雌激素对2VO-OVX大鼠脑钙结合蛋白阳性神经元的影响

一、雌激素对2VO-OVX大鼠脑钙结合蛋白阳性神经元的影响（论文文献综述）

方迎艳^[1]（2018）在《青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制》文中进行了进一步梳理背景:雌激素是体内重要的甾体类激素,主要由卵巢产生,与脑功能存在密切联系。大量研究证明雌激素在保护中枢神经系统结构和功能方面发挥重要作用,比如:通过清除自由基和抗氧化应激作用、降低兴奋性氨基酸毒性和保护线粒体免受损伤等从而减少神经元凋亡;促进神经细胞突起的生长和突触结构的形成等,雌激素缺乏将导致脑功能损伤。更年期女性机体以雌激素缺乏为主要特征,更易患认知功能障碍和更严重的临床痴呆,如血管性痴呆（Vascular dementia,VD）和阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）。经双侧卵巢切除术的青年女性患认知障碍或痴呆、帕金森氏病（Parkinson’s disease,PD）的风险性明显增加。啮齿类动物卵巢切除术（Ovariectomy,OVX）,又称去势,是一种被广泛用作研究人类更年期或卵巢功能丧失的疾病建模方法。OVX实验动物以雌激素缺乏为主要特征,出现显着的认知功能减退。更年期不同脑区神经细胞的影响是否一致、分别具有什么特点等问题,尚无系统研究。同时,如何改善更年期脑损伤引起的认知障碍,是一个医学难题。由于雌激素的靶器官多、雌激素作用机制仍不十分清楚等,使雌激素和雌激素替代等疗法在临床应用受限。中国传统医学为解决这一难题提供了研究思路。大黄,是中国传统医学中经方“大承气汤”、“小承气汤”、“调胃承气汤”等的君药,上述经方能通过“通腑气”而显着改善临床认知及精神障碍。大黄素是大黄主要的单体,研究其是否具有改善OVX动物认知障碍的作用,以及相应的作用环节,对相关方剂的推广应用具有重要价值。目的:1.分析青年OVX大鼠不同脑区抑郁和痴呆相关的蛋白组基础。2.研究大黄素对青年OVX大鼠脑功能（抑郁、学习记忆和摄食等行为）的影响,并从“脑-肠轴”角度解析其中的机制。方法:1.模型复制及处理12周龄青年雌性SD大鼠（体重230280g）分为2组:假手术（SHAM,n=18）组和双侧卵巢切除术（OVX,n=18）组。为了观察大黄素治疗青年OVX大鼠的效果,将12周龄雌性SD大鼠分成4组:SHAM组（n=16）、OVX组（n=16）、OVX+大黄素组（Emodin组,n=16）和OVX+17β-雌二醇组（Estradiol组,n=16）。2.行为学检测每周进行旷场实验（Open field test,OFT）检测大鼠自发活动,术后第7周检测糖水偏好实验（Sucrose preference test,SPT）、强迫游泳实验（forced swimming test,FST）、OFT评价大鼠的行为学状态,术后第8周Mirros水迷宫实验（Mirror water maze test,MWMT）检测大鼠的认知能力。3.蛋白组学分析MWMT检测结束取SHAM组和OVX组大鼠4个脑区的组织:前额叶皮层（Prefrontal cortex,PFC）、海马（Hippocampus,HIP）、下丘脑（Hypothalamus,HYP）和杏仁核（Amygdala,AMY）,利用基于i TRAQ标记,Orbitrap Q-Exactive质谱仪通过串联质谱（LC-MS/MS）偶联的液相色谱分析,Max Quant（v.1.4.1.2）搜索分析LC-MS/MS数据得到差异表达蛋白,Uniprotrat数据库搜索,鉴定分析差异表达蛋白的生物学信息;Uni Prot-GOA数据库（Http://www.ebi.ac.uk/GOA/）搜索差异表达蛋白的基因本论（Gene Ontology,GO）注释。4.肠道收缩和舒张功能检测采用Powerlab生理学数据采集分析系统测定离体SD大鼠和OVX大鼠十二指肠、回肠和结肠始段的肠道收缩功能,并分别观察17-β雌二醇和大黄素对肠道收缩功能的影响。5.ELISA及电化学ELISA ELISA检测血浆17β-雌二醇水平;超敏多因子电化学发光分析测定血浆活性形式的胰高血糖素样肽1（Glucagon-like peptide 1,GLP-1）[GLP-1（7-36）酰胺和GLP-1（7-37）]水平。6.Micro-CT扫描小动物活体Micro-CT成像技术测定大鼠腹部脂肪。7.尼氏染色及Golgi染色术后8周处死大鼠,尼氏染色检测神经元数量,Golgi染色检测神经元树突棘密度和蘑菇形树突棘比例。8.免疫印迹和免疫组化分析免疫印迹检测大鼠脑组织ERα、ERβ、GLP-1R、自噬和凋亡相关蛋白、内质网（Endoplasmic reticulum,ER）应激相关蛋白、突触相关蛋白及骨架蛋白、基质相互作用分子2（Stromal Interaction Molecule,STIM2）、经典瞬时受体电位1（Transient receptor potential canonical,TRPC1）、钙调蛋白激酶Ⅱα（Calcium/calmodulin dependent protein kinaseⅡα,Ca MKⅡα）等水平;免疫组化检测大鼠脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞水平,以及ERα、GLP-1R及阿黑皮素原（Proopiomelanocortin,POMC）的水平。结果:1.OVX大鼠出现抑郁行为和认知障碍在旷场实验中:从术后第4周,与SHAM大鼠比较,OVX大鼠上肢上抬次数、移动时间、移动距离和穿越格子明显降低。OVX大鼠糖水消耗百分比明显低于SHAM大鼠。强迫游泳实验:OVX大鼠在5分钟内的不动时间明显长于SHAM大鼠。以上结果表明OVX大鼠出现抑郁行为。Mirros水迷宫实验:在学习阶段,OVX大鼠比SHAM大鼠找到平台的时间明显延长。在记忆测试阶段,大鼠首次穿越平台环形区域的时间OVX组比SHAM组明显延长,OVX组60s内穿越平台环形区域的次数比SHAM组明显减少,以上结果提示OVX大鼠认知障碍。2.OVX大鼠脑内神经元丢失及相应的蛋白组基础设定i TRAQ比值（OVX/SHAM）>1.3并且p<0.05为上调,<0.77并且p<0.05为下调。与SAHM大鼠相比,我们鉴定到的OVX大鼠差异表达蛋白在PFC有20个（5个上调和15个下调）,在HIP有41个（30个上调和11个下调）,在HYP有17个（11个上调和6个下调）和在AMY有79个（43个上调和36个下调）。OVX大鼠前额叶皮层下调的蛋白主要与信号转导和突触可塑性有关,上调的蛋白主要轴突髓鞘有关;OVX大鼠海马下调的蛋白与Ras信号转导、神经元发育、突触可塑性和Ca2+介导的信号转导有关,上调的蛋白主要与氧化应激、内质网相关的泛素依赖性蛋白分解代谢过程、自噬、细胞凋亡和细胞死亡等相关。OVX大鼠下丘脑下调的蛋白主要与Ca2+介导的信号转导、树突棘形态发育、神经发育、突触可塑性、Ras/ERK1/ERK2和MAPK等有关,上调的蛋白主要与长时程突触性抑制、和氧化应激反应有关;OVX大鼠杏仁核下调的蛋白主要与突触传递和神经递质转运,神经发育和信号转导有关,上调的蛋白主要与轴突髓鞘、氧化应激反应、自噬、细胞凋亡和细胞死亡等有关。OVX大鼠四个脑区的差异表达蛋白主要来自于神经元和小胶质细胞。免疫组织化学结果显示,与SHAM大鼠比较,OVX大鼠小胶质细胞（Iba1识别）在HIP和AMY分别明显增加29.49%和23.15%;星形胶质细胞（GFAP识别）在PFC、HYP和AMY分别明显增加12.35%、19.79%和21.82%。在OVX大鼠的PFC、HIP、HYP和AMY四个脑区都出现神经元丢失,这可能是细胞凋亡的结果,腺苷酸激酶2（Adenylate kinase 2,AK2）、Bax、切割的caspase-3和caspase-3以及磷酸化p53的增加,Huntingtin相互作用蛋白K（Huntingtin interacting protein K,HYPK）、己糖激酶（Hexokinase,HK）和磷酸化的Bcl-2降低。在海马和杏仁核中观察到ER应激激活（GRP78、切割的caspase-12、磷酸化的PERK、IRE-1和ATF6增加）和线粒体功能障碍（细胞色素c增加及SFXN1和NDFA11的降低）。某些自噬相关标志物/调节物的变化表明OVX大鼠脑内自噬失调,包括:在PFC和HIP中ATG7水平增加,在PFC和AMY中GABARAPL2水平增加,在HIP中ORP1增加和SCAMP5水平降低,在HIP和AMY中HSPA1A水平降低,在PFC和AMY中的HYPK水平降低,在HIP和AMY中,LC3II/I,ATG5和Beclin1水平明显增加。3.OVX大鼠突触损伤及相应的蛋白组基础检测到OVX大鼠突触损伤,特别是谷氨酸突触功能障碍。与SHAM大鼠比较,OVX大鼠HIP中,SH3结构域的ArfGAP,ANK重复序列和含有PH结构域的蛋白质1（Arf-GAP with SH3 domain,ANK repeat and PH domain-containing protein 1,ASAP1）和Septin-8（SEPT8）上调、脑酸溶蛋白1（Brain acid-soluble protein 1,BASP1）下调。钙依赖性分泌激活因子1（Calcium-dependent secretion activator 1,CAPS1）在OVX大鼠PFC、HIP和AMY下调。在HIP和AMY中,OVX大鼠的突触后密度蛋白95（Postsynaptic density protein95,PSD95,突触后标记）,突触蛋白1（Synapsin1,突触前标记）都显着降低,在AMY中突触结合蛋白（Synaptotagmin,Syt,在神经递质释放中突触前的钙感受器）降低。可能涉及Ca2+相关信号的失调、Ras/Raf1/丝裂原活化蛋白激酶激酶（Mitogen activated protein kinase kinase,MEK）/细胞外信号调节蛋白激酶（Extracellular signalregulated protein kinase,ERK）（Ras/Raf1/MEK/ERK）和磷酸肌醇-3-激酶（Phosphoinositide-3-kinase）/AKT（PI3K/AKT）信号通路。4.OVX大鼠骨架蛋白损伤及相应的蛋白组基础在OVX大鼠的脑内观察到细胞骨架异常,微管相关蛋白（Microtubule-associated protein,MAP）在HIP下调,在HYP和AMY上调;微管蛋白α-1A链（Tubulinα-1A chain,Tuba1a）在HIP上调,在HYP和AMY下调;生长因子受体结合蛋白2（Growth factor receptor-bound protein 2,Grb2）是在OVX大鼠的HIP下调;HSPA1A在OVX大鼠的HYP和AMY中明显降低;伴随着糖原合酶激酶3β（Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）活化的tau高度磷酸化。5.OVX大鼠杏仁核特异的差异蛋白AMY在调节情绪行为中发挥重要作用。在OVX大鼠的AMY中,GABA1-B2明显减少而GAT明显增加;囊泡膜谷氨酸转运体1（Vesicular glutamate transporter 1,Vglu T1）和p-NR2B（Y1472）明显降低;Fyn（这是一种重要的激酶,可提高含N2B的NMDARs的活性）下调;SHANK3（SH3,and multiple ankyrin repeat domains 3,一种富含兴奋性突触密度的突触后支架蛋白）下调,表明OVX大鼠AMY中兴奋和抑制之间失衡。在AMY中Calretinin增加和Calbindin减少,提示OVX后GABA能传递的调节。6.大黄素改善青年OVX大鼠抑郁行为和认知障碍术后第7周,大鼠糖水消耗百分比,OVX组为60.62%明显低于SHAM组（77.25%）;Emodin组（75.28%）和Estradiol组（72.46%）明显高于OVX组。旷场实验:移动总距离OVX组为2087.30cm,明显低于SHAM组（3027.60cm）;Emodin组（2637.00cm）和Estradiol组（2912.50cm）明显高于OVX组。5min内穿越的格子数,OVX组为56.94明显低于SHAM组（82.19）;Emodin组（76.44）和Estradiol组（91.75）明显高于OVX组。强迫游泳实验:大鼠在水中5min不动时间,OVX组为158.25s较SHAM组（86.49s）明显延长;Emodin组（55.28s）和Estradiol组（69.44s）比OVX组明显缩短。以上结果表明,大黄素或雌激素均可改善OVX大鼠的抑郁行为。Morris水迷宫检测:在学习阶段,大鼠第一次找到平台的时间,OVX组比SHAM组明显延长;Emodin组和Estradiol组比OVX组明显缩短;在记忆检测阶段,大鼠首次穿越原平台环形区的时间,OVX组比SHAM组明显延长,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显缩短。60s内穿越原平台的环形区的次数,OVX组比SHAM组明显减少,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显增多。以上结果提示:大黄素或雌激素明显改善OVX大鼠认知障碍。大黄素增加OVX大鼠脑区神经元数量、神经元树突棘数量及相关蛋白水平。尼氏染色结果显示:大鼠海马CA1区、CA3区、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层神经元数量,OVX组比SHAM组分别明显减少10.23%、12.03%、9.49%、5.53%和8.70%;与OVX组相比,Emodin组分别明显增加14.13%、26.17%、9.53%、10.64%和10.26%;Estradiol组分别增加17.12%、17.58%、12.84%、10.94%和9.42%。以上结果表明,大黄素或雌激素都可以改善OVX大鼠海马、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层神经元数量的减少。Golgi染色结果显示:大鼠前额叶皮层、海马、下丘脑和杏仁核神经元树突棘的密度OVX组比SHAM组分别明显减少25.76%、53.06%、45.10%和31.75%。与OVX组比较,Emodin组分别增加40.82%、91.31%、75.00%和55.81%;Estradiol组分别明显增加53.06%、108.70%、89.28%和6.51%。大鼠前额叶皮层、海马、下丘脑和杏仁核神经元蘑菇形树突棘所占比例,OVX组比SHAM组分别明显降低37%、56%、42%和43%;与OVX组比较,Emodin组分别增加61%、104%、80%和78%,Estradiol组分别增加65%、106%、63%和68%。以上结果表明:大黄素或雌激素明显增加OVX大鼠树突棘的密度和蘑菇形树突棘的数量。为了进一步研究大黄素或雌激素改善OVX大鼠抑郁行为和认知能力以及树突棘丢失的机制,通过免疫印迹实验发现大黄素或雌激素可以明显上调OVX大鼠海马突触相关蛋白Synapsin1、PSD95、p-NR2B和p-Glu R1水平,同时上调Ca2+介导的信号通路相关蛋白STIM2、p-Ca MKⅡα和TRPC1水平。另外也观察到OVX大鼠ERK通路的抑制被大黄素或雌激素改善。7.大黄素改善OVX大鼠体重大黄素降低OVX大鼠的摄食量和体重。术后第2周大鼠摄食量和术后2周累积摄食总量OVX组、Emodin组和Estradiol组都比SHAM组明显增加。术后第3周开始给药治疗一直持续6周,术后第8周大鼠摄食量和8周累积摄食总量OVX组分别比SHAM组明显增加,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显降低。术后第14天,大鼠体重OVX组、Emodin组和Estradiol组比SHAM组明显增加;术后第56天大鼠体重Emodin组和Estradiol组比OVX组明显降低。术后第8周,大鼠腹围OVX组比SHAM组明显升高,Emodin组和Estradiol组较OVX组明显降低。Micro-CT结果显示:腹部脂肪体积与目标区域总体积（Object volume/total volume）之比,SHAM组、OVX组、Emodin组和Estraddiol组分别为15.77%、30.50%、14.97%、16.19%;OVX组比SHAM组明显增加;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组明显降低。以上结果提示,OVX大鼠腹部脂肪比SHAM组明显增加,大黄素或雌激素明显减少OVX大鼠腹部脂肪。免疫组织化学结果显示:大鼠下丘脑POMC（由ACTH识别）水平,OVX组比SHAM组明显降低49%;与OVX组相比,Emodin组和Estradiol组分别明显增加82%和79%。以上结果表明:OVX大鼠POMC水平降低,下丘脑抑制食欲的活性降低,促进大鼠摄食,雌激素和大黄素均可增加POMC水平,抑制食欲。8.大黄素对OVX大鼠雌激素、GLP-1及受体的影响术后第8周大鼠PFC、HIP、HYP和AMY四个脑区ERα表达情况,免疫组织化学结果显示:海马CA1,CA3,DG区、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层ERα水平,OVX组和Emodin组比SHAM组和Estradiol组均明显下调。大鼠血浆17β-雌二醇浓度,OVX组和Emodin组均比SHAM组和Estradiol组显着降低。以上结果表明OVX大鼠大鼠血浆雌激素水平和4个脑区的ERα水平均明显降低,给予雌激素治疗后明显改善,但大黄素治疗后没有改善。超敏多因子电化学发光分析检测大鼠血浆活性GLP-1[GLP-1（7-36）酰胺和GLP-1（7-37）]水平,结果显示:血浆活性GLP-1浓度,OVX组比SHAM组明显降低;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组明显增高,表明大黄素或雌激素可以逆转OVX大鼠血浆活性GLP-1水平。免疫印迹实验观察到OVX组大鼠海马GLP-1R水平比SHAM组分别明显减少,Emodin组和Estradiol组较OVX组明显增加;免疫组织化学实验观察到:OVX组海马CA3区GLP-1R水平比SHAM组降低23%;与OVX组相比,Emodin组和Estradiol组海马CA3区GLP-1R水平分别明显增加43%和48%。免疫印迹和免疫组织化学实验观察到,在下丘脑、杏仁核和前额叶皮层中,GLP-1R水平OVX组比SHAM组明显降低;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组分别明显增加。以上结果表明:OVX大鼠前额叶皮层、海马CA3、下丘脑和杏仁核GLP-1R下调,大黄素或雌激素可以逆转GLP-1R的下调。9.大黄素对OVX大鼠肠道功能的影响离体灌流测定肠道收缩和舒张功能,在Kreb’s灌流液中分别给予5μM和10μM 17β-雌二醇,给药前后肠道收缩幅度比较,可观察到雌激素降低NC组大鼠肠道收缩幅度,并呈现剂量依赖性,同时从肠近端到远端,抑制收缩的程度逐渐增强,同时OVX大鼠肠道对雌激素抑制作用的敏感性明显降低。在Kreb’s灌流液中分别给予1μM、5μM、10μM、20μM和50μM大黄素,可观察到大黄素降低NC组大鼠肠道收缩幅度,并呈现剂量依赖性,同时抑制收缩幅度从肠近端到远端逐渐增强。与NC组大鼠比较,大黄素对OVX大鼠回肠和结肠抑制作用明显增强。免疫印迹结果显示:与SHAM组比较,OVX组大鼠回肠和结肠始端ERβ水平明显降低41.97%和51.71%;TRPC1水平明显降低54.38%和74.72%。结论:在本研究中,我们通过OVX复制了雌激素缺乏的手术绝经大鼠模型,术后7周OVX大鼠出现抑郁和痴呆行为。在OVX大鼠的HIP和AMY中小胶质细胞数量及在PFC、HYP和AMY中星形胶质细胞数量都明显增多,PFC、HIP、HYP和AMY均出现神经元丢失。通过质谱和蛋白质印迹分析,支持内质网应激和线粒体功能障碍触发细胞凋亡涉及OVX诱导的神经元丢失。OVX大鼠也出现突触损伤、细胞骨架异常和髓鞘损伤以及少突胶质细胞功能障碍。在AMY中兴奋性和抑制性神经递质失调可能是导致OVX诱导的抑郁行为的原因。总之,我们的研究提出了OVX后不同脑区抑郁和痴呆相关的变异性,这有助于了解绝经期相关脑损伤的病理生理机制,并寻找潜在的早期干预靶点。大黄素明显改善OVX大鼠抑郁行为、认知障碍和体重。大黄素上调OVX大鼠血浆GLP-1水平,上调OVX大鼠4个脑区GLP-1R水平,经GLP-1-GLP-1R途径上调OVX大鼠海马STIM2-TRPC1-Ca MKIIα通路,改善OVX海马神经元和树突棘数量的减少以及突触损伤。大黄素治疗明显增加OVX大鼠下丘脑POMC水平,抑制摄食,减少腹部脂肪,改善OVX大鼠体重增加。大黄素抑制OVX大鼠肠道收缩,可能促进肠道分泌GLP-1增多。

张钟元^[2]（2017）在《有氧运动对慢性脑缺血小鼠的PI3K/AKT信号通路的影响》文中指出研究目的:本课题拟以KM种小鼠为研究对象,研究有氧运动对结扎右劲动脉的慢性脑缺血致脑损伤小鼠的PI3K/AKT/GSK3β信号通路中相关细胞因子的表达及影响。研究方法:参考Yoshizaki建立的小鼠慢性脑缺血模型,并加以改良,选择KM小鼠为实验动物,构建小鼠慢性脑缺血模型。建模成功后,将小鼠随机分为空白组（CG）、假手术组（SO）、模型组（M）、游泳组（SW）、跑台组（TM）,每组10只。各干预组于建模成功后第三天进行有氧运动干预。神经行为学评估对小鼠建模后以及运动干预后的感觉运动行为进行观察并记录。实验结束后,小鼠禁食过夜,分离脑组织并取材。形态学观察小鼠尼氏小体分布情况;免疫组化检测PI3K/AKT/GSK3β信号通路中PI3K、Akt、GSK3β、MCL-1的蛋白表达。观察有氧运动对慢性脑缺血小鼠的PI3K/AKT/GSK3β信号通路的影响,探讨其对小鼠慢性缺血性致脑损伤的神经保护作用。研究结果:（1）神经行为学评估::建模后小鼠各项神经行为无明显差异;运动干预后,运动组得分明显低于模型组（P<0.05）,空白组和假手术组得分最低,且两者之间得分无明显差异（P>0.05）,（2）尼氏染色显示结果:假手术组小鼠尼氏体排列紧密,大而数量较多,有明显的异型性,神经元受损程度小,反映出神经细胞合成蛋白质的功能和传导信息能力较强;模型组排列疏、欠规整,且数量较少,其损伤的神经元较多;相比模型组,游泳组中尼氏体数量较多,排列紧密（P<0.05）,但与空白组相比有明显差异性（P<0.05）;跑台组中尼氏体数量高于模型对照组（P<0.05）,仅次于假手术组,神经元较多,且排列有规则较集中。（3）免疫组织化学染色结果显示:有氧运动组中PI3K、AKT、MCL-1相比模型组阳性表达明显增多（P<0.01）,且跑台组最高;与空白组比较,蛋白表达偏少（P<0.05）;游泳组和跑台组中GSK3β的表达最低,与模型组具有显着性差异（P<0.05）,相比游泳组,跑台组表达更少且具有统计学意义（P<0.05）;结论:有氧训练能减轻慢性脑缺血小鼠脑损伤,加强对脑组织的保护作用,使脑缺血小鼠的耐缺血能力提升。且跑台组效果更佳,其机制可能是有氧运动促进了PI3K/AKT/GSK3β信号通路中血管、神经再生和修复的相关因子,减少脑缺血造成神经元的死亡,发挥脑保护作用。

辛佳蔚^[3]（2014）在《当归对血管性认知损害的保护作用及其与成体神经发生的关系》文中研究表明目的：成体神经发生,尤其是海马齿状回的神经发生与学习记忆功能密切相关,而当归（Radix Angelica Sinensis, RAS）作为一种常用的具有血管神经保护作用的中药,其认知保护作用的机制可能与其对成体神经发生的作用有关。我们拟采用大鼠双侧颈总动脉永久结L（bilateral common carotid artery occlusion, two vessel occlusion,2VO）这一目前较为公认的慢性脑低灌注导致血管性认知功能损害的动物模型,通过当归的干预以及对大鼠海马区成体神经发生的抑制,研究海马区成体神经发生在当归的认知改善疗效中的作用,并探讨可能的分子机制。方法：将实验大鼠随机分为五组：假手术加无菌蒸馏水灌胃组（sham组）,2VO加无菌蒸馏水灌胃组（2VO组）,2VO同时接受头颅X线照射（cranial irradiation, IRR）加无菌蒸馏水灌胃组（2VO+IRR组）,2VO加当归灌胃组（2VO+RAS组）,2VO同时接受头颅X线照射加当归灌胃组（2VO+IRR+RAS组）,通过Morris水迷宫评价大鼠海马依赖的空间学习和记忆能力。并采用5-溴-2’-脱氧尿苷（5-bromo-2’-deoxyuridine, BrdU）免疫组织化学检测大鼠海马区新生神经细胞的增殖情况,BrdU和神经元特异性核蛋白（neuron specific nuclear protein, NeuN）免疫荧光双标检测大鼠海马区新生神经元的存活和成熟情况。同样使用免疫组织化学方法检测海马齿状回颗粒下区（subgranular zone,SGZ）谷氨酸脱羧酶65（glutamate decarboxylase, GAD65）和Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体（vesicle glutamate transporter of type1, VGLUT1）的表达。利用Western blot免疫印迹法检测海马区脑源性神经营养因子（brain derived neurophic factor, BDNF）,磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cAMP response element binding protein, p-CREB）,突触素（synaptophysin, SYN）和突触后密度蛋白-95（postsynaptic density protein95, PSD-95）的表达。结果：当归干预可以改善慢性脑低灌注大鼠的认知功能损害,促进慢性脑低灌注大鼠海马区的神经发生；局部低剂量X线照射可以对大鼠海马区的神经发生造成精确而长期的破坏,而一旦神经发生缺失,当归就失去了对慢性脑低灌注大鼠认知功能的改善作用；当归干预改善了大鼠慢性脑低灌注损伤所导致的海马区BDNF, p-CREB和GAD65的表达降低。结论：当归对慢性脑低灌注导致的血管性认知功能损害有保护作用,这种认知保护作用可能和其促进神经发生的作用密切相关,而当归增强慢性脑低灌注大鼠海马区的神经发生的作用可能与其提高BDNF, p-CREB以及GAD65所代表的γ-氨基丁酸（gamma-amino butyric acid, GABA）能神经元的水平有关。当归可能是一种治疗慢性脑低灌注导致的血管性认知功能损害的潜在药物,值得进一步深入地研究。

沈钦华^[4]（2010）在《微量醋酸亮丙瑞林对雌性大鼠性腺轴调节作用的研究》文中进行了进一步梳理醋酸亮丙瑞林（leuprorelin acetate, LE）是一种强效的促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）,其分子式为C59H84N16012,与促性腺激素释放激素（GnRH）受体有高度的亲和力。在临床上,重复给予大剂量的醋酸亮丙瑞林,首次给药后能立即产生一过性的垂体-性腺系统兴奋作用（急性作用）,然后抑制垂体生成和释放促性腺激素,它还能进一步抑制卵巢和睾丸对促性腺激素的反应,从而降低雌二醇和睾丸酮的生成（慢性作用）,主要用于治疗内分泌、妇、儿科及某些肿瘤等疾病,例如前列腺癌、前列腺增生、子宫内膜异位、子宫肌瘤、特发性真性性早熟等。由于内分泌系统在维持机体内环境稳定、生长、发育及衰老中具有重要意义,且性腺轴在衰老过程中的变化尤为突出,下丘脑作为性腺轴的高级神经中枢,对影响性腺轴的衰老具有重要意义。GnRH作为下丘脑神经元脉冲式分泌的能调控整个性腺轴的重要激素,其主要生理作用是刺激垂体分泌卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）,此外其还能直接作用于卵巢,影响雌激素（E2）的分泌。在衰老的过程中其分泌发生一定的紊乱,从而能影响整个性腺轴。醋酸亮丙瑞林作为GnRH的激动剂,对下丘脑-垂体-性腺轴产生一定调控作用,临床上大剂量对其有抑制效应,然而小剂量的醋酸亮丙瑞林对性腺轴的作用如何呢?联系到GnRH对机体性腺轴衰老的影响,且有报道提出GnRH有对抗衰老的可行性,本实验拟探讨长期给机体注射微量醋酸亮丙瑞林,探讨其改善增龄带来的大鼠性腺轴功能的衰退作用。本实验以SD雌性大鼠为研究对象,随机分为青年对照组、老龄空白组、醋酸亮丙瑞林三种剂量组（老龄低剂量组、老龄中剂量组、老龄高剂量组）,采用HE染色、放免法及免疫组化技术,分别对性腺轴及雌激素受体（ER）进行实验研究,探讨小剂量醋酸亮丙瑞林对性腺轴相关激素的影响,主要结论如下：1醋酸亮丙瑞林对性腺轴GnRH、E2、FSH、LH四种激素外周血中水平的影响通过放免法测定：醋酸亮丙瑞林高剂量组大鼠血中GnRH的水平显着低于老龄空白组,且有统计学意义（P<0.05）,低剂量和中剂量组低于老龄空白组,但无统计学意义,空白对照组与青年对照组水平无显着性差异。可能是醋酸亮丙瑞林竞争性抑制大鼠下丘脑GnRH的分泌。醋酸亮丙瑞林各剂量组大鼠外周血中E2的水平显着高于老龄空白组,且高于青年对照组,并有统计学意义（P<0.05）,各剂量组之间稍有差异,但无统计学意义。可推测醋酸亮丙瑞林能直接作用于卵巢,影响E2的分泌。各组大鼠外周血中FSH、LH的水平均无显着性差异,可能是微量的醋酸亮丙瑞林对垂体促性腺激素无显着调控作用。2醋酸亮丙瑞林对卵巢形态的影响对各组大鼠卵巢的湿重进行测量,并计算卵巢系数,经统计,醋酸亮丙瑞林各剂量组及青年对照组大鼠的卵巢系数高于老龄空白组,且有统计学差异（P<0.05）,各剂量组大鼠卵巢系数低于青年对照组,但无统计学意义。可能是醋酸亮丙瑞林作为性腺轴上位激素激动剂,能作用于性腺轴靶器官卵巢,增强老龄大鼠的卵巢功能,从而增加卵巢的重量。通过HE染色,在显微镜下观察：青年对照组大鼠的卵巢中各级卵泡数较多,从初级卵泡到成熟卵泡均有较多分布,而闭锁卵泡较少；老龄空白组大鼠的卵巢中各级发育的卵泡数明显较少,且闭锁卵泡较多,而各用药组大鼠的卵巢中各级卵泡数较老龄空白组有所增加；经对各级卵泡数计数后统计,结果显示青年对照组大鼠卵泡数显着高于老龄空白组（P<0.01）,各用药组大鼠卵泡数也明显高于老龄空白组,且具有统计学意义（P<0.05）,而各用药组间无显着差异。可能是因为青年对照组大鼠鼠龄小于其他各组,发育中的卵泡较多。而各用药组可能是因为醋酸亮丙瑞林提高E2水平,从而促进了卵泡的发育,并减少了卵泡的闭锁。3醋酸亮丙瑞林对不同组织ER表达的影响运用免疫组化技术,考察各组大鼠大脑皮质、海马CA1区、下丘脑及卵巢中ERα和ERβ的表达情况。醋酸亮丙瑞林各剂量组大鼠的大脑皮质、海马CA1区、下丘脑的ERα的表达均较青年对照组和老龄空白组高（P<0.01）,各剂量组大鼠的卵巢中ERα的表达较青年对照组和老龄空白组高（P<0.05）,青年对照组大鼠的大脑皮质ERα的表达较老龄空白组高（P<0.05）；醋酸亮丙瑞林各剂量组大鼠大脑皮质、海马CA1、下丘脑中ERβ的表达均较老龄空白组高（皮质、海马CA1区P<0.01,下丘脑P<0.05）,青年对照组大鼠ERβ在皮质、海马CA1区的表达较老龄空白组高（分别为P<0.05、P<0.01）,而青年对照组跟各剂量组大鼠卵巢中ERβ的表达均较老龄空白组高（P<0.01）。可以得出实验各剂量的醋酸亮丙瑞林均能上调ER的表达,可能由于其能提高E2水平,从而引起ER的表达增加。综上所述,对老龄雌性大鼠采用低于常用剂量的醋酸亮丙瑞林,能改善大鼠卵巢的功能,提高E2水平,且能上调各部位ER的表达,显示出其对雌性大鼠性腺轴的促进作用,可能是由于醋酸亮丙瑞林作为GnRH激动剂,作用于GnRH受体,而GnRH受体在性腺轴的靶器官-卵巢有分布,因此能作用于卵巢,引起E2水平的提高,进而上调ER。这对于开发醋酸亮丙瑞林对抗疾病或衰老引起的雌激素下降提供了实验依据,而其在雄性动物上的实验研究还有待继续。

李辉^[5]（2008）在《不忘散对去卵巢大鼠脑认知功能影响的实验研究》文中研究指明背景老龄化是包括我国在内的许多国家的严重的社会与卫生问题。我国是一个人口大国,人口老年化的速度会更快,现在我国60岁以上人口已经超过10%,因而患痴呆的人数将有显着增加,特别是在较高龄人口中该病的患病率会成倍增长。Alzheimer病（Alzheimer’s disease,AD）是一种与年龄相关的神经退行性疾病,约占痴呆症的60%,临床上以与学习记忆相关脑区β—淀粉样蛋白沉淀形成的老年斑（senile plaque,SP）和tau蛋白异常磷酸化形成的神经元纤维缠结（neurofillary tangles,NFT）为其病理学特征,并伴随有大量神经元的丢失,表现为认知功能的进行性减退,或伴有人格和情感控制等方面的异常以及日常生活能力的下降。AD目前已经成为严重危害老年人健康的主要疾病,其死亡率仅次于心血管疾病、癌症和脑卒中。流行病学调查显示老年女性AD的患病率显着高于男性,为男性患者的1.5-3倍,提示雌激素的缺乏与AD的发生和发展有关联,女性绝经后内源性雌激素水平下降,增加了AD的发病风险。因此,绝经后老年性痴呆已成为AD中最主要的类型。雌激素替代治疗（Estrogen replacementtherapy,ERT）可以改善认知功能。这为AD的预防和治疗提供了新的线索和研究方向。目前研究较多的有:增强胆碱能系统功能、易化突触可塑性和突触传递、抗神经细胞凋亡作用、炎症等。然而,ERT可能会给受治者带来无法预料的激素类副作用,这是目前制约ERT在临床上应用的一个主要原因。因此,具有雌激素样作用的中药单药或者复方的研究受到了越来越多的关注。目的本实验研究使用去卵巢大鼠建立低雌激素记忆障碍模型,探讨不忘散改善绝经后妇女认知功能的机制,为临床相关疾病的治疗提供科学依据。方法1.研究对象:去卵巢大鼠随机分成4组。实验动物共5组:（1）假手术组（SHAM）:16只;（2）去卵巢组（OVX）:16只;（3）17β—雌二醇组（E2）:OVX+E2,16只;（4）中药不忘散高剂量组（BH）:OVX+不忘散高剂量,16只;（5）中药不忘散低剂量组（BL）:OVX+不忘散低剂量,16只。E2组给予17β—雌二醇100μg/（kg·d）,BH组给予不忘散1.2g/（kg·d）,BL组给予不忘散0.6g/（kg·d）,SHAM组和OVX组分别给予等量蒸馏水。每组大鼠均灌胃给药,连续给药12周后开始后续实验。2.研究内容:（1）Morris水迷宫检测学习记忆能力;（2）血清雌二醇的测定;（3）观察海马亚区细胞形态学和超微结构的变化;（4）免疫组化染色检测海马ChAT、突触素P38、Bcl—2、Bax阳性细胞的表达;（5）实时定量RT—PCR法检测海马ChAT、突触素P38、Bcl-2、Bax、GFAP、Arom mRNA表达;（6）免疫印记（Western blot）检测海马GFAP、Arom蛋白表达。结果1.各组大鼠Morris水迷宫测试结果:OVX组潜伏期和距离较SHAM组明显延长（P＜0.01）,E2组和中药高剂量组可以显着缩短潜伏期和游泳距离,和SHAM组水平相当,低剂量组较高剂量差。同组大鼠,随着训练时段的增加,去卵巢组没有明显改变（P＞0.05）,BH组的潜伏期和游泳距离越来越短（P＜0.01）。游泳速度可见,各组大鼠没有明显差异。可以排除因个体差异引起的不同。记忆保留实验显示,原站台所在象限的平均停留时间和穿越站台次数OVX组明显低于SHAM组（P＜0.01）,而E2组和中药治疗组可以改善去卵巢造成的降低,和SHAM组没有明显差异（P＞0.05）,中药高剂量组比OVX组在原站台所在象限的平均停留时间和穿越站台次数增高,有明显差异（P＜0.05）。2.血清雌二醇的浓度比较:OVX组与SHAM组和E2组比较,大鼠血清雌激素的含量明显降低（P＜0.01）。BH组和BL组大鼠血清中雌激素水平显着提高（P＜0.01）。BH组和BL组与SHAM组比较,血清中雌激素的含量差异无显着性（P＞0.05）。3.组织切片光镜下HE染色观察:各组大鼠海马锥体细胞数量众多,细胞排列紧密整齐,细胞轮廓清晰,细胞与周围组织分界清晰,胞核为蓝色,胞浆淡红色,各组神经细胞在细胞形态、大小和排列上未见明显差别。4.透射电镜观察海马CA1区锥体细胞超微结构:OVX组海马CA1区锥体细胞,细胞呈较高电子密度、不规则,核形及染色质异常,线粒体结构模糊,内质网肿胀,细胞膜上突触连接结构少。这些现象可以初步判断锥体细胞出现凋亡。SHAM组锥体细胞细胞核椭圆形,核仁居中,染色质正常,多数线粒体结构正常,内质网短、少、没有扩张,细胞膜上分布有连接结构。BH组、BL组、E2组染色质正常,多数线粒体结构正常,细胞膜上分布有连接结构。5.突触密度检测:大脑皮质内神经元的轴突、树突和胶质细胞的突起相互交织连接所形成的复杂网络结构成为神经毡。结果OVX组神经毡内的突触数密度较SHAM组和E2组明显降低（P＜0.01）。BH组突触数密度较OVX组明显增加（P＜0.01）,和SHAM组无显着性差异（P＞0.05）;BL组较OVX组突触密度也有增加,但无统计学意义6.免疫组化染色检测各组大鼠海马ChAT、突触素P38、Bcl—2、Bax阳性细胞的表达。（1）图像分析结果显示,SHAM组、E2组、BH组海马CA1区胆碱能神经元的光密度值均高于OVX组,且有统计学意义（P＜0.01或0.05）;BL组海马CA1区胆碱能神经元的光密度值高于OVX组,但无统计学意义（P＞0.05）。BH组、BL组与SHAM组比较没有显着性差异（P＞0.05）。（2）图像分析结果显示,SHAM组、E2组、BH组海马CA1区突触素P38的光密度值均较OVX组有显着性增高（P＜0.01或0.05）,BL组突触素P38的光密度值也有增高,但没有统计学意义。SHAM组P38光密度值与E2组、BH组、BL组比较没有显着性差异（P＞0.05）。（3）图像分析结果显示,OVX组Bcl—2阳性细胞光密度值较SHAM组明显降低（P＜0.01）,而E2组、BH组、BL组阻止了Bcl—2阳性细胞光密度值的降低,与OVX组比较有显着性提高（P＜0.01或0.05）,与SHAM组比较没有显着性差异（P＞0.05）。（4）图像分析显示,OVX组Bax阳性细胞表达率显着增高,其光密度值与SHAM组Bax阳性细胞表达的光密度值比较有显着性差异（P＜0.01）,而E2组、BH组、BL组较OVX组Bax阳性细胞表达减少,且有显着性差异（P＜0.01或0.05）,而E2组、BH组、BL组与SHAM组比较没有统计学意义（P＞0.05）。7.TUNEL染色检测凋亡率的比较:从凋亡细胞百分率可见,OVX组凋亡神经元百分率较SHAM组明显增加（P＜0.01）,E2组、BH组、BL组凋亡神经元百分率明显降低,与OVX组比较有显着性意义（P＜0.01）:E2组、BH组、BL组凋亡神经元百分率较SHAM组高,但无统计学意义（P＞0.05）。8.实时定量RT-PCR检测大鼠海马ChAT、突触素P38、Bcl-2、Bax、Arom、GFAP mRNA的表达水平。（1）ChAT mRNA表达比较:与OVX组比较,E2组、BH组ChAT mRNA表达明显增高（P＜0.01）,BL组ChAT mRNA表达也有所增高,但无统计学意义（P＞0.05）。E2组和BH组与SHAM组比较没有显着性差异（P＞0.05）。（2）突触素P38 mRNA表达比较:与OVX组比较,E2组、BH组P38 mRNA的表达明显增加（P＜0.01或0.05）,BL组P38 mRNA的表达也有增加,但没有统计学意义（P＞0.05）,SHAM组与E2组、BH组、BL组比较,P38 mRNA的表达无显着性差异（P＞0.05）。（3）Bcl-2 mRNA表达比较:与SHAM组比较,OVX组Bcl-2 mRNA的表达明显降低（P＜0.01）,E2组Bcl-2 mRNA的表达较OVX组显着升高（P＜0.05）,BH组与E2组比较没有显着性差异（P＞0.05）,BL组Bcl-2 mRNA的表达较OVX组升高,但无统计学意义（P＞0.05）。（4）Bax mRNA表达比较:与SHAM组比较,OVX组Bax mRNA的表达明显升高（P＜0.01）,E2组Bax mRNA的表达较OVX组显着降低（P＜0.05）,BH组、BL组与E2组比较没有显着性差异（P＞0.05）。（5）Arom mRNA表达比较:OVX组Arom mRNA的表达较SHAM组明显升高（P＜0.01）,而BH组Arom mRNA的表达较OVX组明显降低（P＜0.01）,BH组、E2组、BL组与SHAM组比较没有显着性差异（P＞0.05）。（6）GFAP mRNA表达比较:OVX组GFAP mRNA的表达较SHAM组增高,且有显着性意义（P＜0.01）,E2组、BH组、BL组GFAP mRNA的表达与OVX组比较明显降低（P＜0.01）。E2组、BH组、BL组GFAP mRNA的表达较SHAM组没有显着性差异（P＞0.05）。9.Western blot检测大鼠海马Arom、GFAP蛋白表达水平。（1）Arom蛋白表达比较:OVX组Arom蛋白表达与SHAM组比较显着提高（P＜0.01）。与OVX组比较,BH组、E2组、BL组Arom蛋白表达明显降低（P＜0.01）,其中BH组降低幅度最大;BH组、E2组、BL组Arom蛋白表达与SHAM组比较,没有显着性差异（P＞0.05）。（2）GFAP蛋白表达比较:OVX组GFAP蛋白的表达较SHAM组增高,且有显着性意义（P＜0.01）,E2组、BH组、BL组GFAP蛋白的表达较OVX组明显降低（P＜0.01）,与SHAM组比较没有显着性差异（P＞0.05）。结论1.不忘散对OVX大鼠显着的益智作用,其益智机制可能与不忘散升高OVX大鼠血清雌二醇水平,保护海马CA1区锥体细胞线粒体功能有关。2.雌激素缺乏导致了大鼠海马结构胆碱能神经元内ChAT表达的下降,胆碱能神经元内ChAT数量的下降可能是导致去卵巢大鼠记忆力下降的原因之一。不忘散有助于胆碱能神经元的生长和存活。3.不忘散可以增加OVX大鼠海马结构内的突触密度,突触素P38的表达明显增加,两者的结果一致,共同反映了突触可塑性的提高,这可能是不忘散益智的另一原因。4.OVX大鼠海马结构内凋亡抑制因子Bcl—2表达降低,凋亡促进因子Bax表达升高,趋于凋亡的细胞增加,可能是去卵巢大鼠行为学异常的原因之一。不忘散可以逆转两者的表达,使细胞趋于存活。5.不忘散改善学习记忆障碍可能与维持星形胶质细胞的稳定,减少芳香化酶的表达,降低炎性反应有关。

张燕平^[6]（2007）在《苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠的保护作用研究》文中提出背景和目的慢性脑缺血是神经系统的一种常见病理状态，伴发于脑动脉硬化、血管性痴呆（Vascular dementia VD）、Binswanger病及Alzheimer’s病（AD）等多种疾病的病理过程中，发病早期以认知功能损害为主要表现，最终可导致持久或进展性的认知与神经功能障碍。大量研究证实，慢性脑缺血引起的神经元缺失、白质损害可导致认知功能障碍。海马是参与学习和记忆的重要结构，因此海马神经元缺失可引起学习和记忆能力受损。中枢胆碱能系统与学习记忆密切相关，研究表明作为该系统的标志酶—胆碱乙酰转移酶（Cholineacetyltransferase，CHAT）活性降低是导致学习记忆障碍的重要原因。学习记忆的神经解剖基础是突触结构的可塑性，而一氧化氮（NO）和突触素（synaptophysin，SYN）与神经突触的可塑性密切相关。流行病学资料表明，绝经前的女性比同年龄男性的卒中发生率低，且卒中的严重程度远低于同年龄男性和绝经后女性，但绝经后女性其卒中的发生率迅速增高。在对女性绝经后雌激素替代治疗的研究中发现，替代治疗可以使发生卒中的相对危险度下降，与卒中有关的死亡率亦下降。由此，人们推测雌激素具有脑保护作用。近几年来，科研工作者发现雌激素不仅降低脑损害的严重程度而且改善认知功能。但是在已有慢性脑灌注不足的情况下，雌激素有无保护作用，如何表现，目前研究较少。本试验旨在通过永久性结扎双侧颈总动脉即（2VO法）建立大鼠慢性脑缺血模型，经腹腔内注射雌激素，用MG-2Y型迷宫比较大鼠学习记忆能力，并通过免疫组化方法观察海马CA1区突触素、胆碱乙酰转移酶和神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达的变化，初步探讨雌激素对慢性脑缺血认知功能影响的机制，为临床上预防及治疗与慢性脑缺血有关的疾病提供实验支持和理论依据。材料与方法1．实验动物分组：健康成年雌性SD大鼠30只，体重300—350g（河南实验动物中心提供）。随机分为三组：假手术组；单纯缺血组；缺血治疗组。每组10只。缺血治疗组大鼠卵巢切除术后当天开始腹腔注射苯甲酸雌二醇1mg／kg，（0.3ml）；假手术组和单纯缺血组大鼠术后给予煮沸冷却后的麻油（溶解雌二醇的溶剂）腹腔注射，每只0.3ml，以上三组均为每周腹腔注射2次（周一和周四），共60天；2．模型的制作：钝性分离单纯缺血组和缺血治疗组大鼠双侧颈总动脉，用0号手术线分别结扎其近心端及远心端，并从中间剪断；分离假手术组双侧颈总动脉但不结扎，也不剪断。间隔1周后，单纯缺血组和缺血治疗组行双侧卵巢切除术，假手术组大鼠行类似分离操作，但不切除卵巢，术后各组大鼠均在常规条件下饲养；3．标本的制作：手术后60天，通过Y—迷宫试验进行学习记忆能力测试，然后经心脏灌注，用4％的多聚甲醛固定后做石蜡切片，供HE染色及免疫组化用；4．观察指标：（1）认知能力：测试方法采用MG-Y型迷宫箱，训练大鼠按信号灯跑向安全通道。每次测试均在上午8:00-11:00进行。（2）HE染色：光镜下观察海马组织的病理变化。（3）用免疫组化法观察突触素、CHAT和nNOS的表达，并利用病理图像分析系统对SYN、CHAT免疫组化的阳性细胞数进行测定。5．统计方法：采用SPSS10.0统计软件进行数据处理，所有数据均采用均数±标准差（（?）±s）表示，多组均数间比较采用单因素方差分析。以α=0.05作为显着性检验水准。结果（1）一般情况：模型大鼠双侧颈总动脉完全阻断后，首先出现短暂惊厥，翻正反射消失，伴体温降低，呼吸减慢。术后5—7天各组爬行基本恢复，无明显运动障碍；（2）认知能力：各组大鼠错误反应次数如下：假手术组：34.50±7.29；单纯缺血组：81.67±11.02；缺血治疗组：60.83±15.90；单纯缺血组、缺血治疗组与假手术组相比，认知能力下降，错误次数明显增多（P＜0.01）；缺血治疗组与单纯缺血组相比也有明显差别，缺血治疗组较单纯缺血组的错误次数明显减少（P＜0.01）；（3）HE染色：假手术组偶有神经元细胞变性、死亡，大部分细胞形态未发现明显的病理变化，单纯缺血组见海马神经元的病理损害加重，CA1区锥体细胞层次减少，排列稀疏、紊乱，细胞脱失显着，细胞核体积小、深染，固缩为三角形或多角形，神经纤维排列紊乱，与单纯缺血组相比，缺血治疗组脑组织损害程度明显减轻；（4）各组大鼠脑海马组织CHAT的表达：应用图像分析系统分析CHAT阳性产物的平均灰度值，与假手术组比较，缺血组和缺血治疗组大鼠海马CA1区CHAT灰度值均有明显减少（P＜0.01）；与缺血治疗组比较，缺血组CHAT的灰度值下降更为明显（P＜0.01）：（5）各组大鼠脑海马组织突触素的表达：应用图像分析系统分析突触素阳性产物的平均灰度值，与假手术组比较，缺血组和缺血治疗组大鼠海马CA1区突触素的灰度值均有明显减少（P＜0.01）；与缺血组相比，治疗组突触素的灰度值明显增加，差异有统计学意义（P＜0.01）；（6）nNOS的免疫组化：缺血组nNOS的阳性神经元明显低于其他各组（P＜0.01）；缺血治疗组脑内nNOS的表达较缺血组显着升高（P＜0.01）；结论（1）苯甲酸雌二醇可以改善慢性脑缺血大鼠的认知功能障碍；（2）苯甲酸雌二醇可以减轻慢性脑缺血大鼠海马CA1区神经元的损伤；（3）苯甲酸雌二醇可通过提高ACH、NO、突触素的含量改善慢性脑缺血大鼠的认知障碍。

孟秀梅^[7]（2006）在《山莨菪碱对酒精诱导大鼠脑损伤CB和GFAP表达的影响》文中提出研究的目的及意义:酒精中毒和酒精滥用对人类健康的危害正成为日益严重的社会问题。酒精中毒者多出现不同程度的学习和记忆障碍,甚至痴呆。酒精诱导脑损伤是研究老年痴呆症等神经退行性疾病（neurodegenerative diseases,ND）时记忆障碍公认的动物模型。而山莨菪碱对酒精诱导脑损伤的细胞保护作用,尚无定论。本研究旨在通过酒精诱导脑损伤模型来模拟建立ND产生的神经病理变化及学习、记忆改变,探讨其损伤机理以及山莨菪碱这一细胞保护剂对酒精诱导脑损伤的治疗作用。 主要内容:1.动物模型的建立:Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠,共72只,随机分成生理盐水（normal saline,NS）组、酒精（ethonal,EtOH）组、山莨菪碱（Anisodamine,An）组、山莨菪碱+酒精（Anisodamine+ethonal,An+EtOH）组。在EtOH组,给予20%酒精溶液2g/kg/d,腹腔内（intraperitoneal,ip.）注射,连续给药8d。2.观察大鼠的体重及Morris水迷宫行为的改变。3.应用免疫组织细胞化学方法和western印迹技术分析大鼠海马结构的神经元内维生素D依赖性钙结合蛋白D28k（Calbindin-D28k,CB）和神经胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein, GFAP）表达的变化。4.山莨菪碱对酒精诱导脑损伤的治疗作用。 结果:1.Morris水迷宫行为测定:（1）寻找平台的潜伏期时间:EtOH组显着高于NS组、An组、An+EtOH组,P<0.05。（2）寻找平台的游泳距离:EtOH组显着长于NS组、An组、An+EtOH组,P<0.05,An+EtOH组高于An组,但差异无显着性意义,P>0.05。2.免疫组织细胞化学方法的分析:（1）CB表达的变化:在海马CA1、CA3和齿状回（dentate gyrus,DG）区,EtOH组CB表达阳性的神经元平均灰度值略有降低,但与NS组、An组、An+EtOH组比较,差异无显着性意义,P>0.05。（2）GFAP表达的变化:①阳性神经胶质细胞计数分析:在海马CA1、CA3区,EtOH组较Ns组、An组、An+EtOH

贾晓静^[8]（2006）在《雌激素与ApoE的关系及其在阿尔茨海默病中作用机制的研究》文中指出阿尔茨海默病（AD）已经成为严重危害人类健康的常见疾病,并引起医学工作者的极大关注,对其发病机制的研究成为热点。伴随着分子遗传学的飞速发展,AD发病机制的研究也得到了迅猛发展,逐渐揭示了ApoE与AD的关系,并提出ApoE4是其发病的高危因素。近年来流行病学的调查研究发现,老年女性的发病率明显高于同龄男性,故推测雌激素可能是导致AD发病的因素,随后的大量研究从不同角度阐述了雌激素的保护作用。作为与AD发病关系极其密切的两个因素——ApoE和雌激素,目前国内、外对两者之间的关联研究甚少,且观点不一。为此,本实验利用皮下注射半乳糖（D-gal）制造AD动物模型,然后将其去卵巢,再给予雌激素干预,采用免疫组化和原位杂交的方法,观察雌激素水平变化时脑内胆碱能神经系统和ApoE的变化,从细胞和蛋白质水平证实了两者之间存在正相关,即雌激素水平升高时ApoE升高,雌激素水平降低时ApoE降低。然后再利用ApoE基因敲除鼠进一步探讨雌激素的可能作用机制,结果发现:在ApoE基因缺失的情况下,雌激素对ApoE基因敲除鼠没有神经保护作用。由此可见,雌激素的保护作用是通过ApoE依赖机制实现的。

余日跃^[9]（2004）在《雌激素水平低下对学习记忆的影响与益智方的作用及作用机理研究》文中提出众所周知,当人的年龄超过 40 岁后,随着年龄的增加,学习记忆力普遍下降,这给人们的学习、工作和生活带来无限的烦恼和痛苦。因而研究这种中老年增龄性学习记忆力减退的原因及提出防治措施,对于日益走向老龄化的当今社会有重要的现实意义。 学习记忆力的衰老性下降与神经元的损伤或失去保护作用有密切的关系。研究认为,雌激素具有抗氧化和神经营养作用,可减轻神经细胞的损伤或对神经细胞提供保护。临床观察指出,中老年女性在卵巢萎缩、性功能减退、内分泌紊乱甚至绝经的同时往往伴有明显的记忆力减退,而补肾类中药大多在明显增强生殖功能的作用的同时具有显着的促智作用。补肾中药益智的确切作用机理并未完全研究清楚,有些补肾中药具有雌激素样作用,有些则具有促进雌激素生成的作用,众多研究主要围绕下丘脑-垂体-性腺轴展开,并取得了可喜的成果。芳香化酶是雌激素的合成限速酶,除在性腺大量存在外,在脂肪、乳腺等组织中也有分布,最近研究发现,在与学习记忆相关的脑区也有广泛分布。芳香化酶在衰老性记忆力减退过程中扮演什么角色、是否参与补肾作用或促智过程,值得深入开展研究。 1 目的 本研究根据上述假设,运用芳香化酶抑制剂使动物脑内处于低雌激素状态,然后运用行为学方法、电生理技术和形态学手段,考察动物的学习记忆能力及相关指标,为建立一种学习记忆障碍模型动物奠定基础。 根据中医补肾益智的学说,对具有明显的促智作用的中医复方进行筛选,从行为学、神经病理学、细胞、内分泌等多方面,着力观察补肾复方对雌激素及其合成酶——芳香化酶的影响,以便阐明该类复方改善中老年增龄性记忆减退的作用及其作用机理。 2 材料与方法2.1 低雌激素动物模型的建立 3 月龄雌性 SD 大鼠,随机分为假手术组（sham）、去卵巢组（OVX）和去卵巢加用依西美坦（OVX+EXE）组,每组 20 只,除假手术组外,各大鼠均摘除双侧卵巢,依西美坦组大鼠按 60mg·kg-1皮下注射,假手术组和去卵巢组皮下注射同容积的溶剂,每三日一次,共给药30d。然后运用跳台法、避暗法和 Morris 水迷宫法观察对动物学习记忆能力的影响。行为学实验结束次日,取一半动物作脑切片,4%多聚甲醛灌注取材,常规石蜡切片,沿海马横轴垂直方向连续冠状切片。按 SP 法作芳香化酶免疫组织化学染色,观察芳香化酶的表达及大致分布。 另一半动物分别用同位素法测血浆和脑内雌激素的含量。用预冷的含有 5%乙醇的生理盐水与脑组织充分匀浆后,离心,取上清。再用碱性二氯甲烷萃取,吹干。次日,以 0.1mL95%乙醇溶解,最终定容至 0.5mL,并按试剂盒要求进行测定。血清雌激素含量测定,在上述大鼠断头时取动脉血,4℃冰箱放置过夜,次日,离心,取 200μL 血清,按试剂盒要求进行测定。按试剂盒方法测大脑皮层 AchE、NE 和 DA。<WP=6>iv 脑雌激素低下对学习记忆的影响及益智方的作用与作用机制研究2.2 益智方的筛选 运用混料均匀设计法对益智方进行拆方分析,考察方中各类药对上述模型小鼠学习记忆行为的影响。益智方由安神（X1）、补肾（X2）、健脾（X3）三类中药组成,以这三类中药作为考察因素,选择均匀设计表 U5（52）,配制 5 种不同的复方,每个水平不重复出现。取80 只雌性小鼠,70 只摘除卵巢,10 只作假手术。10d 后对去卵巢存活小鼠进行阴道涂片,取阴道角化细胞阴性持续 7d 者供实验用,饲养 20 周后,取其中 40 只,随机分为 5 组,每组 8只作为 5 个复方给药组,按 15g 生药·kg-1剂量灌胃给药;另取其中 20 只分为 2 组,每组 10只,分别为模型组和雌二醇组,假手术 10 只作对照组,前者按 0.2mg·kg-1给小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇,4 日一次,后者以 5%吐温-80 替代药物灌胃,每日一次,各组均连续给药 32d。通过去卵巢小鼠在 Morris 水迷宫中的行为学变化,测试小鼠用药后的学习记忆能力,并筛选出最佳配比和配方。2.3 益智方对模型大鼠的保护作用及机制 大鼠造模的同时灌胃梯度剂量（ig,7.5、15g 生药·kg-1·d-1）的益智方药,阳性对照组为苯甲酸雌二醇（sc,0.2mg·kg-1·4d-1）,假手术组和模型组给 5%吐温。给药 35d 后,观察记录各组大鼠在跳台实验、避暗实验和 Morris 水迷宫实验中的行为变化。行为学实验结束次日,仿前述方法,进行血浆和脑内雌激素、AchE、NE 和 DA 的含量的测定。 将麻醉大鼠固定于立体定位仪上,双极刺激电极的位置为内嗅区前穿质通路,其定位坐标为 AP-6.8mm,L4.2mm,H3.5mm,记录电极坐标为 AP-3.5mm,L2.0mm,H3.0mm,位于同侧海马齿状回颗粒细胞层,以固定强度的刺激诱发出最大群峰电位（PS）。记录间隔为每30s 记录一次,测试刺激频率 1/30Hz、波宽 0.1ms、时间常数为 0.001s,高通滤波为 10KHz。记录 PS 幅值,作为 DG 颗粒细胞群兴奋性的指标。高频刺激（high frequent stimulate,HFS）由 10 串 100Hz、每串 5 个波宽 0.1ms 的方波刺激组成,刺激间隔为 200ms,刺激强度与单个测试刺激相同。观察 PS 幅度、峰潜伏期,LTP 诱发成功率、高频刺激的效应,从电生理学角度研究麻醉模型大鼠的突触传递活动,以及益智方对大鼠突触传递活动的?

王荣霞^[10]（2004）在《首乌益智灵治疗血管性痴呆的临床和实验研究》文中指出目的：研究首乌益智灵治疗血管性痴呆（VD）的效果及疗效机理，探讨VD的发病机制。方法：设计临床方案观察首乌益智灵对VD患者认知能力、记忆力、日常生活能力、临床症状、血液流变学、脑血管平均血流速度的疗效并进行安全性检测。运用动物实验进一步观察首乌益智灵对VD的疗效及其作用机理。测定首乌益智灵对大鼠学习记忆能力，脑组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量，脑组织海马区神经元形态，及钙结合蛋白阳性神经元表达的影响。结果：用首乌益智灵治疗后，患者MMSE、ADL、HDS、WMS量表成绩较治疗前明显好转（P<0． 05，P<0． 0 1） 。血液流变学指标、脑血管平均血流速度及临床症状较治疗前有明显改善（P<0． 05，P<0． 01） 。临床总有效率为83． 3％。动物实验结果：首乌益智灵组大鼠的定位航行和空间探索试验测试成绩明显好于模型组和脑复康组，脑组织中SOD活性显着提高，MDA含量显着降低（P<0． 05，P<0． 01） 。大鼠脑组织海马HE染色结果显示：首乌益智灵组海马CAl区神经元细胞形态规则，无明显缺血坏死表现。免疫组化染色结果表明：首乌益智灵组海马CAl区钙结合蛋白阳性神经元与模型组和脑复康组相比，有较多表达（P<0． 05，P<0． 01） 。结论：首乌益智灵能明显改善VD患者及VD模型大鼠智能。改善VD患者的血液流变学、脑血管平均血流速度和临床症状。能有效清除自由基，减少脂质过氧化物形成，拮抗过氧化损伤。对海马神经元的缺血性损伤有保护作用，能增加海马区钙结合蛋白阳性神经元的表达。

二、雌激素对2VO-OVX大鼠脑钙结合蛋白阳性神经元的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、雌激素对2VO-OVX大鼠脑钙结合蛋白阳性神经元的影响（论文提纲范文）

（1）青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制（论文提纲范文）

（2）有氧运动对慢性脑缺血小鼠的PI3K/AKT信号通路的影响（论文提纲范文）

（3）当归对血管性认知损害的保护作用及其与成体神经发生的关系（论文提纲范文）

（4）微量醋酸亮丙瑞林对雌性大鼠性腺轴调节作用的研究（论文提纲范文）

（5）不忘散对去卵巢大鼠脑认知功能影响的实验研究（论文提纲范文）

（6）苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠的保护作用研究（论文提纲范文）

（7）山莨菪碱对酒精诱导大鼠脑损伤CB和GFAP表达的影响（论文提纲范文）

（8）雌激素与ApoE的关系及其在阿尔茨海默病中作用机制的研究（论文提纲范文）

（9）雌激素水平低下对学习记忆的影响与益智方的作用及作用机理研究（论文提纲范文）

（10）首乌益智灵治疗血管性痴呆的临床和实验研究（论文提纲范文）

四、雌激素对2VO-OVX大鼠脑钙结合蛋白阳性神经元的影响（论文参考文献）

• [1]青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制[D]. 方迎艳. 华中科技大学, 2018(01)
• [2]有氧运动对慢性脑缺血小鼠的PI3K/AKT信号通路的影响[D]. 张钟元. 湖南师范大学, 2017(01)
• [3]当归对血管性认知损害的保护作用及其与成体神经发生的关系[D]. 辛佳蔚. 武汉大学, 2014(06)
• [4]微量醋酸亮丙瑞林对雌性大鼠性腺轴调节作用的研究[D]. 沈钦华. 北京中医药大学, 2010(12)
• [5]不忘散对去卵巢大鼠脑认知功能影响的实验研究[D]. 李辉. 山东大学, 2008(12)
• [6]苯甲酸雌二醇对慢性脑缺血大鼠的保护作用研究[D]. 张燕平. 郑州大学, 2007(04)
• [7]山莨菪碱对酒精诱导大鼠脑损伤CB和GFAP表达的影响[D]. 孟秀梅. 中国人民解放军军医进修学院, 2006(09)
• [8]雌激素与ApoE的关系及其在阿尔茨海默病中作用机制的研究[D]. 贾晓静. 吉林大学, 2006(11)
• [9]雌激素水平低下对学习记忆的影响与益智方的作用及作用机理研究[D]. 余日跃. 北京中医药大学, 2004(01)
• [10]首乌益智灵治疗血管性痴呆的临床和实验研究[D]. 王荣霞. 山东中医药大学, 2004(04)

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