种带绦虫的鉴定提供可靠的分子依据；（4）PCR-RAPD技术和mtDNA COXI片段序列的测定分析可用于带绦虫的遗传多态性研究,为亚洲带绦虫具体的分类定位提供参考依据。（5） PCR-RAPD技术可以筛选出特异的基因片段用于带绦虫的分类鉴定

包怀恩,牟荣^[9]（2009）在《中国西部地区牛带绦虫的分子鉴定和生物行为研究进展》文中进行了进一步梳理本文对近年来涉及中国西部7省（区）10县（市）的牛带绦虫病的流行病学调查和驱虫治疗、成虫标本的形态学观察、11个地理虫株的分子生物学鉴定、牛带绦虫和亚洲带绦虫感染中间宿主猪和牛后囊尾蚴的发育和生物行为观察,以及中间宿主组织病理学变化的比较等进行综述,认为将亚洲带绦虫定为新物种比作为牛带绦虫的亚种更合适。

杨鹏,包怀恩,牟荣,谢红书,党荣敏^[10]（2009）在《牛带绦虫不同亚种感染家猪后血清IL-2和INF-γ含量的比较》文中指出目的通过观察比较牛带绦虫两亚种感染家猪后血清IL-2和INF-γ含量的变化,探讨牛带绦虫不同亚种所致家猪Th1细胞应答机制。方法用亚洲牛带绦虫虫卵和传统牛带绦虫虫卵分别灌胃20d龄健康乳猪各5头,以健康乳猪5头作对照,于感染后第7、15、45和75d抽取猪耳缘静脉血,常规分离血清。用ELISA试剂盒检测血清IL-2和INF-γ含量。结果正常组血清IL-2和INF-γ含量在不同时期基本处于稳定水平;亚洲牛带绦虫组血清IL-2和INF-γ在第7d含量最高,远高于传统牛带绦虫组（P<0.01）,15d含量降低,远低于传统牛带绦虫组,两个实验组在第45d和75d无显着差异;与正常组相比,两个实验组血清IL-2和INF-γ含量在第7、15和75d均明显高于正常组（P<0.01）。结论牛带绦虫两个亚种感染家猪后,早期Th1细胞应答较强,中期Th1细胞应答较低,晚期Th1细胞应答增强,但亚洲牛带绦虫所致家猪Th1细胞应答在第7d最强,传统牛带绦虫所致家猪Th1细胞应答在第15d最强。

二、贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究（论文提纲范文）

（1）亚洲带绦虫实验感染乳猪肝脏的蛋白质组研究（论文提纲范文）

（2）免疫机能正常小鼠感染亚洲带绦虫的实验研究（论文提纲范文）

（4）云南亚洲带绦虫MPCR鉴定及遗传多态性比较性分析研究（论文提纲范文）

（5）两种带绦虫感染家猪的病理学比较研究（论文提纲范文）

（6）亚洲牛带绦虫感染家猪后血清IL-4和IL-10含量检测（论文提纲范文）

（7）云南大理6地域带绦虫的分类研究（论文提纲范文）

（8）云南省6地域带绦虫形态学及分子鉴定分析研究（论文提纲范文）

（9）中国西部地区牛带绦虫的分子鉴定和生物行为研究进展（论文提纲范文）

四、贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究（论文参考文献）

• [1]亚洲带绦虫实验感染乳猪肝脏的蛋白质组研究[D]. 许士刚. 贵州医科大学, 2017(01)
• [2]免疫机能正常小鼠感染亚洲带绦虫的实验研究[J]. 刘晓焱,郭光武,陈利红,莫兴泽,余跃生. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2015(04)
• [3]亚洲牛带绦虫与传统牛带绦虫实验动物感染研究[J]. 陈利红,包怀恩. 黔南民族医专学报, 2012(02)
• [4]云南亚洲带绦虫MPCR鉴定及遗传多态性比较性分析研究[D]. 李彦. 大理学院, 2012(10)
• [5]两种带绦虫感染家猪的病理学比较研究[J]. 令狐艳,朱武军,包怀恩,陈艳,李建华. 黑龙江畜牧兽医, 2011(05)
• [6]亚洲牛带绦虫感染家猪后血清IL-4和IL-10含量检测[J]. 杨鹏,党荣敏,谢洪书,刘元忠. 中国公共卫生, 2010(08)
• [7]云南大理6地域带绦虫的分类研究[D]. 罗浪. 大理学院, 2010(02)
• [8]云南省6地域带绦虫形态学及分子鉴定分析研究[D]. 张辉. 大理学院, 2010(03)
• [9]中国西部地区牛带绦虫的分子鉴定和生物行为研究进展[J]. 包怀恩,牟荣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2009(06)
• [10]牛带绦虫不同亚种感染家猪后血清IL-2和INF-γ含量的比较[J]. 杨鹏,包怀恩,牟荣,谢红书,党荣敏. 中国人兽共患病学报, 2009(11)

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