一、肝癌γ-谷氨酰转肽酶糖链的凝集素亲和分析（论文文献综述）
徐学文[1]（2021）在《糖基化标志物在肝胆肿瘤临床诊断中的应用研究》文中提出原发性肝癌（Primary liver cancer,PLC）是我国常见第四位恶性肿瘤和第二位肿瘤致死病因,主要组织学类型有三种:肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）、肝内胆管癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC）及混合型肝癌（HCC-ICC）。胆道肿瘤（Biliary tract cancers,BTC）包括胆管癌（cholangiocarcinoma）、胆囊癌（gallbladder cancer）,是由胆道或是胆囊上皮的胆管细胞分化形成的一组异型性肿瘤,两者都属于消化系统肿瘤中致死率极高的肿瘤。早发现、早诊断和早治疗可极大程度地改善肝胆肿瘤患者预后。随着检测技术和影像学技术等的飞速发展,肿瘤诊断取得很大进步,但是由多因素、多阶段以及多种生物学行为共同作用形成的恶性肿瘤,异质性强,表现形式多样,目前尚没有灵敏度和特异性都满足临床需求的肝胆肿瘤标志物。目前临床使用的肿瘤标志物大部分都是糖蛋白,如甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等,但是常规的基于抗原-抗体反应原理的检测不能对糖蛋白糖链部分进行分析。糖链通过共价结合的方式连接在蛋白多肽骨架的特定氨基酸上的过程称为蛋白质糖基化。N-糖基化和O-糖基化是两种主要的糖基化类型。人体内约70%的蛋白质为糖蛋白,糖基化是重要的蛋白质翻译后修饰方式之一,主要发生于高尔基体和内质网。大量研究表明:生命体内存在活跃的蛋白质糖基化过程,并与多种疾病（如急慢性炎症性疾病、恶性肿瘤等）的发生、发展密切相关。研究恶性肿瘤中糖基化改变以及寻找肿瘤中的糖基化标志物,对肿瘤的早期诊断、疾病进程监测、预后评估和寻找治疗靶点都有重要的理论和现实意义。本课题组前期采用凝集素印迹（Lectin Blot）、凝集素芯片（Lectin microarray）以及糖蛋白电泳等技术对肝胆肿瘤的异常糖基化及其临床应用进行了系列研究与探索。本研究在前期工作基础上,进一步从N-糖组和特定糖基化糖蛋白两个方面,探讨糖基化标志物在肝胆肿瘤临床辅助诊断、动态随访及疗效监测中的价值。第一部分:基于血清N-糖指纹图谱检测技术的肝内胆管癌（ICC）与肝细胞癌（HCC）鉴别诊断模型的构建ICC是PLC的组织学类型之一,仅次于HCC。但ICC与HCC相比,进展更快,对放化疗不敏感,ICC患者预后较差。临床上一般采用影像学方法对ICC进行诊断,但准确性不足,存在被误诊为HCC的可能。因此,ICC与HCC的鉴别诊断非常重要,可帮助临床做出精准的治疗决策。本部分研究纳入本院2014年-2019年间行手术切除且经病理确诊为ICC患者210例和HCC患者210例,采用高通量血清N-糖指纹图谱检测技术（N-Glycan Finger Print,NGFP技术）进行血清蛋白N-糖谱分析,试图寻找ICC与HCC的N-糖谱特征性差异。经差异性分析和多因素Logistc回归分析结果,基于6个N-聚糖结构[NGA2FB（Peak2）,NG1A2F（Peak3）,NA2（Peak5）,NA2F（Peak6）,NA3（Peak8）和NA4（Peak11）]建立nomogram模型用于鉴别ICC与HCC。其在训练组ROC曲线下面积（0.845,95%CI:0.788-0.902）优于AFP、CEA和CA 19-9（AFP:0.793,95%CI:0.732-0.854;CEA:0.592,95%CI:0.496-0.687;CA19-9:0.674,95%CI:0.582-0.767）。在验证组亦达到同样效果（AUC:0.810,95%CI:0.728-0.891）,可见模型对ICC与HCC的鉴别诊断展示了良好的诊断效能。此外,本部分研究于2014年-2020年对53例ICC与263例HCC患者进行术后随访研究,并根据术前血清N-糖指纹图谱计算nomogram模型得分,分析模型对ICC患者术后预后评估价值。结果显示:nomogram模型可对ICC患者术后生存期、复发风险进行预测,高危组患者（术前nomogram大于238.31）术后总生存期比低危组（术前nomogram小于238.31）短,更易复发,提示临床需要积极监测与强化治疗,以提前预防肿瘤复发,延长患者生存期。综上,我们建立的基于NGFP技术的nomogram诊断模型,可有效鉴别诊断ICC与HCC,并对ICC患者术后预后评估具有一定价值,为临床ICC患者的诊断与治疗方案的选择提供了新思路。第二部分基于凝集素捕获技术的唾液酸化Fetuin A检测方法的建立及其在原发性肝癌中的应用本部分研究基于抗体-凝集素双夹心技术原理,在前期课题组系列异常糖基化特定蛋白研究的基础上,按课题组承担的2018年国家科技部传染病重大专项（2018ZX10302205-003）研究计划,聚焦唾液酸化的胎球蛋白A,利用乏唾液酸化的胎球蛋白A抗体与识别糖蛋白唾液酸糖型的黑接骨木凝集素（Sambucus nigra lectin,SNA）自建Lectin-ELISA检测方法,检测血清中唾液酸化的胎球蛋白A水平。通过对560例样本（健康对照组100例、慢性乙型肝炎组124例、肝硬化组36例、肝细胞癌组300例）的检测发现HCC组血清SNA-Fetuin A水平显着高于非患癌组（1.362±0.31 vs 1.152±0.38）（p<0.001）,提示胎球蛋白A的唾液酸化结构改变与肝癌的发生发展可能具有潜在的联系。将SNA-Fetuin A与AFP通过逻辑回归构建诊断模型Logist SNA-F1=-2.884+2.675×SNA-Fetuin A+0.034×AFP。诊断模型Logist SNA-F1用于HCC与非患癌组的鉴别诊断,其ROC曲线下面积达0.860（95%CI:0.815-0.915）,显着高于AFP（0.809,95%CI:0.763-0.854）与SNA-Fetuin A（0.790,95%CI:0.731-0.850）单项指标。此外,我们还发现AFP阴性的HCC患者SNA-Fetuin A水平同样显着高于非患癌组（1.364±0.305 vs 1.146±0.381）（p<0.001）。进一步结合临床实验室指标构建AFP阴性的HCC诊断模型Logist SNA-F2=-13.674+2.594×SNA-Fetuin A+0.161×年龄-0.013×TBIL+0.091×ALB-0.011×ALT+0.009×AST。该诊断模型在AFP阴性的HCC患者与非患癌者的鉴别中具有较高的诊断效力,其ROC曲线下面积达0.919（95%CI:0.886-0.952）。以上研究结果提示:基于血清SNA-Fetuin A水平构建的两个诊断模型Logist SNA-F1、Logist SNA-F2对HCC及AFP阴性HCC的鉴别诊断具有较高的临床应用价值。综上两部分的研究,基于NGFP技术nomogram模型对于临床原发性肝癌ICC和HCC的鉴别和预后评估具有一定应用价值和转化前景;本研究自建的Lectin-ELISA检测SNA-Fetuin A,可补偿临床AFP敏感性不足,为AFP阴性的HCC患者提供了新的辅助诊断指标。
虞倩,潘柏申[2]（2020）在《解读遗传性血清GGT独酶升高新机制》文中研究说明γ-谷氨酰转移酶（GGT）是生物体内参与谷氨酰循环的关键酶,具有重要的抗氧化、解毒功能,参与维护膜完整性,影响氨基酸向细胞内转运、蛋白质代谢与细胞分化发育。基于化学速率法的外周血GGT酶活性检测在肝胆系统疾病中的异常检出率极高,被广泛用于疾病提示与监测。其诊断灵敏度高,但特异性差,正常结果可协助肝病排除诊断,异常则需联合其他指标进一步解读。在实际临床中,常需就各种原因引起的GGT独酶升高（又称GGT血症）进一步鉴别。
詹先林[3]（2020）在《α2巨球蛋白及其核心岩藻糖基化在肝细胞癌中的临床诊断研究》文中研究指明原发性肝癌（Primary liver Cancer,PLC）是目前全球性的重大健康问题之一,死亡率高,在我国乃至全球范围都是非常常见的恶性肿瘤之一,在我国肿瘤致死病因方面排名已经高居第二位。肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是原发性肝癌的最常见的类型。我国HCC发病因素主要和乙型肝炎病毒等相关,肝炎的不良转归包括肝硬化、肝癌,但是肝癌的起病比较隐匿,发现时患者已多为中晚期。全球每年大约有50.5%新发患者、51.4%癌症相关的患者死亡发生在中国。当前被广泛使用的肝癌诊断标志物是甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein,AFP）,但是它在一些肝脏良性疾病中也会升高,不能满足临床肝癌诊断的需求。糖基化是对蛋白质的一种重要修饰,有着调节蛋白质功能作用。在人类多种疾病比如:肿瘤、免疫性疾病等的发生发展过程中伴随有蛋白质糖基化的异常修饰。近年来,糖组学的研究备受关注,国内外研究包括本实验室采用包括质谱、毛细管电泳等糖基化研究技术从糖基化水平寻找了肝癌、肝硬化的差异蛋白,采用基于基质辅助激光解吸电离-质谱（Matrix assisted laser desorption ionization mass spectrometry,MALDI-MS）的方法对不同肝病患者血清单个蛋白糖链结构进行了分析研究,探究其对肝癌的临床应用价值,揭示这些差异糖蛋白作为肝癌标志物有一定的应用前景。目前临床应用的肿瘤血清标志物大部分是糖蛋白,糖基化发生改变的糖蛋白已经开始应用于人类疾病的诊断及预后评估,如AFP和核心岩藻糖基化的AFP即甲胎蛋白异质体（Alpha-fetoprotein-L3,AFP-L3）。α2巨球蛋白（Alpha2 macroglobulin,AMG）是血浆中分子量最大的蛋白质,主要由肝细胞和单核-巨噬细胞系统合成。它的720KDa的四聚体结构在维持细胞因子和生长因子的稳态中发挥重要作用,其作为机体一种重要的急性时相反应蛋白,参与了机体多种疾病的病理生理。AMG可以被细胞内蛋白酶激活,激活的AMG与相应的细胞表面受体结合,作为许多信号通路的一种调节因子,参与细胞调控,在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。Poon等人的研究结果提示,肝癌组织中AMG的表达显着高于正常肝组织。葡萄糖调节蛋白78（Glucose-regulated protein 78,GRP78）是AMG特异性结合的细胞表面受体。AMG与细胞表面GRP78结合可以促进表皮生长因子受体（Epithelial growth factor receptor,EGFR）与非受体酪氨酸蛋白激酶（Cellularsarcoma kinase,c-Src）相互作用,在Y1101和Y845位点磷酸化EGFR,促进肝癌侵袭和转移。本课题在本实验室前期有关肝病N-糖标志物系列研究的基础上,聚焦血清中特定蛋白之一-AMG为研究靶分子,探讨AMG在肝癌发生发展中的改变,阐述其血清水平改变与肝癌发生发展的相关性,并在此基础上,采用能与核心岩藻糖特异性结合的小扁豆凝集素（Lens culinaris agglutinin,LCA）,建立核心岩藻糖基化AMG（LCA-AMG）的检测方法检测异常糖基化修饰的特定蛋白。在临床水平研究其蛋白水平及其岩藻糖基化水平在慢性乙型肝炎（ChronichepatitisB,CHB）、肝硬化（Livercirrhosis,LC）及HCC中的改变和潜在临床诊断价值。第一部分:血清α2巨球蛋白在肝细胞癌中的临床诊断研究本研究分析HCC、LC和CHB的血清AMG水平并评价其临床意义。收集HCC患者402例,非HCC肝病患者151例（包括LC患者135例和CHB患者16例）,使用免疫散射比浊法检测各病例组的AMG血清水平,HCC、LC和CHB组血清AMG水平分别为2.32（1.90,2.74）、2.02（1.66,2.48）、1.89（1.58,2.77）[中位数（25%百分位数,75%百分位数）]（单位:g/L）。研究发现,相对于LC组,HCC组的血清AMG水平明显升高（P<0.001）;HCC组和CHB组无显着统计学差异（P>0.05）。HCC组血清AMG水平明显高于疾病对照组（包括LC和CHB）且存在显着统计学差异[2.32（1.90,2.74）vs 1.98（1.65,2.48）,P<0.001]。其中HCC患者AMG水平与多个临床指标如透明质酸（Haluronicacid,HA）、球蛋白（Globulin,GLB）、白蛋白（Albumin,ALB）、总蛋白（Totalprotein,TP）、谷氨酰转肽酶（Glutamyltranspeptidase,GGT）等存在一定相关性（P<0.05）,其中AMG与HA（R=0.115,P=0.022）、GLB（R=0.235,P<0.001）、ALB（R=0.157,P=0.002）、TP（R=0.292,P<0.001）呈正相关,与实验室临床其他指标如GGT（R=-0.105,P=0.037）等呈负相关。AMG在HCC不同TNM分期及微血管侵犯（Microvascular invasion,MVI）间无明显差异。对于随访的肝细胞癌患者,通过生存曲线分析,发现在肝细胞癌患者中,血清中AMG高值组的肝细胞癌患者的无病存活率较低,生存率也较低（P<0.05）。第二部分核心岩藻糖基化α2巨球蛋白在肝细胞癌中的临床诊断研究本研究收集413例血清标本,其中包括193例HCC患者、104例LC患者、45例CHB患者及71例健康对照组（Healthycontrol,HC）,用于分析探讨核心岩藻糖基化α2巨球蛋白从非HCC中鉴别诊断HCC的应用价值。LCA亲和层析柱与免疫散射比浊法相结合的方法进行血清核心岩藻糖基化α2巨球蛋白定量测定。研究结果发现:核心岩藻糖基化α2巨球蛋白（LCA-AMG）,HCC、LC、CHB和HC组检测结果分别为:0.74（0.55,0.94）、0.56（0.42,0.72）、0.54（0.45,0.93）和0.35（0.28,0.44）[中位数（25%百分位数,75%百分位数）]（单位:g/L）,HCC组明显高于LC组和HC组,且具有明显统计学意义（P<0.001）,HCC组和CHB组无明显统计学差异（P>0.05）,LC组和CHB组均高于HC组（P<0.001）;从非HCC（LC、CHB和HC）中鉴别HCC,ROC曲线下面积为0.751,95%可信区间:0.706～0.792。核心岩藻糖基化α2巨球蛋白/α2巨球蛋白×100（简称 LCA-AMG%）,HCC、LC、CHB 和 HC组结果分别为31.25（26.61,35.42）、26.00（22.30,30.64）、26.23（23.86,31.89）、20.29（17.35,22.60）[中位数（25%百分位数,75%百分位数）],HCC组高于LC组,具有显着统计学意义（P<0.001）,高于CHB组（P<0.01）,也高于HC组（P<0.001）;LC组和CHB组均高于HC组（P<0.001）;从非HCC（LC、CHB和HC）中鉴别HCC,ROC曲线下面积为0.768,95%可信区间:0.725～0.808。HCC组血清LCA-AMG与临床部分检测指标具有一定相关性,与碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）、γ-谷氨酰转肽酶（Glutamyltranspeptidase,GGT）等呈负相关（R=-0.160,P=0.029;R=-0.214,P=0.003）;血清LCA-AMG%与临床部分肝功能相关指标也具有一定相关性,如:和总胆红素（Total bilirubin,TBIL）、直接胆红素（Direct Bilirubin,DBIL）等呈正相关（R=0.157,P=0.030;R=0.148,P=0.041）;与球蛋白（Globulin,GLB）、ALP、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）等呈负相关（R=-0.193,P=0.008;R=-0.151,P=0.040;R=-0.212,P=0.004）;与谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase,AST）、AFP、谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase,ALT）、糖类抗原 199（Carbohydrateantigen199,CA199）、癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen,CEA）等无明显相关性。从非HCC中鉴别诊断HCC,使用logistics回归建立联合诊断模型:LogitAMG1=-5.102+0.462×AMG+0.140×LCA-AMG%,曲线下面积为0.776,95%可信区间:0.733～0.816。LogitAMG2=-4.025+0.007×AFP+0.163×LCA-AMG%-0.080×TBIL,曲线下面积为0.918,95%可信区间:0.887～0.943。LCA-AMG%在检测AFP阴性HCC中的诊断效率提示:LCA-AMG%曲线下面积为0.782,95%可信区间:0.726～0.832,敏感度为77.42%,特异度为71.36%。随着肿瘤直径的增加,血清LCA-AMG%有递减的趋势。血清LCA-AMG%在HCC不同AFP浓度、TNM分期、MVI分级及有无包膜间均无明显差异。本研究提示LCA-AMG%对于HCC以及AFP阴性HCC患者的鉴别诊断可能具有潜在的应用前景。
关雯倩[4]（2019）在《转铁蛋白和α1-酸性糖蛋白及其多天线修饰改变在HBV相关肝病中的研究》文中研究指明原发性肝癌（Primary liver cancer,PLC）是我国第4位常见的恶性肿瘤和第3位肿瘤致死病因,包括两种主要的组织学类型:肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）和肝内胆管细胞癌（Intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC）,其中HCC占我国肝癌总数的83.9%92.3%。乙型肝炎病毒（HBV）感染和HCC发生的相关系早已明确。HBV感染导致的肝癌比例高达70%80%,我国的肝癌患者多具有乙肝和肝硬化背景。第一部分转铁蛋白在HBV相关肝病血清中的变化及其临床意义转铁蛋白（Transferrin,TRF,TF）调控铁在体内的吸收、转运、利用和储存,并维持体内铁平衡。由于TRF主要由肝细胞分泌,肝脏疾病对TRF水平的影响及其临床意义具有研究价值。本部分研究对肝细胞癌（HCC）、肝内胆管癌（ICC）、肝硬化（Liver cirrhosis,LC）、慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B,CHB）和健康体检者（Healthy control,HC）的血清TRF进行评估,并对血清TRF水平与疾病特征和相关临床指标进行分析。利用西门子BN-Ⅱ特定蛋白仪对685例样本血清进行检测,结果发现血清TRF水平在HCC、ICC、LC、CHB和HC组分别为1.82±0.50、1.83±0.58、2.32±0.70、2.57±0.82、1.40±0.59（均数±标准差,单位:g/L）,LC、CHB组TRF水平显着高于HCC组（p<0.001）,HC组TRF水平显着低于HCC组（p<0.001）,ICC组TRF水平与HCC组无统计学差异（p>0.05）。血清TRF水平与多个实验室肝功能相关指标间具有相关性:与总胆汁酸（TBA,R=-0.135）、直接胆红素（DBIL,R=-0.085）等呈负相关（p<0.05）,与白蛋白（ALB,R=0.262）、总蛋白（TP,R=0.218）、血小板（PLT,R=0.240）、红细胞（RBC,R=0.228）、血红蛋白（HGB,R=0.238）等呈正相关（p<0.05）,与实验室指标白蛋白球蛋白比值（A/G）、总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、甲胎蛋白（AFP）、癌抗原（CA19-9）等间无明显相关性（p>0.05）。但TRF在HCC不同临床分期和MVI分级间无差异。综合上述结果可知,HCC患者的TRF水平介于健康人和良性疾病之间,且和ICC无差异,因此TRF可能不适合单独应用于HCC的鉴别诊断。第二部分基于凝集素芯片的血清转铁蛋白聚糖结构分析糖基化是一种重要的蛋白质翻译后修饰,血清中50%-70%的蛋白均为糖基化修饰蛋白。异常糖基化改变与肿瘤的发生、发展和转移具有密切关系。凝集素芯片的应用使同时检测多种糖链结构种类和丰度成为可能。我们用含有45个凝集素的Lec Chip TM凝集素素芯片分析从HCC、ICC、LC和HC血清中分离纯化出的TRF,结果显示19个凝集素在HCC、ICC、LC、HC四组中的分布的差异具有统计学意义的差异（p<0.05）。在患癌组中高于非患癌组的凝集素有SNA、SSA,在non-CA中高于CA的凝集素有LTL、AOL、MAL、PHAL、ACG、ECA、RCA120、NPA、Con A、GNA、TJAⅡ、EEL、UDA、Jacalin、HPA、PTLⅠ。根据不同凝集素识别的特定糖链结构,本研究提示,在HCC、ICC、LC和HC四组中有差异的糖链结构主要包括核心岩藻糖（Fucα1-6Glc NAc）、唾液酸（Sia）、半乳糖β1-4连接的N-乙酰半乳糖胺（Galβ1-4Glc NAc）、三、四天线的复杂N-聚糖（Tri/Tetra-antennary complex-type N-glycan）和高甘露糖（High Man）结构等,患癌组的唾液酸结构显着高于非患癌组,其余结构主要在非患癌组增高。本研究提示,TRF糖链结构种类在不同肝脏疾病和健康人中具有较大差异。第三部分凝集素酶联免疫吸附法检测DSA-TRF的方法学建立及其在原发性肝癌诊断中的初步应用TRF是肝脏合成并分泌到血清中的一种高丰度糖蛋白,含有两个N-linked糖基化位点。正常人血清中的TRF基本只含有两条二天线糖链,肝癌患者血清中TRF糖链分枝增加。本研究自行建立凝集素酶联免疫吸附法（Lectin-ELISA）对多血清天线TRF进行检测。该方法效仿“三明治”法ELISA,用抗TRF抗体包被酶标板,抓取样本中的TRF,用曼陀罗凝集素（Datura stramonium agglutinin,DSA）代替检测抗体,识别TRF的多天线结构（DSA-TRF）。以倍比稀释的混合血清作为替代标准品建立浓度-梯度曲线,并评价该方法重复性和抗干扰性。结果显示批内最大变异系数（CV%）为7.72,批间最大变异系数（CV%）为9.34,各干扰物质对该体系无明显干扰。通过对HCC、ICC、LC、CHB和HC血清样本进行检测,。通过对685例样本的检测,发现HCC组DSA-TRF（0.282±0.06）显着高于疾病对照组（0.200±0.07）和健康对照组（0.238±0.100）（p<0.001）,患癌组DSA-TRF显着高于非患癌组（vs 0.208±0.084,p<0.001）,甲胎蛋白（AFP）阴性的HCC患者DSA-TRF显着高于非患癌组（0.276±0.067 vs 0.208±0.084,p<0.001）。用Logistic回归方法构建诊断模型Logit TRF1（=55.711×DSA-TRF/TRF-8.057×DSA-TRF+0.017×AFP-0.077×TBIL+0.357×ALB-16.437）用于HCC与高危人群（LC、CHB）的鉴别诊断,Logit TRF2（=24.125×DSA-TRF-2.279×TRF-24.346×DSA-TRF/TRF-0.059×TBIL+3.315）用于AFP阴性HCC和non-HCC的鉴别诊断。通过受试者工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）分析DSA-TRF和Logit TRF1、Logit TRF2对不同疾病组的诊断价值,发现鉴别HCC与良性疾病（LC、CHB）时,DSA-TRF曲线下面积（AUC）达0.859（95%CI:0.8180.900）;Logit TRF1的AUC达0.981（95%CI:0.9710.992）。鉴别AFP阴性HCC与非肿瘤对照时,DSA-TRF的AUC达0.775（95%CI:0.7260.824）;Logit TRF2的AUC达0.839（95%CI:0.7990879）。本研究提示,DSA-TRF和诊断模型Logit TRF1、Logit TRF2对HCC以及AFP阴性HCC的鉴别诊断可能具有应用前景。第四部分凝集素酶联免疫吸附法检测DSA-AGP及其在原发性肝癌诊断中初步的应用α1-酸性糖蛋白（α1-Acidglycoprotein,AAG/AGP）是肝细胞合成分泌至血浆的一种急性时相蛋白,是血清中含糖量较高的特定蛋白之一,具有5个N-linked糖基化位点。在HCC中,异常岩藻糖基化的AGP已有相关报道,但关于HCC中AGP的多天线糖链如何改变尚缺乏相关文献报道。本研究建立了凝集素酶联免疫吸附法（Lectin-ELISA）检测HCC、ICC、LC、CHB和HC样本血清中多天线AGP（DSA-AGP）水平,同时配对检测样本血清AGP水平。结果提示HCC组DSA-AGP（0.471±0.07）显着高于疾病对照组（0.443±0.09）和健康对照组（0.389±0.10）（p<0.001）;HCC组AGP显着高于HC（0.63±0.30 vs 0.45±0.15,单位:g/L,p<0.001）。患癌组（HCC和ICC）DSA-AGP和AGP显着高于非患癌（0.462±0.08 vs 0.428±0.10;0.67±0.32 vs 0.52±0.28,单位:g/L,p<0.001）。AFP阴性HCC患者血清DSA-AGP和AGP显着高于non-HCC患者（0.478±0.09 vs 0.428±0.10,p<0.001;0.60±0.28 vs 0.52±0.29,单位:g/L,p<0.05）。用Logistic回归方法联合DSA-AGP、AGP和临床指标（AFP、TBIL、ALB）构建了两个诊断模型:Logit AGP1（=6.578×DSA-AGP+1.445×AGP+0.013×AFP-3.258）用于HCC与非肿瘤对照的鉴别诊断,Logit AGP2（=6.912×DSA-AGP-0.126×TBIL-0.193×ALB+6.417）用于AFP阴性HCC与非肿瘤对照的鉴别诊断。ROC曲线分析血清DSA-AGP、AGP、Logit AGP1和Logit AGP2的诊断价值发现诊断HCC时,Logit AGP1的AUC达0.836（95%CI:0.7970.874）,显着高于DSA-AGP（0.651,95%CI:0.5940.707）、AGP（0.632,95%CI:0.5770.687）及AFP（0.803,95%CI:0.7480.836）单项;诊断AFP阴性HCC时Logit AGP2的AUC达0.929（95%CI:0.8990.959）,显着高于DSA-AGP（0.669,95%CI:0.6030.735）和AGP（0.607,95%CI:0.5360.678）单项。本研究提示DSA-AGP对HCC及AFP阴性HCC的鉴别诊断可能具有应用前景。
曹雪妍[5]（2019）在《不同泌乳期人乳与牛乳乳清和乳脂肪球膜N-糖蛋白质组学差异研究》文中研究表明母乳含有婴幼儿生长发育所需的全部营养成分,为满足婴幼儿不同生长发育时期的需求,母乳成分会随泌乳期变化。世界卫生组织推荐至少母乳哺育6个月,然而目前仍有大量婴幼儿需要配方乳粉作为母乳的替代品。为研制更接近母乳的婴幼儿配方乳,全面研究人乳成分十分重要。目前生产婴幼儿配方乳主要是以牛乳为基础,然而人乳与牛乳成分存在一定差异。因此,研究人乳成分的基础上全面解析人乳与牛乳成分差异是实现婴幼儿配方乳母乳化的科学基础。母乳喂养为婴幼儿提供的短期和长期保护与母乳中的蛋白质成分息息相关。蛋白质的功能受到翻译后修饰调控,经过翻译后修饰,蛋白质的功能实现了指数级的上升。糖基化是一种最重要、最常见的蛋白质翻译后修饰类型,在分子识别、信号传导、免疫防御等过程中发挥着重要作用。解析糖蛋白及其糖基化位点是蛋白质功能研究的基础,但目前对乳蛋白质糖基化及其随泌乳期的动态变化研究仍未见深入报道。考虑到酪蛋白主要发生磷酸化修饰且其糖基化修饰已经研究的较为透彻,本研究从乳清和乳脂肪球膜（milk fat globule membrane,MFGM）两个亚组分层面,对人初乳与人常乳N-糖蛋白进行了定量糖蛋白质组学研究,并详细比较不同泌乳期人乳与牛乳N-糖蛋白的差异,丰富了人乳与牛乳N-糖蛋白质的组成及其糖基化位点的相关信息,从翻译后修饰水平揭示了N-糖基化可能赋予人乳与牛乳蛋白质的生物学功能,为深入了解不同泌乳期人乳与牛乳蛋白的功能提供了新思路,为生产更接近母乳的婴幼儿配方乳提供了一定科学依据。其主要研究结果如下:1.采用非标记定量糖蛋白质组学技术,在人乳乳清中鉴定到133个N-糖基化位点和73个N-糖蛋白,并筛选出人初乳和人常乳乳清中差异表达的68个N-糖基化位点和38个N-糖蛋白。GO功能注释分析表明人初乳与人常乳乳清差异表达N-糖蛋白主要富集的生物过程为定位,主要的细胞成分为细胞外区域部分,主要的分子功能是修饰氨基酸结合作用。此外,本研究找到了16种与免疫系统过程相关的差异表达N-糖蛋白,其中大部分糖蛋白的N-糖基化修饰水平在人初乳乳清中上调。KEGG通路分析表明人初乳与人常乳乳清差异表达N-糖蛋白对应33条通路,主要包括补体与凝血级联、溶酶体和吞噬体等与免疫相关的通路。通过蛋白互作网络分析找到低氧上调蛋白1和结合珠蛋白等高连接度的N-糖蛋白,这些蛋白可能是影响系统代谢和信号转导的关键点。2.采用非标记定量糖蛋白质组学技术,在人乳MFGM中鉴定到912个N-糖基化位点和506个N-糖蛋白,并筛选出人初乳和人常乳MFGM中差异表达的304个N-糖基化位点和220个N-糖蛋白,其中人初乳MFGM上调N-糖蛋白数量多于人常乳MFGM上调N-糖蛋白数量。GO功能注释分析表明人初乳与人常乳MFGM差异表达N-糖蛋白主要参与的生物过程为单一生物过程、生物调节和生物过程调节,主要的细胞成分是细胞器和膜,主要的分子功能是蛋白结合作用。本研究找到了17种与急性炎症反应相关的差异表达N-糖蛋白,其中大部分糖蛋白的N-糖基化修饰水平在人初乳MFGM中上调。KEGG通路分析表明人初乳与人常乳MFGM差异表达N-糖蛋白对应155条通路,主要包括吞噬体、细胞粘附因子和一些与疾病相关的的通路。同时,通过蛋白互作网络分析找到表皮生长因子和纤维连接蛋白等高连接度的N-糖蛋白。3.利用糖蛋白质组学技术研究不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白的差异,分别在人初乳、人常乳、牛初乳和牛常乳乳清中鉴定到111、96、167和139个N-糖肽和68、58、100和98种N-糖蛋白。GO功能注释分析表明人初乳与人常乳乳清糖蛋白主要参与单一生物过程,牛初乳乳清糖蛋白主要参与刺激反应,而牛常乳乳清糖蛋白主要参与生物调节;不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白主要的细胞成分为细胞外区域、细胞和细胞器;人初乳、牛初乳和牛常乳乳清N-糖蛋白主要的分子功能为蛋白结合,而人常乳乳清N-糖蛋白主要的分子功能为离子结合。KEGG通路分析表明人初乳、人常乳、牛初乳和牛常乳乳清糖蛋白分别对应66、62、95和99条通路,其中补体与凝血级联、金黄色葡萄球菌感染和细胞外基质受体相互作用通路在四组样品中均匹配到。不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白质组的全面比较分析揭示乳清N-糖蛋白在人乳与牛乳间的差异远大于其在人乳或牛乳不同泌乳期间的差异,不同泌乳期人乳与牛乳乳清仅鉴定到9个共有N-糖蛋白,人初乳、人常乳、牛初乳与牛常乳乳清分别含有9、4、34和36种特有糖蛋白。4.利用糖蛋白质组学技术研究不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白的差异,分别在人初乳、人常乳、牛初乳和牛常乳MFGM中鉴定到843、718、614和273个N-糖肽和465、423、334和176种N-糖蛋白。GO功能注释分析表明人初乳、人常乳、牛初乳和牛常乳MFGM糖蛋白注释到的生物过程、细胞成分和分子功能条目类似,参与的生物过程主要为细胞过程、单一生物过程、生物调节、生物过程调节、刺激反应和代谢过程;其他重要的生物过程包括免疫系统过程、定位、信号传递、生长和发育过程等,主要的细胞成分为细胞、膜和细胞器,主要的分子功能为蛋白结合、受体活性和水解活性。KEGG通路分析表明人初乳、人常乳、牛初乳和牛常乳MFGM糖蛋白分别对应215、197、161和127条通路,其中溶酶体、吞噬体、肺结核、补体与凝血级联和细胞粘附因子通路是四组样品主要匹配的KEGG通路。与乳清蛋白N-糖基化类似,不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白质组的全面比较分析揭示MFGM N-糖蛋白在人乳与牛乳间的差异远大于其在人乳或牛乳不同泌乳期间的差异,不同泌乳期人乳与牛乳MFGM仅鉴定到69个共有N-糖蛋白,人初乳、人常乳、牛初乳与牛常乳MFGM分别含有67、48、108和13种特有糖蛋白。
孟舒婷,崔翔[6]（2019）在《HS-AFP的分离检测在肝癌诊断和预后判断中的应用价值》文中进行了进一步梳理目的:探讨肝癌特异性甲胎蛋白（hepatoma-specific alpha fetal protein, HS-AFP）在肝癌诊断、鉴别诊断、预后判断及癌变预测方面的临床价值。方法:选取南通大学附属海安医院收治的原发性肝癌患者81例,肝硬化44例,慢性肝炎41例,同时选取健康体检者30例作为对照,采用血清HS-AFP阶段梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳结合免疫印迹技术分离甲胎蛋白（alpha fetal protein, AFP）区带。结果 :HS-AFP在原发性肝癌患者的阳性率为75.3%,肝硬化为9.1%,慢性肝炎为7.3%;AFP在原发性肝癌患者的阳性率为72.8%,肝硬化为45.4%,慢性肝炎为36.6%。良性肝病（肝硬化、慢性肝炎）中HS-AFP的阳性率明显低于AFP的阳性率,表明HS-AFP对肝癌的诊断价值优于AFP。肝癌患者治疗后HS-AFP的表达对肝癌患者预后判断具有重要价值。结论:HS-AFP可作为肝癌诊断的一项独立指标。
王蒙蒙[7]（2018）在《血清糖蛋白糖基化分析技术研究及其在原发性肝癌诊断中的应用》文中指出原发性肝癌是目前威胁人类健康的主要恶性肿瘤类型之一。在我国,肝癌的发病率处于所有恶性肿瘤的第四位,死亡率位居第三位。由于大部分患者确诊时肿瘤已处于中晚期,手术治疗后复发率、转移率高,因而远期生存质量差,五年生存率低。早期诊断、早期干预对肝癌患者的预后改善至关重要。血清甲胎蛋白（AFP）是目前最常用的肝癌诊断标志物。但其敏感性仅为6070%,且在部分肝脏良性疾病中表达上升,诊断效能不能满足临床需要。因此,寻找更加理想的生物标志物或多参数诊断模型是肝癌诊疗研究的重要方向。此外,对于影响肝癌预后的重要病理因素,采用血清无创性检测方法做出预测,对患者的个体化诊疗和临床医生治疗方案的制定具有重要价值。既往的肿瘤生物标志物研究主要集中在蛋白及核酸研究中,忽略了糖链或聚糖这类重要的生物大分子。糖链通过共价结合的方式连接在蛋白多肽骨架的特定氨基酸上的过程称为蛋白质糖基化。N-糖基化和O-糖基化是两种主要的糖基化类型。人体内大约70%的蛋白质是糖蛋白。糖基化是最常见、最复杂的蛋白质翻译后修饰形式,对蛋白的结构和功能具有重要的调节作用。糖链的功能涉及细胞粘附、细胞间相互作用、信号转导、免疫调节等一系列生物学过程。大量研究表明:聚糖直接参与了人类几乎所有重大疾病包括肿瘤的病理生理学过程。因此,对糖科学知识的了解为疾病相关的基础和临床研究提供了一个新的角度,糖组学、糖蛋白质组学、糖生物学逐渐受到关注。目前临床使用的肿瘤标志物大部分是糖蛋白,包括AFP、癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等。研究癌症相关的特征性糖链对肿瘤的诊断、病程监测、预后评估及靶向治疗具有重要价值。但是糖链的复杂性及多样性为相关结构与功能研究带来巨大挑战,糖科学的发展远远落后于基因组学及蛋白组学。本研究采用目前主流的糖基化研究技术包括质谱、毛细管电泳等对血清特定蛋白来源的N-糖链、总血清池N-糖链结构进行分析,探究其对肝癌的诊疗价值。尝试建立位点特异的N-糖肽分析方法,对糖基化的微观不均一性进行表征。同时,通过转录组测序对异常糖基化相关的调控机制进行初步探索。第一部分:血清IgG来源的N-糖链结构分析及其在原发性肝癌中的诊断价值研究本部分采用基于基质辅助激光解吸电离-质谱的分析方法对对不同病因来源的肝细胞癌（HCC）、肝硬化（LC）患者血清中IgG来源的糖链进行鉴定与比较。结果表明:肝癌发生过程中,血清IgG上主要的糖链结构会发生改变。总体上,与LC患者相比,HCC患者血清IgG上N-糖链的半乳糖基化水平呈下降趋势。不同的糖链结构在HCC和LC中是否存在显着性差异与病因学因素有关。对于HCV相关的HCC患者,部分糖链结构与临床病理指标如肿瘤大小、TNM分期等存在相关性。此外,血清IgG来源的N-糖链对HCC特别是AFP阴性的HCC患者具有重要的补充诊断价值。第二部分血清蛋白N-糖谱与HBV相关HCC患者临床病理特征的相关性研究本部分采用快速、高通量的DSA-FACE技术对HBV相关的HCC患者血清蛋白N-糖表达谱进行分析,并探讨与临床病理指标间的关系。结果表明:血清聚糖结构的丰度与微血管侵犯（MVI）、肿瘤大小、门静脉癌栓（PVTT）、肝硬化、分化情况等重要的临床病理因素具有相关性。同时,尽管N-糖结构和相应的诊断模型对MVI的预测能力并不理想,但其诊断效能并不低于经典的标志物AFP。通过病例随访及数据分析发现,Peak12（NA4Fb,含一个分支岩藻糖的四天线聚糖结构）是患者术后复发的独立危险因素,Peak9’（NA3F,核心岩藻糖基化的三天线聚糖结构）、Peak12是术后死亡的独立危险因素。第三部分基于LC-MS的位点特异的N-糖肽分析方法研究本部分以血清Alpha-1抗胰蛋白酶（A1AT）和纤连蛋白（Fibronectin）为研究靶蛋白,采用液相色谱-质谱技术探索建立血清糖蛋白位点特异的N-糖肽分析方法,实现对A1AT和Fibronectin糖基化的微观不均一性的表征。同时,采用免疫沉淀的方法纯化HCC和LC患者血清A1AT并进行位点特异的N-糖肽分析,发现三种差异糖肽结构,为更加精确的揭示肿瘤发生发展过程中蛋白的糖基化异常提供参考。第四部分肝癌细胞株（SMMC-7721）中Alpha-1,6岩藻糖基转移酶（FUT8）的敲除及转录组测序本部分在肝癌细胞株SMMC-7721中对核心岩藻糖结构形成的关键酶Alpha-1,6岩藻糖基转移酶（FUT8）进行敲除及验证。同时,对敲除前后的细胞采用Illumina Hiseq平台进行转录组测序,采用荧光定量PCR对测序数据进行验证。通过生物信息学分析对211个差异基因的功能进行注释并对涉及的主要信号通路（PI3K/AKT通路等）进行富集,为肝癌异常糖基化调控的分子机制研究提供线索。综上,本课题综合采用多种研究方法,在多个层面对血清特定蛋白的N-糖链、血清总蛋白N-糖表达谱及完整的N-糖肽进行分析,寻找与肝癌相关的异常糖基化结构,为糖科学在肿瘤临床诊疗中的应用提供依据。此外,通过转录组测序对异常糖基化的调控网络进行了初步探索,相关机制还需要进一步研究。
姬晓曦,马莺[8]（2017）在《水牛和奶牛乳脂肪球膜蛋白组成和功能性的比较》文中研究指明为比较不同乳源的乳脂肪球膜蛋白（MFGMPs）蛋白质组成、含量和功能差异,用iTRAQ技术对水牛和奶牛MFGMPs进行分离、比较.采用Nano-HPLC-MS联合Q-Exactive的方法,对MFGMPs进行分离和鉴定,共鉴定出FDR≤0.01%的蛋白质424个,差异极显着蛋白146个,其中2倍（水牛/奶牛）上调蛋白20个,下调蛋白25个.水牛MFGMPs差异蛋白为磷酸钠溶质载体蛋白和γ-谷氨酰转肽酶,这两种蛋白具有载体和催化活性,为生物体的合成、代谢提供基本组分.奶牛MFGMPs差异蛋白为黄嘌呤氧化还原酶和嗜乳脂蛋白,这两种蛋白属于结合蛋白,具有抑制肿瘤细胞的功能特性.结果表明,奶牛和水牛MFGMPs中部分功能性蛋白在含量上存在一定的差异.
曾清芳[9]（2017）在《N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V在卵巢癌细胞中的生物学功能及其机制研究》文中提出研究目的卵巢癌是死亡率最高的女性生殖系统恶性肿瘤,发病隐匿,其发病率和死亡率近年来有逐渐上升的趋势。由于缺乏特异性症状及有效的检查手段,大多数患者诊断时已处于卵巢癌晚期,且常已发生盆腹腔转移,给治疗带来很大的困难。尽管近年来手术和化疗药物都有所改进,但晚期卵巢癌患者的5年生存率仍然非常低。因此,探索卵巢癌的早期诊断方法和新的治疗靶点是当前研究的热点。N-糖基化是蛋白质翻译后修饰最常见的方式之一,与肿瘤细胞的各种生物学功能息息相关。N-糖基化的进程由多种不同的糖基转移酶催化,其中研究最多的是N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（Gn T-V）。研究发现Gn T-V在许多肿瘤的增殖、侵袭和转移中发挥重要的作用,但其在卵巢癌中的功能尚不明确。本研究主要探讨Gn T-V对卵巢癌细胞系A2780和SKOV3的增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响,并初步探讨其作用机制,为卵巢癌的早期诊断与治疗靶点研究提供理论依据。研究方法分别构建干扰与过表达Gn T-V的慢病毒载体,转染卵巢癌细胞系A2780和SKOV3,转染成功后通过RT-PCR技术检测病毒干扰/过表达效率,并通过细胞增殖实验（CCK-8法）、细胞划痕实验、Transwell实验及流式细胞术来观察Gn T-V的干扰/过表达对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响。利用Western blot检测Gn T-V的干扰/过表达后卵巢癌细胞内E-cadherin、laminin、MMP-2和MMP-9等蛋白的变化,初步探讨Gn T-V影响卵巢癌细胞生物学行为的作用机制。研究结果用慢病毒干扰了Gn T-V的表达后,RT-PCR结果显示A2780和SKOV3细胞内Gn T-V的表达明显下降,CCK-8法检测发现A2780和SKOV3细胞的增殖能力增强,划痕实验发现A2780和SKOV3细胞的迁移能力增强,Transwell实验发现A2780和SKOV3细胞的侵袭能力增强,流式细胞术发现A2780和SKOV3细胞的细胞周期得到促进,Western blot结果显示Gn T-V的表达降低后,A2780和SKOV3细胞内的E-cadherin的表达水平下降,而MMP-2及MMP-9的表达增加。反之,过表达Gn T-V后,A2780和SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力都明显减弱,同时细胞内的E-cadherin的表达水平增强,laminin、MMP-2及MMP-9的表达下降。结论卵巢癌细胞中Gn T-V的表达能抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其生物学功能可能与上调E-cadherin的表达及下调laminin、MMP-2与MMP-9的表达有关。
刘峰,左媛,许文雅[10]（2012）在《血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究》文中研究指明目的建立可用于血清蔓陀罗凝集素（DSA）-γ-谷氨酰基转肽酶（GGT）检测的酶联免疫吸附法（ELISA）,并探讨其在原发性肝癌（PHC）诊断中应用价值。方法制备抗DSA-GGT单克隆抗体（McAb）,经蛋白G亲和层析柱色谱纯化后进行生物素标记,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对健康者、PHC患者和非PHC患者进行DSA-GGT检测,并进行方法学评价;采用受试者工作曲线（ROC曲线）确定DSA-GGT诊断PHC的临界值。结果所构建ELISA检测方法的最低检测限为2μg/L,平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%。健康者血清DSA-GGT水平呈正态分布,参考范围为（1.50±0.51）μg/L;经ROC曲线分析,确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L;其诊断PHC灵敏度为66.7%（28/40）、特异度为91.8%（112/122）。结论所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法具有良好方法学性能,其诊断PHC的灵敏度、特异度良好,为PHC实验室诊断提供了新的方法。
二、肝癌γ-谷氨酰转肽酶糖链的凝集素亲和分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝癌γ-谷氨酰转肽酶糖链的凝集素亲和分析（论文提纲范文）
（1）糖基化标志物在肝胆肿瘤临床诊断中的应用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一部分 基于N-糖指纹图谱检测技术的肝内胆管癌和肝细胞癌鉴别诊断模型的构建 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于凝集素捕获技术的唾液酸化Fetuin A检测方法的建立及其在原发性肝癌中的应用 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 研究工作小结 |
| 文献综述 异常糖基化糖蛋白在肝癌中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 发表论文/参加学术会议及参研课题情况 |
| 致谢 |
（2）解读遗传性血清GGT独酶升高新机制（论文提纲范文）
| 一、GGT编码基因及转录调节 |
| 二、GGT翻译调节及翻译后修饰 |
| 三、GGT组织及细胞分布 |
| 四、遗传性GGT独酶升高新机制的发现 |
（3）α2巨球蛋白及其核心岩藻糖基化在肝细胞癌中的临床诊断研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文中常见缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 血清α2巨球蛋白在肝细胞癌中的诊断价值研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 核心糖基化α2巨球蛋白在肝细胞癌中的诊断价值研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 参考文献 |
| 研究工作小结 |
| 综述 α2巨球蛋白及其糖基化在恶性肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参与课题情况 |
| 致谢 |
（4）转铁蛋白和α1-酸性糖蛋白及其多天线修饰改变在HBV相关肝病中的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩略词表 |
| 第一部分 转铁蛋白在HBV相关肝病血清中的改变和临床意义 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于凝集素芯片的血清转铁蛋白聚糖结构分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 凝集素酶联免疫吸附法检测DSA-TRF的方法学建立及其在原发性肝癌诊断中的初步应用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 凝集素酶联免疫吸附法检测DSA-AGP及其在原发性肝癌诊断中初步的应用 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 研究工作小结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间论文发表、专利、参研课题及获奖情况 |
| 致谢 |
（5）不同泌乳期人乳与牛乳乳清和乳脂肪球膜N-糖蛋白质组学差异研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 蛋白质糖基化概述 |
| 1.1.1 蛋白质糖基化类型 |
| 1.1.2 糖基化修饰对蛋白的影响 |
| 1.1.3 蛋白质糖基化特点及研究内容 |
| 1.2 糖蛋白质组学研究技术 |
| 1.2.1 糖蛋白/糖肽的分离与富集 |
| 1.2.2 糖蛋白的酶解 |
| 1.2.3 蛋白质糖基化位点的鉴定 |
| 1.2.4 糖蛋白糖链的鉴定 |
| 1.2.5 糖蛋白及糖链的定量研究方法 |
| 1.3 乳蛋白质糖基化的研究进展 |
| 1.3.1 乳中主要糖蛋白 |
| 1.3.2 乳蛋白质的糖基化位点 |
| 1.3.3 乳糖蛋白的糖链 |
| 1.3.4 乳中完整糖肽的解析 |
| 1.4 立题依据与意义 |
| 1.5 主要研究内容 |
| 1.6 技术路线 |
| 第二章 人初乳与人常乳乳清定量N-糖蛋白质组学研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 人初乳与人常乳乳清N-糖蛋白的质谱鉴定结果 |
| 2.2.2 人初乳与人常乳乳清N-糖基化位点分析 |
| 2.2.3 人初乳与人常乳乳清差异表达N-糖蛋白分析 |
| 2.2.4 人初乳与人常乳乳清差异表达N-糖蛋白的GO功能注释分析 |
| 2.2.5 人初乳与人常乳乳清差异表达N-糖蛋白的KEGG通路分析 |
| 2.2.6 人初乳与人常乳乳清差异表达N-糖蛋白的互作网络分析 |
| 2.3 讨论与小结 |
| 2.3.1 讨论 |
| 2.3.2 本章小结 |
| 第三章 人初乳与人常乳MFGM定量N-糖蛋白质组学研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 人初乳与人常乳MFGM N-糖蛋白的质谱鉴定结果 |
| 3.2.2 人初乳与人常乳MFGM N-糖基化位点分析 |
| 3.2.3 人初乳与人常乳MFGM差异表达N-糖蛋白分析 |
| 3.2.4 人初乳与人常乳MFGM差异表达蛋白N-糖蛋白的GO功能注释分析 |
| 3.2.5 人初乳与人常乳MFGM差异表达蛋白N-糖蛋白的KEGG通路分析 |
| 3.2.6 人初乳与人常乳MFGM差异表达蛋白N-糖蛋白的互作网络分析 |
| 3.3 讨论与小结 |
| 3.3.1 讨论 |
| 3.3.2 本章小结 |
| 第四章 不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白质组学差异研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白的质谱鉴定结果 |
| 4.2.2 不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖基化位点分析 |
| 4.2.3 不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白的GO功能注释分析 |
| 4.2.4 不同泌乳期人乳与牛乳乳清N-糖蛋白的KEGG通路分析 |
| 4.2.5 人乳与牛乳乳清N-糖蛋白质组的差异分析 |
| 4.2.6 乳清N-糖蛋白质组随泌乳期的变化分析 |
| 4.2.7 不同泌乳期人乳与牛乳乳清共有与特有N-糖蛋白分析 |
| 4.3 讨论与小结 |
| 4.3.1 讨论 |
| 4.3.2 本章小结 |
| 第五章 不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白质组学差异研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白的质谱鉴定结果 |
| 5.2.2 不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖基化位点分析 |
| 5.2.3 不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白的GO功能注释分析 |
| 5.2.4 不同泌乳期人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白的KEGG通路分析 |
| 5.2.5 人乳与牛乳MFGM N-糖蛋白质组的差异分析 |
| 5.2.6 MFGM N-糖蛋白质组随泌乳期的变化分析 |
| 5.2.7 不同泌乳期人乳与牛乳MFGM共有与特有N-糖蛋白分析 |
| 5.3 讨论与小结 |
| 5.3.1 讨论 |
| 5.3.2 本章小结 |
| 第六章 结论、创新点与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的文章 |
（6）HS-AFP的分离检测在肝癌诊断和预后判断中的应用价值（论文提纲范文）
| 1 对象与方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 测定方法 |
| 1.3.1 制胶 |
| 1.3.2 加样 |
| 1.3.3 电泳 |
| 1.3.4 转移 |
| 1.3.5 包被 |
| 1.3.6 一抗反应 |
| 1.3.7 二抗反应 |
| 1.3.8 显色 |
| 1.4 随访数据采集 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 血清AFP亚型电泳分离结果 |
| 2.2 各组研究对象血清HS-AFP与AFP浓度的检测结果 |
| 2.3 TACE术后AFP、HS-AFP与疗效的关系 |
| 2.4 肝癌根治术后HS-AFP与复发转移的关系 |
| 3 讨论 |
（7）血清糖蛋白糖基化分析技术研究及其在原发性肝癌诊断中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 血清IgG来源的N-糖链结构分析及其在原发性肝癌中的诊断价值研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、参考文献 |
| 第二部分 血清蛋白N-糖谱与HBV相关HCC患者临床病理特征的相关性研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、参考文献 |
| 第三部分 基于LC-MS的位点特异的N-糖肽分析方法研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、参考文献 |
| 第四部分 肝癌细胞株(SMMC-7721)中Alpha-1,6岩藻糖基转移酶(FUT8)的敲除及转录组测序 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、参考文献 |
| 研究工作小结 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 发表论文、参加学术会议及参研课题情况 |
| 致谢 |
（8）水牛和奶牛乳脂肪球膜蛋白组成和功能性的比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器和试剂 |
| 1.2 样品采集 |
| 1.3 MFGMPs的分离和蛋白含量的测定 |
| 1.4 SDS?PAGE电泳分离MFGM样品 |
| 1.5 联合纳升液相色谱和串联质谱分析 |
| 1.5.1 酶解、肽段定量及标记 |
| 1.5.2 毛细管高效液相色谱和质谱分析 |
| 1.5.3 数据分析 |
| 2 结果与讨论 |
| 2.1 蛋白质定量及SDS?PAGE电泳分离 |
| 2.2 奶牛和水牛乳脂肪球膜蛋白质组的生物信息 |
| 2.3 奶牛和水牛乳脂肪球膜蛋白质显着差异蛋白功能活性分析 |
| 2.4 奶牛和水牛乳脂肪球膜蛋白显着差异蛋白的比较 |
| 3 结论 |
（9）N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V在卵巢癌细胞中的生物学功能及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 常见糖基转移酶的功能及其与肿瘤的关系 |
| 参考文献 |
| 在读期间科研收获 |
| 致谢 |
（10）血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 McAb制备与鉴定 |
| 1.3.2 McAb纯化 |
| 1.3.3 生物素化McAb制备 |
| 1.3.4 ELISA检测方法的建立 |
| 1.3.5 DSA-GGT、AFP联合检测 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 McAb鉴定 |
| 2.2 McAb纯化 |
| 2.3 McAb生物素标记 |
| 2.4 包被抗体及生物素化抗体工作浓度的选择 |
| 2.5 DSA-GGT参考范围确定及临床患者检测 |
| 2.6 GGT活性测定 |
| 2.7 DSA-GGT与AFP联合检测诊断PHC |
| 3 讨 论 |
四、肝癌γ-谷氨酰转肽酶糖链的凝集素亲和分析（论文参考文献）
- [1]糖基化标志物在肝胆肿瘤临床诊断中的应用研究[D]. 徐学文. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(09)
- [2]解读遗传性血清GGT独酶升高新机制[J]. 虞倩,潘柏申. 肝脏, 2020(07)
- [3]α2巨球蛋白及其核心岩藻糖基化在肝细胞癌中的临床诊断研究[D]. 詹先林. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [4]转铁蛋白和α1-酸性糖蛋白及其多天线修饰改变在HBV相关肝病中的研究[D]. 关雯倩. 福建医科大学, 2019(07)
- [5]不同泌乳期人乳与牛乳乳清和乳脂肪球膜N-糖蛋白质组学差异研究[D]. 曹雪妍. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [6]HS-AFP的分离检测在肝癌诊断和预后判断中的应用价值[J]. 孟舒婷,崔翔. 南通大学学报(医学版), 2019(02)
- [7]血清糖蛋白糖基化分析技术研究及其在原发性肝癌诊断中的应用[D]. 王蒙蒙. 中国人民解放军海军军医大学, 2018(01)
- [8]水牛和奶牛乳脂肪球膜蛋白组成和功能性的比较[J]. 姬晓曦,马莺. 哈尔滨工业大学学报, 2017(08)
- [9]N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V在卵巢癌细胞中的生物学功能及其机制研究[D]. 曾清芳. 第二军医大学, 2017(01)
- [10]血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究[J]. 刘峰,左媛,许文雅. 国际检验医学杂志, 2012(22)
标签：糖蛋白论文; γ-谷氨酰转肽酶论文; 血清蛋白论文; 亲和层析论文; 蛋白质结构论文;